反相高效液相-荧光色谱法测定美托洛尔及其代谢物α-羟基美托洛尔血浆尿液药物浓度

目的建立人血浆及尿液中美托洛尔及α-羟基美托洛尔的高效液相-荧光色谱法。方法以比索洛尔为内标,采用Agilent ZORBA×SB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:乙腈-0.05mol/LpH3.5磷酸二氢钾三乙胺水溶液(0.3%三乙胺)(90∶10);流速1ml/min;荧光检测器:激发波长(Ex):216nm,发射波长(Em):312nm。结果血浆中美托洛尔在10～400ng/ml范围内(r=0.999),α-羟基美托洛尔在5～360ng/ml范围内(r=0.9991)线性良好。其绝对回收率分别为89%～98%和77%～94%,相对回收率分别为94%～106%和95%～99%。精密度:日内RSD分别<5.8%和9.3%,日间RSD分别<8.0%和9.0%;尿液中美托洛尔在10.0～4000ng/ml范围内(r=0.999),α-羟基美托洛尔在5～2400ng/ml范围内(r=0.9991)线性良好。其绝对回收率分别为90%～95%和79%～92%,相对回收率分别为96%～101%和93%～103%。精密度,日内RSD分别<8.9%和6.6%,日间RSD分别<8.3%和7.7%;均符合药代动力学研究要求。结论用该法研究中国健康成年志愿者口服美托洛尔的体内药物代谢,及研究中国人群CYP2D6基因多态性与美托洛尔代谢的关系灵敏、可靠、实用。

中国人群CYP2D6基因多态性对美托洛尔药代动力学的影响

目的：研究中国人群CYP2D6基因多态性对美托洛尔药代动力学的影响。方法：使用基因芯片技术测定中国健康志愿者CYP2D6的基因型,按照分型结果将志愿者分为四组,第1组：CYP2D6＊2W＊10W,第2组：CYP2D6＊2H＊10W或CYP2D6＊2M＊10W,第3组：CYP2D6＊2M＊10H,第4组：CYP2D6＊2M＊10M,每组筛选10人,共40人。各组志愿者单次口服100mg美托洛尔后,使用HPLC方法测定血和尿中美托洛尔及其代谢产物α-羟基美托洛尔（HM）的浓度,研究其在不同基因型志愿者体内的药代过程。结果：第2组美托洛尔及其HM的主要药动学参数与第1组相比均没有统计学差异。第3组美托洛尔的t1/2、AUC、Cmax显著高于第1组（P〈0.05）;而HM的t1/2延长47.3%,AUC降低56.0%（P〈0.05）。第4组美托洛尔的t1/2、AUC、Cmax均显著高于第1组（P〈0.05）和第3组（P〈0.05）;HM的t1/2、AUC、Cmax与第1组和第3组相比均有统计学差异（P〈0.05）,且呈现基因剂量效应。第3组和第4组的口服清除率和肾清除率均低于第1组,而0-24h代谢比率分别为第1组的1.82倍和3.96倍。结论：CYP2D6＊2对于美托洛尔的药代动力学过程没有影响;但CYP2D6＊10可降低酶活性,且CYP2D6＊10纯合子变异比杂合子变异对美托洛尔药代动力学的影响更大,呈现基因剂量效应。

汗液中美托洛尔及其代谢物的提取与检测

目的建立汗液中美托洛尔和α-羟基美托洛尔的提取与检测方法。方法汗液样品提取处理后采用Finnigan液相色谱仪串联LXQ离子阱质谱仪检测,流动相为乙腈-甲醇-0.1%甲酸水溶液（20∶20∶60,v/v/v）;质谱采用SRM模式,正离子模式监测。以美托洛尔含量为指标,考察采样方法,提取溶剂种类,提取客体种类及显现粉末种类对于汗液中药物提取效率的影响。结果采用甲醇湿润棉签采样。光滑客体的提取效率显著高于粗糙客体。显现粉末不同程度地干扰了药物的检出。单次口服25 mg美托洛尔后3-15 h仍可检出原药及代谢物。结论本方法适用于汗液中美托洛尔和α-羟基美托洛尔的提取与检测,可依据汗液中美托洛尔和α-羟基美托洛尔的检测对排汗人进行识别。

超高效液相色谱-质谱联用法同时测定人血浆中美托洛尔及其代谢物的浓度

目的建立超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)定量测定人血浆中美托洛尔及其代谢产物(α-羟基美托洛尔、O-去甲基美托洛尔)的方法。方法采用乙酸乙酯从100μL血浆中提取分析物及内标(d7-美托洛尔),色谱柱:UPLC HSS T3柱(3.0 mm×100 mm,1.8μm),柱温:30℃,流动相:5mmol·L^(-1)醋酸铵+0.2%甲酸与乙腈,梯度洗脱,流速:0.30 m L·min^(-1);质谱采用正离子模式(ESI),多反应监测模式进行检测。结果美托洛尔的标准曲线方程为y=1.56×10^(-1)x-4.80×10^(-2),在0.2~100.0 ng·m L^(-1)范围内线性关系良好,定量下限为0.2 ng·m L^(-1);α-羟基美托洛尔的标准曲线为y=1.06×10^(-1)x^(-1).30×10^(-2),在0.2~100.0 ng·m L^(-1)范围内线性关系良好,定量下限为0.2 ng·m L^(-1);O-去甲基美托洛尔的标准曲线为y=4.40×10^(-2)x^(-1).10×10^(-2),在0.1~50.0 ng·m L^(-1)范围内线性关系良好,定量下限为0.1ng·m L^(-1)。美托洛尔、α-羟基美托洛尔、O-去甲基美托洛尔的平均绝对回收率分别为64.7%,51.7%,55.4%。批间及批内精密度的相对标准差均小于15%,稳定性良好。该方法成功测定了90例服药患者的美托洛尔及其两种代谢产物的稳态血药浓度。结论该方法敏感,快速,血浆消耗量少,可用于临床用药监测及其相关研究。

银杏叶提取物对大鼠美托洛尔药动学的影响

目的:探讨银杏叶提取物对大鼠美托洛尔药动学的影响。方法:将大鼠随机分为美托洛尔组和美托洛尔联合银杏叶提取物组,美托洛尔组口服给予美托洛尔40 mg·kg^(-1),美托洛尔联合银杏叶提取物组口服给予银杏叶片28.8 mg·kg^(-1)(按黄酮醇苷量)和美托洛尔40 mg·kg^(-1)。给药后2,5,10,20,40,60,90,120,240,360,480,720 min股动脉采血,液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测定美托洛尔及代谢物血药浓度。结果:美托洛尔组联合灌胃给予银杏叶提取物与美托洛尔后,美托洛尔Ka和AUC0-t显著降低(P<0.05),tmax显著增加(P<0.05),美托洛尔代谢产物O-去甲基美托洛尔和α-羟基化美托洛尔AUC0-t显著增加(P<0.05),而CL显著减小(P<0.05)。结论:银杏叶提取物能够显著降低美托洛尔的血药浓度,抑制其代谢物O-去甲基美托洛尔和α-羟基化美托洛尔的清除。