新型抗冻剂海藻糖对低温保存皮肤组织α-辅肌动蛋白表达的实验研究

目的比较海藻糖与传统低温保护剂对皮肤组织α-辅肌动蛋白(α-actinin)低温保存后表达的影响,进一步揭示海藻糖的低温抗冻机制。方法实验共进行6次,每次取自愿捐献烧伤患者整形术后所余大腿部刃厚皮片5块,根据冻存时添加保存液不同,将皮片随机分为5组,每组各1块。T/D组:添加0.5mol/L海藻糖/DMSO,完全浸没皮片;D/P组:DMSO/丙二醇;D/K组:DMSO/无血清角质细胞培养基;DMEM组:DMEM;置于-196℃液氮中储存14d后复温进行实验;对照组:刃厚皮片不作任何处理。对各组皮片进行免疫组织化学染色观察,RT-PCR方法检测皮片α-actinin基因水平,皮肤内琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)定量测定法检测皮肤活力。结果对照组、T/D组、D/P组、D/K组及DMEM组吸光度(A)值分别为27.50±7.92、18.40±5.81、13.10±5.11、11.50±4.54及5.30±2.14。对照组与T/D组比较差异无统计学意义(P>0.05),与其他组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测对照组、T/D组、D/P组、D/K组及DMEM组α-actinin基因表达A值分别为0.816±0.134、0.723±0.245、0.564±0.265、0.245±0.071及0.148±0.048。对照组与T/D、D/P组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与D/K、DMEM组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、T/D组、D/P组、D/K组及DMEM组SDH活性值分别为18.2±3.7、12.3±3.6、10.2±2.4、7.3±2.1及5.7±1.5。对照组与T/D组比较差异无统计学意义(P>0.05),与其他组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论海藻糖对低温保存皮肤组织α-actinin的保护作用在其抗冻机制中发挥了重要作用。

辛伐他汀对慢性心力衰竭兔α-辅肌动蛋白2的影响

目的观察辛伐他汀对慢性心力衰竭(CHF)兔α-辅肌动蛋白2(α-actinin2)表达的影响。方法雄性大耳白兔45只,随机分为正常对照组、CHF模型组和辛伐他汀治疗组。CHF模型组及辛伐他汀治疗组注射盐酸阿霉素2 mg·kg-1,每周1次,连续10周,建立慢性心力衰竭模型;正常对照组给予相同容量的生理盐水。辛伐他汀治疗组在首次注射盐酸阿霉素时给予辛伐他汀,剂量为1.5 mg·kg-1·d-1,持续至第12周;CHF模型组和正常对照组给予相同容积的生理盐水灌胃12周。心脏彩色超声测量兔左心室结构和功能。处死动物留取左心室室壁观察心肌细胞结构的变化,免疫组织化学染色后检测α-actinin2表达水平。结果与正常对照组比较,辛伐他汀治疗组、CHF模型组的左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)明显增大,左心室射血分数(LVEF)明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与CHF模型组比较,辛伐他汀治疗组LVESD、LVEDD减小,LVEF升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,辛伐他汀治疗组、CHF模型组α-actinin2表达明显减少(P<0.05),辛伐他汀治疗组与CHF模型组相比表达明显增多(P<0.05)。结论辛伐他汀可明显改善CHF兔左心室重塑,提高其心功能,其机制可能与增加α-actinin2表达有关。

儿童原发性肾病综合征α-辅肌动蛋白4mRNA表达的临床意义

目的探讨在儿童原发性肾病综合征中α-辅肌动蛋白4(α-actinin-4)mRNA表达及其意义。方法经肾活检获取34例原发性肾病综合征患儿(病例组)的肾组织,其中局灶节段硬化性肾小球肾炎(FSGS)21例、微小病变(MCNS)6例、系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)7例;另外,12例对照组标本取自肾肿瘤切除术后肿瘤周边的正常组织。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR)的方法检测每份肾组织中α-actinin-4 mRNA表达,同时分析FSGS患儿中mRNA表达与24 h尿蛋白、内生肌酐清除率(Ccr)的相关性。结果 FSGS组α-actinin-4 mRNA表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而MCNS组和MsPGN组α-actinin-4 mRNA表达与正常对照组的差异均无统计学意义(P>0.05)。在FSGS组中,表现为肾炎型肾病(伴发镜下血尿)患儿的α-actinin-4 mRNA表达明显高于表现为单纯性肾病的患儿,差异有统计学意义(P<0.05);FSGS患儿α-actinin-4mRNA表达量与24 h尿蛋白及Ccr无相关性(P>0.05)。结论在儿童原发性肾病综合征中,α-actinin-4 mRNA表达量增高可能是促进肾小球足细胞骨架修复的因素之一;该骨架分子的mRNA表达变化与病程及病理类型相关。

糖尿病大鼠肾脏α-辅肌动蛋白-4表达变化及作用机制

目的:动态观察肾小球足细胞骨架蛋白α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)在糖尿病大鼠模型肾组织中表达的变化,探讨α-actinin-4与蛋白尿发生的关系及导致其出现变化的可能机制。方法:将SD大鼠随机分为两组:对照组及糖尿病组,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,分别于2、4、6、8周末检测每组大鼠24h尿蛋白定量并处死大鼠留取肾标本。电镜观察足细胞超微结构的变化;应用酶免法检测肾组织糖基化终产物(AGEs)的含量;应用免疫组化及Western-blot检测α-actinin-4蛋白的表达;RT-PCR检测α-actinin-4mRNA表达量的变化。结果:6周糖尿病组大鼠24h尿蛋白明显高于对照组(P<0.01),增高持续到8周(P<0.01);透射电镜显示8周糖尿病组大鼠足突出现节段性融合;从4周时糖尿病组大鼠肾组织AGEs含量明显升高(P<0.05),并持续到8周(P<0.01);与对照组相比,从4周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4蛋白表达明显降低(P<0.05),并持续到8周(P<0.05);与对照组相比,从2周时糖尿病组大鼠肾组织α-actinin-4mRNA表达明显降低(P<0.05),并持续到8周(P<0.01)。结论:α-actinin-4表达降低参与了糖尿病大鼠蛋白尿的发生,而AGEs可能是导致α-actinin-4表达下调的原因之一。

α-辅肌动蛋白4及其与肾脏疾病关系的研究进展

α-辅肌动蛋白4是由ACTN4基因编码的辅肌动蛋白家族成员之一,广泛表达于各种组织或器官,在肾脏中其主要表达于肾小球足细胞。α-辅肌动蛋白4与去氧肾上腺素、足突蛋白和CD2相关蛋白等的相互作用共同维系肾小球足细胞正常结构及功能。多种肾脏疾病存在ACTN4基因突变及α-辅肌动蛋白4表达、分布异常。本文主要就α-辅肌动蛋白4对肾脏疾病的影响以及在治疗中的应用研究进展做一综述。

α-辅肌动蛋白与棕榈酸和甘油二脂的相互作用

为了探讨α－ 辅肌动蛋白与甘油二酯（ＤＧ）／ 棕榈油酸（ＰＡ） 的作用机制，利用荧光能量转移、酶切及ＦＴＩＲ 等方法研究了α－ 辅肌动蛋白与ＤＧ／ＰＡ 的作用特性及其构象变化。结果表明，α－ 辅肌动蛋白与外源ＰＡ 有较弱的结合， 且它们的结合具有较强的协同性； 高浓度的ＤＧ 对α－ 辅肌动蛋白与ＰＡ 的结合有一定促进作用。此外，与ＰＡ 结合后α－ 辅肌动蛋白酶切图谱发生了较大变化，其中央区两端的酶切位点受到较强的保护；ＤＧ 可以进一步延长α－ 辅肌动蛋白酶切的保护作用。ＦＴＩＲ 研究表明与ＰＡ 和ＤＧ／ＰＡ 脂质体结合后，α－ 辅肌动蛋白二级结构发生较大变化：结合ＰＡ 后，α－ 辅肌动蛋白部分α－ 螺旋结构转变为β－ 折叠结构；而ＤＧ 可进一步诱导β－

嘌呤霉素损伤小鼠肾小球足细胞系中足细胞α-辅肌动蛋白4的表达与分布

目的观察嘌呤霉素（PAN）对足细胞α-辅肌动蛋白4（α-actin-4）mRNA表达和分布的影响，探讨α-actin-4与足细胞损伤的关系。方法将体外培养肾小球足细胞系（MPC5）随机分为实验组与对照组。实验组采用PAN刺激（剂量为50mg／L），分别于8h、24h和48h观察细胞形态，提取总RNA和细胞免疫组织化学观察α-actin-4的分布。对照组用100mL／LFBS的RPMI1640培养液培养。应用Image J图像软件处理细胞图像，计算2组随机选择的30个细胞在上述3个时间点200倍镜下的细胞相对面积，实时定量荧光聚合酶链反应（RT—PCR）和间接免疫荧光法检测α-actin-4mRNA表达和分布变化。结果对照组足细胞生长情况良好，胞体呈不规则星形，与增殖状态足细胞比较，细胞体和细胞核均显著增大，自胞体伸出树枝样突起，相邻细胞问足突相互连接。实验组细胞胞体缩小，足突回缩、消失，细胞间失去相互连接。2组间α-ctin-4mRNA各时间点表达比较，8h差异无统计学意义（P＞0．05），24h、48h差异有统计学意义（P均＜0．01），实验组在24h、48h后α-actin-4mRNA表达升高。对照组α-actin-4在胞质内呈细丝状均匀分布，在足突中呈放射状分布；8h后在实验组α-actin-4压力丝纤维变短，排列紊乱，PAN刺激24h后细胞质中α-actin-4分布明显减少，刺激48h后出现细胞质分布缺失。结论α-actin-4表达分布的异常与PAN损伤足细胞的时间呈正相关，α-actin-4是足细胞损伤机制中的一个重要分子。

缺血／再灌注损伤对乳鼠肾小管上皮细胞α-辅肌动蛋白表达和分布变化的影响

目的通过研究缺血／再灌注不同时段α-辅肌动蛋白(α-actinin)在乳鼠肾小管上皮细胞 (RETs)中分布变化,探讨α-actinin在肾脏缺血／再灌注损伤中所起作用。方法取出生14d的SD大鼠, 采用先钳夹单侧肾动脉再松开的方式,建立不同时段肾脏缺血／再灌注模型,并设立正常对照组。应用免疫荧光法检测α-actinin在RETs上的分布和表达,并分析、计算各组α-actinin的阳性表达量。然后,对所得数据使用SPSS统计软件做方差分析。结果正常对照组α-actinin主要集中分布在RETs基底膜附近和管腔面附近的胞浆中。缺血0．5h组,管腔面附近的α-actinin明显减少,基底膜附近可见α-actinin染色。再灌注2h组,管腔面附近的α-actinin消失,基底膜附近的α-actinin也减少,其连续性遭到破坏。再灌注120h 组,α-actinin在基底膜附近的分布与正常对照组比较差异无显著意义,在管腔面附近仍有分布和对照组比较,差异仍然无显著意义。在基底侧,再灌注2h组α-actinin的表达量明显低于对照组,差异有显著意义 (P<0．05)。缺血0．5h组和再灌注120h组α-actinin的表达量和对照组相比,差异无显著性意义(P> 0．05)。在管腔侧,缺血0．5h组、再灌注2h组和再灌注120h组α-actinin的表达量,均明显低于对照组,差异有显著意义(P<0．05)。结论α-actinin正常情况下,分布于RETs基底侧和管腔侧。缺血／再灌注损伤使其表达和分布减少,这可能导致微绒毛的破坏和整合素的去极化而影响肾功能。

黄鳍鲷骨骼肌α-辅肌动蛋白的分离纯化及抗体制备

目的:黄鳍鲷骨骼肌α-辅肌动蛋白的分离纯化及多克隆抗体制备。方法:采用低温抽提、硫酸铵分级沉淀及两次DEAE-Sepharose离子交换等方法获得α-辅肌动蛋白,并通过免疫大鼠制备了抗α-辅肌动蛋白多克隆抗体。结果:经SDS-PAGE检测得到高纯度的α-辅肌动蛋白,分子质量约为100kDa。Westernblot检测结果显示,制备的多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性。结论:从海水黄鳍鲷骨骼肌中得到高度纯化的α-辅肌动蛋白,并制备了滴度高、特异性好的多克隆抗体,为研究鱼类保鲜储藏过程中α-辅肌动蛋白的分解变化提供了重要的手段。

α-辅肌动蛋白4在糖尿病肾病大鼠蛋白尿产生中的作用

糖尿病肾病蛋白尿的形成有多种因素，足细胞病变在其中起着重要的作用。α-辅肌动蛋白（actinin）．4是足细胞上一种辅肌动蛋白，对于维持足细胞的正常结构及功能起关键作用。本研究利用糖尿病肾病大鼠模型在蛋白尿的发生、发展过程中动态观察α-actinin．4表达的变化，并初步探讨导致其变化的可能机制。

他克莫司对嘌呤霉素损伤的足细胞中α-辅肌动蛋白-4表达的影响

目的研究他克莫司( FK506)和嘌呤霉素( PAN)对肾小球足细胞凋亡和α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)mRNA及蛋白表达的影响,探讨FK506对足细胞的保护作用.方法体外培养小鼠肾小球足细胞,设置对照组、PAN组和FK506组,处理8 h、24 h、48 h后观察细胞形态,检测细胞凋亡率,并收集细胞进行实时荧光定量-PCR、Western blot检测α-actinin-4的mRNA及蛋白表达情况.结果 PAN组各时间段胞体面积较对照组明显缩小,FK506组胞体面积较PAN组增大.8 h时各组间足细胞凋亡率无明显差异(均P>0. 05);24 h及48 h时PAN组足细胞凋亡率[(8. 21 ± 0. 41)%、(16. 32 ± 0. 17)%]较对照组[(4. 28 ± 0. 35)%、(6. 27 ± 0. 28)%]明显升高,差异均有统计学意义(均P<0. 05),FK506组足细胞凋亡率[(6. 26 ± 0. 24)%、(13. 32 ± 0. 24)%]均明显低于PAN组,差异均有统计学意义(均P<0. 05).8 h时各组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达无明显差异(均P>0. 05),24 h、48 h 时PAN组mRNA(2. 42 ± 0. 21、3. 78 ± 0. 25)和蛋白(0. 77 ± 0. 04、1. 22 ± 0. 10)表达量较对照组mRNA(1. 50 ± 0. 22、2. 15 ± 0. 15)和蛋白(0. 44 ± 0. 03、0. 83 ± 0. 07)显著增高,差异均有统计学意义(均P<0. 01);FK506组mRNA(1. 65 ± 0. 24、1. 70 ± 0. 32)和蛋白(0. 52 ± 0. 05、0. 56 ± 0. 07)表达量均明显低于PAN组,差异均有统计学意义(均P<0. 05).结论 FK506可有效抑制PAN对足细胞的损伤作用,稳定α-actinin-4的表达,为临床应用FK506治疗肾小球疾病提供依据.

糖尿病肾病患者肾小球中α-辅肌动蛋白-4和肾病蛋白的表达及其临床意义

目的通过检测α-actinin-4mRNA和nephrinmRNA在糖尿病肾病（DN）患者肾小球组织中的表达，探讨其在糖尿病肾病患者蛋白尿发生中的作用。方法用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测α-actinin-4mRNA和nephrinmRNA在测糖尿病肾病组、单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组患者肾小球组织中的表达。结果糖尿病肾病组nephrinmRNA表达显著低于单纯糖尿病、单纯血尿组及对照组，糖尿病肾病组α-actinin-4mRNA表达显著低于单纯糖尿病、单纯血尿组及对照组，两者表达存在正相关。结论糖尿病肾病患者肾小球组织nephrin和α-ctinin-4mRNA的表达减少，导致蛋白尿的产生。

六味地黄汤对阿霉素肾病小鼠尿蛋白及肾小球p-p38 MAPK、α-actinin-4、synaptopodin的影响

目的探讨六味地黄汤对阿霉素肾病(adriamycin nephropaghy,ADRN)小鼠尿蛋白的干预作用及可能机制。方法30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机选取5只为空白组,余下小鼠以单次尾静脉注射阿霉素(0.01 g·kg^(-1))复制ADRN模型,2周后将造模成功的小鼠随机分为模型组、贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组,每组5只。空白组、模型组予等体积注射用水灌胃,贝那普利组予0.0013 g·kg^(-1)贝那普利灌胃,低、中、高剂量六味地黄汤组分别予9.75、19.5、39 g·kg^(-1)六味地黄汤灌胃,每日1次,连续8周。自动生化仪检测小鼠24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清钾;HE染色法、电镜观察小鼠肾脏病理改变及足突形态;免疫组织化学法、Western bolt检测小鼠肾脏磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)、α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、突触孔蛋白(synaptopodin)的表达;RT-PCR检测小鼠肾脏α-actinin-4、synaptopodin mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、24 h尿量、血清白蛋白降低,24 h尿蛋白定量升高(P<0.05);肾小球系膜细胞增生,部分系膜区扩大、肾小管蛋白管型,间质可见炎性细胞浸润,足突广泛融合;α-actinin-4蛋白及mRNA、p-p38 MAPK蛋白表达升高(P<0.05),synaptopodin蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,各干预组病理改变及足突融合均得到不同程度改善,贝那普利组及中、高剂量六味地黄汤组24 h尿蛋白定量减少,高剂量六味地黄汤组p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),低、中、高剂量六味地黄汤组synaptopodin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组组间比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论六味地黄汤可能通过抑制p38 MAPK通路活化和上调α-actinin-4、synaptopodin蛋白及mRNA表达,改善肾脏病理及足突融合,减轻足细胞损伤,减少ADRN小鼠尿蛋白。

pH值及Na^+诱导α^-辅肌动蛋白构象变化

用ＦＴＩＲ研究了不同浓度ＮａＣｌ溶液中α－辅肌动蛋白二级结构的变化。实验结果发现，在不同ＮａＣｌ浓度下，α－辅肌动蛋白至少具有三种不同的构象：低盐（３０－９０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ），中盐（１５０ｍｍｏｌ／Ｌ－２５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）与高盐（３００－５００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）构象。在低盐溶液中，α－辅肌动蛋白含有较高比例的α－螺旋结构（３３－３４％），随着溶液中钠盐浓度的升高部分α－螺旋结构转变为β－转角或β－折叠结构。此外还研究了ｐＨ诱导α－辅肌动蛋白构象的变化，定量分析结果表明在ｐＨ７．０和中盐条件下（α－辅肌动蛋白交联Ｆ－ａｃｔｉｎ成束的活性最高），α－辅肌动蛋白β－转角结构含量最高，而α－螺旋结构含量较低。由此可见，β－转角结构在α－辅肌动蛋白交联肌动蛋白成束中可能具有重要的功能。

miR-369-3p靶向α-辅肌动蛋白4调控肝癌细胞增殖和凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA miR-369-3p靶向调控α-辅肌动蛋白4(ACTN4)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法分别检测肝癌及癌旁组织中miR-369-3p、ACTN4的表达水平。采用脂质体法将miR-369-3p mimics、miR-NC、si-ACTN4、si-NC转染至肝癌MHCC97H细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,双荧光素酶报告实验验证miR-369-3p对ACTN4的靶向调控作用,Western blot法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达。结果肝癌组织中miR-369-3p mRNA的表达水平为0.46±0.04,低于癌旁组织(1.00±0.08,P<0.001);ACTN4 mRNA的表达水平为3.12±0.29,高于癌旁组织(1.01±0.09,P<0.001);ACTN4蛋白的表达水平为0.61±0.06,高于癌旁组织(0.25±0.03,P<0.001)。与miR-NC组细胞比较,miR-369-3p过表达肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.71±0.06和1.26±0.11,P<0.001),G1期细胞比例升高[分别为(51.56±5.23)%和(31.14±3.36)%,P<0.001],S期细胞比例降低[分别为(14.33±1.45)%和(32.44±3.56)%,P<0.001)],细胞凋亡率升高[分别为(20.16±2.11)%和(6.25±0.64)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量降低(均P<0.001),p21和Bax蛋白相对表达量升高(均P<0.001)。与si-NC组比较,抑制ACTN4的表达后,肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.78±0.07和1.24±0.12,P<0.001),G1期细胞比例升高[分别为(48.69±4.21)%和(30.33±3.01)%,P<0.001],S期细胞比例降低[(分别为18.54±1.61)%和(36.21±3.42)%,P<0.001],细胞凋亡率升高[分别为(18.32±1.82)%和(6.58±0.66)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.001),p21和Bax蛋白水平升高(均P<0.001)。与miR-369-3p+pcDNA组比较,过表达ACTN4后,肝癌MHCC97H细胞增殖能力提高(细胞培养72 h吸光度分别为1.12±0.11和0.68±0.06,P<0.001),G1期细胞比例显著降低[(38.81±3.24)%和(51.80±4.57)%,P<0.001],S期细胞比例显著升高[(31.65±3.11)%和(15.69±1.44)%,P<0.001],细胞凋亡率降低[分别为(13.86±1.37)%和(22.69±2.24)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量升高(均P<0.001),p21和Bax蛋白相对表达量降低(均P<0.001)。结论miR-369-3p可通过靶向调控ACTN4的表达使肝癌细胞周期阻滞于G1期,抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。

整合蛋白β3近膜端α螺旋中的E726Q突变影响细胞膜与肌动蛋白皮质层相互作用继而诱导细胞膜形成突起小泡

整合蛋白β亚基胞浆段近膜端α螺旋在与诸多蛋白如踝蛋白(talin)、α-辅肌动蛋白(α-actinin)或者骨架蛋白(skelemin)等的结合上发挥着重要的功能。本研究的目的是通过对α螺旋上5个保守的带电荷氨基酸(R724,K725,E726,E731和E733)的研究,采用定点突变的方法,从而明确其在介导β3与骨架蛋白结合中的作用。实验结果表明,表达有突变型整合蛋白αⅡbβ3E726Q的CHO细胞株在固相化的纤维蛋白原上伸展不良,表型最显著。除此之外,E726Q突变可以诱导CHOαⅡbβ3E726Q细胞株在固相化的纤维蛋白原上的细胞膜起泡现象,且这种突起小泡(blebs)可以被肌凝蛋白轻链ATPase抑制剂blebbistatin所抑制。结论:整合蛋白β3亚基近膜端α螺旋在将细胞膜锚定到膜下肌动蛋白皮质层(submembraneous actin cortex)方面发挥重要作用。

发育和成熟大鼠心室肌细胞α-actinin和myomesin的表达及意义

目的观察发育和成熟大鼠心室肌细胞中α-辅肌动蛋白(α-actinin)和myomesin分布、强度和面积百分比增龄变化,探讨其生物学意义。方法选择胎鼠(孕约19 d)、新生(9 d)、青年(8个月)、老年(14个月)的SD大鼠,采用免疫组织化学技术研究不同年龄段大鼠心室肌细胞中α-actinin和myomesin表达部位和强度差异,用图像分析系统进行定量分析,并进行统计学处理。结果从发育到成熟阶段,α-actinin逐渐由肌浆中均质弥散分布转变为短棒状分布,新生鼠阳性表达强度和面积百分比与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.05);Myomesin表达部位及特点与α-actinin相似,新生鼠表达强度与青年和老年鼠相比差别具有统计学意义(P<0.05),新生鼠阳性面积百分比与其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠心室肌组织发育和成熟过程中,α-actinin和myomesin逐渐由胞浆内弥散分布转变为有规律的点状分布,不同年龄段表达强度和密度不同,这可能与肌组织行使功能和机体血流动力改变相关。

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏α-actinin-4表达的影响及意义

目的研究糖尿病大鼠肾脏α-辅肌动蛋白-4(α-acti-nin-4)表达的变化以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(ATⅠ)拮抗剂氯沙坦(losartan)的调节作用。方法♂SD大鼠随机分为对照组(N组)、糖尿病组(D组)和氯沙坦治疗组(DL组),每组10只,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠模型,氯沙坦治疗组于造模成功后每日给予氯沙坦20mg·kg-1灌胃。8wk末电镜观察足细胞超微结构的变化;免疫组化、Western blot检测各组肾组织α-actinin-4蛋白的表达;半定量RT-PCR检测各组肾组织α-actinin-4mRNA的表达;应用放射免疫法检测肾组织AngⅡ的含量。结果D组大鼠肾重/体重、24h尿蛋白排泄量明显高于N组;肾组织α-actinin-4蛋白及mRNA的表达均明显低于N组。氯沙坦干预后可明显改善24 h尿蛋白与血肌酐水平,α-actinin-4蛋白及mRNA的表达水平明显高于D组。D组大鼠肾组织AngⅡ含量明显高于C组,但氯沙坦给药对其无影响。结论α-actinin-4表达降低参与了糖尿病肾病大鼠蛋白尿的发生,氯沙坦可以上调糖尿病大鼠肾脏α-actinin-4的表达,从而对肾脏起到保护作用。

RSK4、ACTN4和Ki-67在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究核糖体S6蛋白激酶4(RSK4)、α-辅肌动蛋白4(ACTN4)及核增殖抗原Ki-67在乳腺癌(BC)组织中的表达,分析三者表达水平与BC患者临床病理特征的关系。方法:收集2019年1月至2021年12月广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科100例手术切除并经病理确诊的BC组织及20例癌旁正常石蜡包埋组织标本。采用免疫组织化学法检测RSK4、ACTN4和Ki-67在BC及癌旁正常组织中的表达。采用Spearman等级相关分析法分析RSK4与ACTN4、Ki-67表达的相关关系。结果:与癌旁正常组织比较,癌组织中RSK4表达降低,ACTN4和Ki-67表达升高(均P<0.01)。RSK4与ACTN4、Ki-67表达均呈负相关关系,且三者表达水平与患者肿瘤大小、病理分级有关(均P<0.05)。结论:BC组织中RSK4表达下调,ACTN4和Ki-67表达上调,RSK4、ACTN4和Ki-67表达与BC进展有关,可作为BC临床诊疗的潜在标志物。

肾炎消白颗粒对糖尿病肾病大鼠α-actinin-4表达的影响

目的探讨肾炎消白颗粒对糖尿病肾病(DN)模型大鼠α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)表达的影响,探讨肾炎消白颗粒防治DN的机制。方法采用高糖、高脂饮食并行单侧肾切除加链脲佐菌素(STZ)方法致DN大鼠模型,随机分为空白对照组、模型对照组、盐酸贝那普利(洛汀新)组、肾炎消白颗粒高剂量组、肾炎消白颗粒低剂量组共5组。观察8周,检测大鼠尿白蛋白排泄率(UAE);将肾脏病理切片进行PAS染色,用光镜观察大鼠肾脏组织的病理改变;采用Westernblot技术检测大鼠肾组织α-actinin-4蛋白表达水平;采用RT-PCR方法检测大鼠肾组织α-actinin-4 mRNA表达。结果肾炎消白颗粒能明显降低尿UAE,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);肾炎消白颗粒能减轻肾组织中系膜基质增生、基底膜的增厚及减轻足突的融合;采用Western-blot法,肾炎消白颗粒能上调肾组织α-actinin-4蛋白表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);肾炎消白颗粒能上调肾组织α-actinin-4 mRNA的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论肾炎消白颗粒能够降低DN模型大鼠尿UAE,通过上调DN大鼠肾脏足细胞相关蛋白α-actinin-4及α-actinin-4 mRNA的表达,降低尿蛋白的排出,达到保护肾脏的目的,延缓模型大鼠DN进展。