α1,3 FucT-Ⅶ基因转染对人结肠癌LOVO细胞的作用

目的观察α1,3 FucT-Ⅶ基因转染对人LOVO细胞的生物学行为的改变。方法采用RT-PCR和Western blot方法检测转染前后LOVO细胞中α1,3 FucT-Ⅶ基因的表达,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,并通过体外迁移、侵袭实验检测转染前后LOVO细胞运动侵袭能力的变化。结果LOVO细胞微弱表达α1,3 FucT-Ⅶ,RT-PCR和Western blot方法验证转染后的LOVO/FucT-Ⅶ高表达α1,3 FucT-Ⅶ。转染后细胞生长增快,S期细胞增多而G1期细胞减少,细胞趋化性迁移和侵袭能力增强。结论α1,3 FucT-Ⅶ基因能改变人结肠癌LOVO细胞的生物学行为,增强细胞趋化性迁移和侵袭等转移表型。

过表达α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ通过增强p38MAPK信号通路抑制UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡

目的初步探讨α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(简称FUT7)在UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721(简称7721)细胞凋亡过程中的作用及机制。方法用RT-PCR检测转染pcDNA3-FUT7质粒的7721细胞及转染空质粒pcDNA3的7721细胞中FUT7基因的转录水平;用流式细胞仪检测细胞表面FUT7产物SLex的表达水平;利用DAPI染核计算UVC照射后细胞的凋亡比率;用结晶紫染色法测定细胞的存活率;利用Western blot检测Caspase3的剪切情况及p38MAPK、JNK1/2和ERK1/2的磷酸化水平。结果过表达FUT7能抑制UVC照射诱导的7721细胞凋亡,同时还增强了细胞中p38MAPK信号通路的活性,而用p38MAPK的特异性抑制剂处理则可削弱FUT7的抗凋亡作用。结论在UVC照射诱导的7721细胞凋亡过程中FUT7具有抗凋亡的作用,这种作用可能部分通过增强p38MAPK信号通路活性而实现。

RNA干扰沉默α1,3岩藻糖转移酶-Ⅶ基因对人肝癌细胞增殖的影响

目的研究RNA干扰沉默α1,3岩藻糖转移酶-Ⅶ(α1,3FucT-Ⅶ)基因对人肝癌细胞增殖的影响。方法设计合成α1,3FucT-Ⅶ特异性RNA干扰质粒,并用脂质体转染导入人肝癌H7721细胞。RT-PCR检测细胞中α1,3FucT-ⅦmRNA的表达。流式细胞术测定细胞表面唾液酸化的LewisX抗原(SLex)的表达及细胞周期。细胞生长曲线通过MTT测定。p27Kip1的表达检测采用Westernblot。结果成功构建了α1,3FucT-Ⅶ特异的shRNA真核表达质粒载体。RNA干扰下调α1,3FucT-Ⅶ表达能抑制H7721细胞生长,表现为细胞生长速度明显较对照组细胞慢,S期细胞百分数明显降低,p27Kip1的表达增加。结论α1,3FucT-Ⅶ可能通过调节p27Kip1的降解影响H7721细胞增殖。

小鼠胚泡植入早期FucT-Ⅶ和sLe(X)寡糖抗原表达

目的探讨妊娠第1～5天(d1～5)小鼠子宫内膜唾液酸化的路易斯寡糖[sLe(X)]合成关键酶α-1,3岩藻糖基转移酶基因(FucT-Ⅶ)的表达和其表面sLe(X)寡糖抗原表达对胚胎植入的影响。方法应用RT-PCR和免疫组化方法检测妊娠第1～5天小鼠子宫内膜FucT-Ⅶ及寡糖抗原的表达规律。用子宫角内注射sLe(X)单克隆抗体的方法检测小鼠胚胎着床数。结果妊娠第1～5天小鼠子宫组织均有FucT-Ⅶ的表达,且在妊娠d4表达更强(P<0.05)。妊娠第1～5天sLe(X)寡糖抗原表达在子宫内膜的腔上皮和腺上皮。单侧子宫角sLe(X)抗体注射后胚胎的着床数量明显较对侧(注射等体积生理盐水)减少。结论在小鼠胚胎着床过程中,FucT-Ⅶ及sLe(X)寡糖抗原可能参与了胚泡的定位、黏附及侵袭过程,在胚泡植入的早期发挥作用。

人α1,3-岩藻糖基转移酶VII荧光真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pIRES2-EGFP-FUT7真核表达载体。方法:采用RT-PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶VII(FUT7)全长基因,克隆至pMD18-TSimple载体后,将FUT7亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体并进行鉴定。通过脂质体转染到子宫内膜RL95-2细胞中,荧光显微镜下观察并经RT-PCR检测FUT7的表达。结果:测序及酶切鉴定证明获得人全长FUT7基因,FUT7基因正确插入pIRES2-EGFP中,在荧光显微镜下观察到了绿色荧光蛋白在RL95-2细胞中的表达,半定量RT-PCR检测结果显示FUT7的表达明显增加。结论:成功构建了绿色荧光蛋白为报告基因的FUT7真核表达载体,并检测到在RL95-2细胞中的表达,为研究FUT7及其合成的糖抗原sLex在胚胎着床中的作用奠定了基础。