基于扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应法的A1/A2牛奶鉴别试剂盒的开发及应用

目的基于扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system polymerase chain reaction,ARMS-PCR)技术,开发A1A2牛奶鉴别试剂盒,并对市场上A2牛奶产品进行检测应用,实现对A2牛奶的鉴别检测。方法本研究先利用D-loop基因片段设计了牛内参基因引物探针组(标记FAM荧光)。随后,在β-酪蛋白基因突变位点分别设计了A1基因引物探针组和A2基因引物探针组(均标记VIC荧光)。基于ARMS-PCR技术构建了双通道ARMS-PCR反应体系与程序,进而成功开发了A1A2牛奶实时荧光ARMS-PCR试剂盒。为进一步验证试剂盒性能,将其应用于市场上A2牛奶的检测,并将检测结果与DNA测序法结果对比。结果本试剂盒特异性强,检测DNA灵敏度为0.1 ng/L;10份市售实际样品的应用检测结果与测序结果一致。结论本试剂盒特异性好,灵敏度高、准度度高,适用于A2牛奶的真实性鉴别。

原料乳中β-内酰胺酶检测试剂盒的研究

目的制备原料乳中β-内酰胺酶的快速检测试剂盒,方法β-内酰胺酶分解青霉素钾的产物青霉噻唑酸具有还原性,能将二价铜还原为一价铜,2,2′-联喹啉与一价铜反应生成的是紫红色配合物,颜色深浅与β-内酰胺酶的量在一定范围内呈线性关系。结果利用可见分光光度法优化出试剂盒最佳检测条件为:0.05%2,2′-联喹啉添加量为2.4 mL,20 mmol/L的CuSO4最佳添加量0.2 mL,原料乳添加量为0.1 mL;配制β-内酰胺酶的标准品浓度梯度溶液0~200 U/mL进行显色反应后,利用分光测色仪测定颜色反应L*、a*和b*值数据,并应用色彩模块软件对其进行模拟,制作标准比色卡;原料乳样品显色15 min后与标准比色卡对比,确定牛奶中β-内酰胺酶浓度,试剂盒最低检出限为4 U/mL。结论β-内酰胺酶检测试剂盒法具有快速、操作简单、经济实用等特点,易于普及和现场测定。

活细胞计数试剂盒在检测5-氮杂-2’-脱氧胞苷对慢性粒细胞白血病细胞的增殖抑制作用中的应用

目的探讨活细胞计数试剂盒(CCK-8)在检测5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-dc)对慢性粒细胞白血病细胞的增殖抑制作用中的应用。方法采用CCK-8检测不同浓度5-Aza-2’-dc对K562细胞的增殖抑制作用,并检测其半数抑制浓度对K562细胞的细胞周期和凋亡的影响。结果 5-Aza-2’-dc的半数抑制浓度为15.55nmol/L,采用该浓度处理K562细胞后,G2期发生阻滞,增殖抑制,并出现凋亡峰。结论不同浓度的5-Aza-2’-dc对K562细胞增殖的抑制作用不同,且呈浓度依赖关系。CCK-8检测法可运用于甲基化转移酶抑制剂对人慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响。

6种酶抑制-比色法快速检测试剂盒对4种有机磷农药的敏感性

为商品化酶抑制-比色法快速检测试剂盒的选择提供依据,采用6种商品化酶抑制-比色法快速检测试剂盒对甲胺磷、毒死蜱、甲基对硫磷、三唑磷进行5个浓度水平的检测比对试验,比较各试剂盒对4种农药的灵敏度。结果表明:6种试剂盒对4种农药的灵敏度均不同,不同农药和试剂盒采用3 mL和2.5mL提取液测定结果存在一定差异。6种试剂盒测定甲胺磷、毒死蜱、甲基对硫磷、和三唑磷的半抑制浓度均大于3mg/kg,大于国家限量标准的规定(甲胺磷0.1mg/kg、毒死蜱1mg/kg、甲基对硫磷0.02mg/kg、三唑磷0.1mg/kg),建议在实际的检测工作中对抑制率≥10%的样品进行复检,同时上色谱质谱进行定性定量。

基于G6PD/6GPD比值法的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒性能分析

目的:对基于G6PD/6GPD比值法的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒进行性能分析。方法:从试剂盒灵敏度、重复性及与对照试剂盒进行临床对比方面评价试剂盒的性能。结果:试剂盒对G6PD和6PGD的分析灵敏度分别为0.03 U/g Hb和0.02μg/ml;20次检测质控品C1和C2,变异系数分别为4.18%和6.12%;该试剂盒对1000例临床样本的敏感度、特异性及总符合率均为1.00,误诊率为0.001,漏诊率为0,P=1.000>0.05,差异无统计学意义。Kappa=0.962(P<0.01),广州丰华公司的试剂盒与对照试剂盒的临床检测结果具有高度的一致性。结论:广州丰华公司的试剂盒操作简单,结果可靠,由于该方法能检出G6PD缺乏症杂合子,弥补了荧光法检测G6PD缺乏症的不足,更适合推向市场。

市售酶抑制-比色法农残速测试剂盒对多种农药的敏感性测定

【目的】为全面了解市售酶抑制-比色法农药残留快速检测试剂盒的品质,使其在农产品检测与监管工作中发挥更大作用。【方法】采用产自广州的达园品牌的酶抑制-比色法农药残留快速检测试剂盒,对28种农药的敏感性进行测定。【结果】该试剂盒对各农药的敏感性存在显著性差异,在所测定的28种农药中,试剂盒对克百威和涕灭威亚砜的敏感性较强,对二嗪磷、甲拌磷、三唑磷、蝇毒磷、倍硫磷、水胺硫磷、地虫磷、乐果、甲基异柳磷、丙溴磷10种农药的敏感性极低;对杀扑磷的敏感性在样品提取液取用3 mL和2.5 mL之间产生较大差异,测定甲基对硫磷时抑制率和农药浓度对数之间不存在线性关系。【结论】按照50%的判定阈值进行判定,在所测定的28种农药中,只有当样品中含有克百威、涕灭威砜、辛硫磷和喹硫磷时可以报出阳性。酶抑制-比色法农药残留快速检测试剂盒对各种不同农药敏感性的巨大差异是引起该试剂盒测试样品产生的假阳性、假阴性检测结果的原因之一,需要引起相关人员的重视。建议国标和行标修改判定阈值。

一种酶抑制-比色法农残速测试剂盒对多种农药的敏感性研究

为了解市售酶抑制-比色法农残速测试剂盒对农药的敏感性,使其在农产品检测与监管工作中发挥更大的作用,研究采用日常检测工作中使用的泰扬品牌的酶抑制-比色法农残速测试剂盒,测定了其对27种农药的敏感性。结果表明,该试剂盒对各农药的敏感性存在显著性差异,在所测定的27种农药中,试剂盒对喹硫磷、敌敌畏、丙溴磷、涕灭威亚砜等农药的敏感性较强,对倍硫磷、甲基对硫磷、蝇毒磷、氧化乐果4种农药的敏感性较差。酶抑制-比色法农药残留快速检测试剂盒对各种不同农药敏感性的巨大差异是引起该试剂盒检测结果假阳性、假阴性的原因之一,需要引起相关人员的重视。

衍生化-气相色谱-质谱法和酵母试剂盒法联合测定水中8种雌激素浓度

应用衍生化-气相色谱-质谱法和酵母试剂盒法,对不同性质水样中的β-雌二醇、雌酮、雌三醇、戊酸雌二醇、己烯雌酚、乙炔基雌二醇、双酚A和4-壬基酚等8种雌激素进行联合测定和效应比对。结果表明:两种方法联合测定可以同时检测雌激素的浓度和效应大小,更全面地体现水中雌激素的污染水平,使雌激素浓度与其效应相对应并相互验证,排除单一方法中可能出现的假阳性现象。

两种胰岛素样生长因子结合蛋白-1检测试剂盒诊断胎膜早破的比较研究

目的:比较研究国产与进口胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein,IGFBP)-1检测试剂盒(胶体金法)快速诊断胎膜早破(premature rupture of fetal membrane,PROM)的性能。方法:取87例PROM患者为阳性组,153例胎膜未破孕妇为对照组,对其宫颈分泌物分别予以进口和国产的IGFBP-1试剂盒检测;并结合pH试纸的检测结果,比较两种IGFBP-1试剂盒的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果:国产与进口的IGFBP-1试剂盒诊断PROM的Kappa一致性检验为0.97(P<0.000 1)。结论:国产与进口的IGFBP-1检测试剂盒诊断PROM结果一致性较佳;与pH试纸比较,国产IGFBP-1检测试剂盒在检测PROM中具备显著的优越性。

动物尿液中β-受体激动剂酶联免疫检测试剂盒使用通则的建立

酶联免疫检测法具有操作简便、灵敏度高、设备成本低、可实现批量样品的快速检测等突出特点,现已成为国内外广泛采用的检测农产品中违禁物质的手段。目前国内市场上针对动物尿液中β-受体激动剂的酶联免疫检测试剂盒种类繁多,但产品质量参差不齐。操作人员由于对产品性质、使用方法、注意事项等关键环节理解的偏差,往往造成检测结果不准确,导致阳性样品流入市场。本文建立了酶联免疫检测试剂盒的使用通则,旨在为检验检测人员采购、验收、使用该类产品提供技术参考。

大豆脂肪氧化酶-Ⅲ酶联免疫检测试剂盒的制备及其稳定性研究

为了实现对脂肪氧化酶-Ⅲ缺失大豆材料的快速筛选,通过双抗体夹心法利用大豆脂肪氧化酶-Ⅲ的单抗及脂肪氧化酶多抗制备了大豆脂肪氧化酶-Ⅲ的酶联免疫检测试剂盒。结果表明,该试剂盒在2-8℃条件下可以保存6个月,稳定性良好,并可实现对脂肪氧化酶-Ⅲ缺失大豆材料的快速检测。

水中苯胺类化合物检测8-羟基喹啉试剂盒的研制

本文提出一种能方便、快速、灵敏地检测水中苯胺类化合物的试剂盒。该方法是以N -氯代丁二酰亚胺和 8-羟基喹啉与苯胺的显色反应为基础。显色反庆所得的蓝绿色化合物的最大吸收波长为 6 1 0nm ,在苯胺为 0 .2～ 8mg/L的浓度范围内符合比尔定率 ,最低检出限为 0 .0 1mg/L ,测定的重现性在± 5 %以内。

不育男性精浆锌、果糖、中性α-1．4-糖苷酶含量的比较分析

我们检测了621例男性不育患者精浆锌、果糖、中性α-1．4-糖苷酶，并在各组之间作了比较。结果：（1）精子密度正常组、少精组与无精组锌含量有统计学上显著性差异（P〈0.001），无精组的精浆锌高于精子密度正常组和少精组；（2）精浆果糖各组间无统计学上显著性差异（P〉0.05）；（3）精液常规分析正常组、精子密度正常组和少精组精浆中性α-1．4-糖苷酶高于无精组（P〈0.05）。

牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒的研制与评价

目的研制一种牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒,并在奶牛结核病检疫中进行初步应用和评价。方法建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,基于此法试制3批试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、可重复性和保存期进行评价,其后进行初步应用,对961头奶牛采用单纯颈部皮试变态反应、商品化BOVIGAMTM试剂盒与试制的牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒进行同步检测。结果该试剂盒对质控样品的最低检出量达到8.21ng/mL,而且检测重复性良好,试剂盒保存期达12个月以上。在进行临床试验时,试制的试剂盒与单纯颈部皮试变态反应相比,阳性一致率为70.59%,阴性一致率为99.20%,总一致率为98.44%;与BOVIGAMTM试剂盒相比,阳性一致率为91.30%,阴性一致率为99.78%,总一致率为99.58%。其灵敏度为85.00%,特异性为100.00%。结论成功建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,并研制出相应试剂盒,具有良好应用前景。

水中苯胺类化合物检测1-萘酚试剂盒的研制

本文提出一种能快速灵敏地检测地面水和污水中苯胺类化合物的试剂盒。该方法是以 N-氯代丁二酰亚胺氧化苯胺 ,在 p H9- 1 1的碱性介质中 〔1〕,以 1 -萘酚偶联显色。显色反应所得的蓝色化合物的最大吸收波长为 61 0 nm,在苯胺浓度为 0 .2～ 8mg/L的浓度范围内符合比尔定律 ,最低检出限为 0 .0 2 mg/L ,测定的重现性在± 5 %以内。该试剂盒用于合成水样和环境水样的分析 ,回收率在 94.9～ 98.2之间。

25-羟基维生素D化学发光检测试剂盒的研发

研制了用于定量检测人血清中25-羟基维生素D(25-OHD)水平的化学发光法检测试剂盒,并对试剂盒各项性能指标进行验证。试剂盒建立的方法为:将25-OHD单克隆抗体包被于微孔板中,将血清样品与释放剂同时加入微孔板中进行孵育,使样品的25-OHD充分释放出来并与包被板上的25-OHD抗体相结合。再加入酶结合物(生物素化25-OHD和链霉亲和素化过氧化物酶(SA-HRP)的混合物),使之与25-OHD抗体相结合,形成竞争免疫复合物,随后洗涤除去未结合的物质,加入化学发光底物,使用化学发光免疫分析仪读取相对发光强度(RLU)。制备的25-OHD检测试剂盒最低检出限为4.9 ng/m L,准确度相对偏差在±10%以内,批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,2℃~8℃存放有效期为1年。对200份临床血清样本进行检测,与参比试剂盒检测结果的相关系数R=0.9717。试剂盒各项性能指标均符合行业标准要求,具有灵敏,稳定,快速,简便等特点。