抗钠-钙交换体α-1和α-2重复序列抗体的制备和纯化(英文)

目的用人工合成的钠-钙交换体α1和α2重复序列作为抗原,制备并纯化抗α1和α2重复序列抗体。方法通过主动免疫大鼠,获得抗血清。采用酶联免疫吸附测定法(SAELISA)测定抗体滴度,并将高滴度抗血清(≥1∶640)上样至HiTrapProteinGHP进行亲和层析对抗体进行纯化。纯化效果用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,并采用Bradford蛋白质定量法对纯化后抗体进行定量。结果大鼠经主动免疫后,抗α1抗血清滴度从免疫前的1∶(25.5±1.5)升高到1∶(905.1±2.2)(P<0.01);抗α2抗血清滴度从免疫前的1∶(26.4±1.5)升高到1∶(1076.3±2.0)(P<0.01)。纯化后的抗α1和抗α2重复序列抗体电泳时都仅有一条带出现,分子量160kDa左右,与IgG标准品相一致。用Bradford蛋白质定量法测得抗α1和α2抗体浓度分别为1.0mg/ml和1.2mg/ml。结论本研究获得了高纯度、高滴度的抗α1抗体,为下一步对其进行功能研究奠定了基础。