α-氯丙酸脱卤酶发酵培养基的响应面法优化

通过Plackett-Burman设计和响应面分析方法对PseudomonasW20菌株产脱卤酶的培养基组成进行优化。得出影响产酶的3个重要的培养基成分为:尿素、葡萄糖和KH2PO4,且其最适浓度分别为1.19、18.4 g.L-1和1.30 g.L-1。此时脱卤酶活力达到了10.57 U.(g干菌体)-1,比优化前提高了23.77%。

α-氯丙酸脱卤酶发酵条件研究

以从厌氧污泥中分离筛选获得的对α-氯丙酸有高效脱卤能力的微生物菌株W20为出发菌株,对其发酵生产脱卤酶的工艺进行了研究。其产脱卤酶培养基组成为:葡萄糖20.0 g/L,尿素1.0 g/L,酵母膏0.5 g/L,Na2HPO4.12H2O 3.2 g/L,KH2PO41.5 g/L,无水MgSO40.098 g/L,微量元素液10 mL/L,维生素溶液5.0 mL/L。产酶条件为:接种量10%,培养基初始pH7.0,培养温度30℃,装液量80 mL/250 mL摇瓶,摇床转速180 r/min。在以上获得的培养基和培养条件下培养48 h后测酶活,脱卤酶活力达到8.76 U/g干菌体,比在原始条件下提高约10倍。

α-氯丙酸脱卤酶发酵动力学模型

对α-氯丙酸脱卤酶发酵动力学进行了研究。基于Logistic方程和Luedeking-Piret方程,得到了描述Pseudomonas W20菌发酵过程菌体生长、α-氯丙酸脱卤酶生成及基质消耗的动力学数学模型和模型参数,对试验数据与模型进行了验证比较,模型计算值与试验结果拟合良好,平均相对误差大部分小于10%;对脱卤酶反应动力学进行了研究,结果表明脱卤酶的脱卤反应基本符合米氏方程,并求得最大反应速率V_(max)=1.11×10^(-5)mol/(g·min),表观米氏常数K_m=3.72×10^(-3)mol/L。

偶氮氯膦Ⅲ──溴化十六烷基三甲基铵──α-噻吩甲酰三氟丙酮体系光度法测定瓷土中离子吸附型稀土元素总量

研究了偶氯氯膦Ⅲ（CPAⅢ）-溴化十六烷基三甲基铵（CTMAB）──α-噻吩甲酰三氟丙酮（TTA）显色体系和测定瓷土中离子吸附型稀土元素总量的条件．配合物组成比为Ce：CPAⅢ:CTMAB＝1:2:4；摩尔吸光系数εCe＝6．04×104L·mol-1·cm-1,εy＝5．45×104L·mol-1·cm-1．相对标准偏差为0．58％（n＝7）,加料回收率99％．

A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65的原核表达及其纯化

目的原核表达A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,并进行纯化。方法以CPA全基因为模板,PCR扩增rCPA基因,插入表达质粒p ET-28a(+)-HSP65,构建重组表达质粒p ET-28a-rCPA-HSP65,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行12%SDS-PAGE分析;优化表达工艺进行高密度发酵,发酵产物经DEAE阴离子柱上复性后,再经金属螯合层析纯化。结果重组表达质粒p ET-28a-rCPA-HSP65经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约90 000,主要以可溶性形式为主,表达量占菌体总蛋白的30.17%。利用TB培养基,IPTG 34℃诱导5 h的表达产物经纯化后,纯度约达95%,蛋白收率为4.5 mg/g湿菌。结论已成功表达并纯化了A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,为后期疫苗生物学活性的研究奠定了基础。