基于CRISPR/Cas9加工番茄α-Man突变体的构建

为培育成熟果实软化程度低,货架期长的番茄植株,以加工番茄甘露糖苷酶基因(α-Man)为编辑对象,设计由番茄U6 启动子驱动、长21 bp 的guide RNA(gRNA)指导hCas9 核酸酶,靶向编辑α-Man 的第1 个外显子。首先构建基于CRISPR/Cas9 系统的植物表达载体,并通过农杆菌介导的遗传转化获得加工番茄转基因株系,然后取转基因番茄叶片基因组DNA,利用限制性内切酶法结合PCR 扩增对α-Man 编辑位点附近的DNA 片段进行检测及测序分析。结果表明,14 株转基因番茄植株有2 株检测到突变现象。α-Man 突变体TA 克隆测序结果显示有2 种编辑类型,一种表现为52 bp 的缺失突变;另一种表现为单碱基突变。实现了对番茄α-Man 的编辑。

真核生物α-甘露糖苷酶生物信息学分析

α-甘露糖苷酶(α-mannosidase,α-Man)是真核生物蛋白质N-聚糖修饰的关键酶,其对甘露糖残基的修剪过程是糖蛋白N-糖链复杂化的必要步骤,对蛋白质的合成及正确构象的折叠起决定性作用。根据α-Man的功能特异性,其一般被分为糖基水解酶38家族(glycosyl hydrolase 38 family,GH38)、糖基水解酶47家族(glycosyl hydrolase 47 family,GH47)两个家族。利用生物信息学分析GH38家族与GH47家族在进化上的关系和氨基酸序列保守性以及不同物种内质网Ⅰ型甘露糖苷酶(endoplasmic reticulum ManⅠ,ERManⅠ)的理化性质、结构特点、功能特征后发现,GH47家族比GH38家族在进化上更早且保守性更好;α-Man基因在不同物种中长度存在明显差异,物种越高等基因平均长度越长;真核生物ERManⅠ均为亲水性不稳定蛋白质,其氨基酸序列存在跨膜螺旋并含有信号肽,且蛋白质空间构像为桶状,包含Ca^(2+)结合位点。文中对α-Man的生物信息学分析可以为研究α-Man在生命过程中的作用提供重要的信息。

慢肝宁抗肝纤维化的肝组织形态定量及α-平滑肌肌动蛋白免疫组化评价

目的 :探讨慢肝宁胶囊抗肝纤维化的作用机制。方法 :让 3 0例慢性肝炎患者服用慢肝宁胶囊治疗 6个月 ,设对照组 10例 ,用USF图像分析仪对治疗前后两次肝活检标本以点计数法作组织形态定量及α SMA (α 平滑肌肌动蛋白 )阳性细胞数密度测定。结果 :治疗组良好肝细胞面密度增高非常显著 (P <0 .0 0 1) ,变性肝细胞、纤维组织、淋巴细胞面密度减少亦非常显著 (P <0. 0 1) ,肝组织α SMA阳性细胞数密度也显著减少 (P <0. 0 2 ) ;而对照组除变性肝细胞面密度有显著减少外其他变化不显著。结论 :慢肝宁可能是通过抑制淋巴细胞等炎细胞及活化肝星状细胞活性来发挥抗肝细胞损伤及抗纤维化作用。

真核生物蛋白质O-甘露糖基化的研究进展

蛋白质O-甘露糖基化是真核生物中广泛存在的蛋白质翻译后修饰过程,即在甘露糖转移酶(PMT)作用下将长萜酰甘露糖上活化的甘露糖连接到肽链上Ser或者Thr羟基的过程。本文着重介绍在真核生物里真菌和哺乳动物中O-甘露糖基化蛋白的O-甘露聚糖结构、合成过程和生物学意义。

当归多糖及小分子提取物对TGF-β1诱导的HELF表达α-SMA、CTGF的影响

目的:观察当归多糖及小分子提取物对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞HELF的增殖及α-SMA、CTGF影响的作用。方法:建立肺纤维化细胞模型,分为空白组、模型组、12.5μg/ml当归多糖组、25μg/ml当归多糖组、50μg/ml当归多糖组、25μg/ml当归小分子提取物组、50μg/ml当归小分子提取物组、100μg/ml当归小分子提取物组。结合形态观察,检测细胞增殖、羟脯氨酸、MMP-9、TIMP-1含量及α-SMA、CTGF蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,各组细胞吸光度值、羟脯氨酸、MMP-9、TIMP-1含量、CTGF、α-SMA蛋白表达均明显增高。与模型组比较,25μg/ml当归多糖组、50μg/ml当归小分子提取物组细胞吸光度值、羟脯氨酸含量、CTGF、α-SMA蛋白表达均降低,50μg/ml当归小分子提取物组MMP-9含量下降,25μg/ml当归多糖组、50μg/ml当归小分子提取物组TIMP-1含量均增高。形态学观察,模型组细胞数量增多,体积增大,生长旺盛。25μg/ml当归多糖组、50μg/ml当归小分子提取物组细胞数量较少,体积较小。结论:当归多糖及小分子提取物能抑制TGF-β1诱导的HELF增殖,减少羟脯氨酸的合成,其作用可能与下调α-SMA、CTGF表达,调节维持MMP-9/TIMP-1之间的平衡有关。