新的植物雌激素α玉米赤霉醇明显抑制实验性动脉粥样硬化发病进程

雌性激素具有抗动脉粥样硬化作用 ,但具有明显的副作用 ,近年争议尤甚。我们发现了一种新的植物雌激素α玉米赤霉醇 ,并于 1996年首次引进医学研究领域。为了探讨α玉米赤霉醇抗动脉粥样硬化与改善脂质代谢的作用并与雌激素进行比较 ,将 6 0只新西兰成熟未孕兔分成 7组 :正常对照组 6只 ,普通饲料喂养 ;假手术组 8只 ,作假手术 ;高脂对照组 10只 ,小剂量玉米赤霉醇组 8只 ,中剂量玉米赤霉醇组 10只 ,大剂量玉米赤霉醇组 8只 ,雌二醇组 10只 ;上述各组除正常对照组和假手术组外 ,均作了卵巢摘除术 ;除正常对照组外均喂高脂饲料 12周。在实验开始时和第 4、8、12周时分别测定血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白Al和B。实验结束时处死动物 ,取主动脉标本 ,油红O染色 ,肉眼观察并用扫描仪测定兔主动脉内膜脂质斑块沉积面积与主动脉内膜总面积之比 ,另取小块主动脉常规切片作病理观察。结果发现 ,主动脉内膜脂质斑块与内膜总面积之比 ,正常对照组为 0 .0 2± 0 .0 0 3;假手术组为 0 .42± 0 .15 ;高脂对照组为 0 .6 7± 0 .2 3;小剂量玉米赤霉醇组为 0 .6 1± 0 .13;中剂量玉米赤霉醇组为 0 .10± 0 .0 6 ;大剂量玉米赤霉醇组为 0 .32± 0 .10 ;雌二醇组为 0 .12±

α-玉米赤霉醇对实验性高脂血症兔的血脂代谢及血液流变学的影响

目的本研究是探讨α-玉米赤霉醇(-αZAL)在抗动脉粥样硬化(AS)作用中,对血脂代谢及血液流变学的影响。方法44只成熟未孕新西兰大耳白雌兔,分为5组,A组为正常对照组,B组为假手术组,C组为切除卵巢组,D组为切除卵巢并给予17β雌二醇(17βE2)阳性对照药组,E组为切除卵巢并给予-αZAL组。喂胆固醇(CHO)前与12周后,分别测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量。还分别测定了全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数(AIRC)及纤维蛋白原及血小板聚集率。结果B、D、E组TC、TG、LDL-C明显低于C组(P<0.05);全血黏度、血浆黏度、AIRC和血小板聚集率也明显低于C组(P<0.05)。结论-αZAL可能通过干预血脂代谢,调节全血黏度、血浆黏度和AIRC及血小板聚集率,改善血管功能。

抗α-玉米赤霉醇单克隆抗体的研制及初步应用

目的:制备抗α-玉米赤霉醇(α-ZER)的单克隆抗体(mAb),建立对动物源性食品中残留α-ZER及其同系物的检测方法。方法:结合O-羧甲基羟胺法和EDC法制备α-ZER-BSA偶联物,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。用夹心ELISA测定mAbIg亚类;按Beatty法计算亲和常数;间接ELISA法测定效价;用直接竞争ELISA检测mAb与α-ZER的同系物、己烯雌酚、19-去甲睾酮、链霉素及氯霉素等的交叉反应;绘制α-ZER标准品竞争抑制曲线,检定抗体的灵敏度。用该抗体建立的直接竞争ELISA对37份动物肝组织样品进行检测,并与HPLC检测结果比较。结果:紫外线扫描证明,α-ZER-BSA偶联成功。实验获得8株可稳定分泌抗α-ZERmAb杂交瘤细胞株,其中1株(4E5)分泌的mAb效价较高,为5.142×107,其Ig亚型为IgG1。该mAb能特异识别α-ZER及其同系物,而与其它常用兽药无交叉反应。建立了α-ZER直接竞争ELISA,从HPLC确认为阴性的37份样品中,筛出8份阳性样品。结论:利用mAb建立的直接竞争ELISA检测方法,适合动物源性食品中残留α-ZER及其同系物的快速筛选。

17β-雌二醇及植物雌激素α-玉米赤霉醇致去卵巢大鼠子宫增大作用的比较

为观察植物雌激素α 玉米赤霉醇 (ZAL)对去卵巢大鼠子宫增大的影响 ,并对其与雌二醇的作用进行比较分析 ,建立大鼠去卵巢模型 ,分别补充 17β 雌二醇 (E2 )或ZAL(1mg/kg ,3d注射 1次 ,共 35d)。用放射免疫法测定大鼠血浆雌二醇质量浓度 ;分离子宫 ,计算子宫质量 (g) /体质量 (kg)的比值 ,制作子宫病理切片。发现 :去卵巢 +补充 17β 雌二醇组的血浆雌二醇质量浓度较单纯去卵巢组明显升高 ,去卵巢 +补充ZAL组的血浆雌二醇质量浓度明显低于去卵巢 +补充 17β 雌二醇组 ;ZAL对子宫增大的影响很弱 (子宫质量 (g) /体质量 (kg) =0 .6 6 ) ,明显低于 17β 雌二醇〔子宫质量 (g) /体质量(kg) =1.96〕 ;镜下见 17β 雌二醇组大鼠子宫内膜出现显著囊性增生 ,而ZAL组未见增生性病变。以上结果表明ZAL对子宫的刺激很小 ,明显优于 17β 雌二醇 ,可能作为一种选择性雌激素受体调节剂而发挥作用。

植物雌激素α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠骨组织雌激素受体α和β mRNA的影响

目的应用去卵巢大鼠建立绝经后骨质疏松(OP)模型,观察α-玉米赤霉醇(α-ZAL)对去卵巢大鼠骨组织雌激素受体α和βmRNA的影响,为研究α-ZAL用于治疗绝经后OP提供实验依据。方法 40只6月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(OVX)、雌二醇组(OVX+E2)、α-ZAL组(OVX+α-ZAL)。术后3 w灌胃给予假手术组和模型组生理盐水1 ml.100 g-1.d-1,雌二醇组给予戊酸雌二醇1 mg.kg-1.d-1,α-ZAL组给予α-ZAL1 mg.kg-1.d-1。12 w后处死动物,RT-PCR法检测胫骨近端骨组织ERα和βmRNA表达情况。结果大鼠去卵巢后ERα和βmRNA水平明显下降,应用雌激素治疗后可使ERα和βmRNA水平上调;而α-ZAL只能上调ERαmRNA水平,而不上调ERβmRNA表达。结论α-ZAL能调节骨组织ERαmRNA表达,这可能是其治疗绝经后OP的机制之一。

17β-雌二醇及α-玉米赤霉醇对人脐静脉内皮细胞组织因子表达的影响

为探讨 17β 雌二醇 ( 17β estrodiol,17β E2 )及植物雌激素α 玉米赤霉醇 (α zearalanol,α ZAL)对人脐静脉内皮细胞 (Humanumbilicalveinendothelialcells ,HUVECs)组织因子 (tissuefactor ,TF)蛋白含量及mRNA表达的影响 ,进行人脐静脉内皮细胞原代培养 ,传至 2～ 3代后用于实验。在细胞培养液中分别加入不同浓度 17β E2 及α ZAL作用 48h ,采用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定细胞裂解液中TF蛋白浓度 ,双辛丁酸法 (bicinchoninicacid ,BCA)检测细胞总蛋白含量。提取细胞总RNA ,用RT PCR观察 17β E2 及α ZAL对TFmRNA表达的影响。结果发现 :10 -7mol L 17β E2 及α ZAL均可明显降低HUVECs组织因子蛋白含量及mRNA的表达 ,二者的作用类似。表明 17β E2 及α ZAL可明显抑制HUVECs组织因子的表达 ,这可能是它们抗血栓形成。

植物雌激素α-玉米赤霉醇与17β雌二醇、戊酸雌二醇对兔食饵性动脉粥样硬化的作用

目的:研究新的植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)的抗动脉粥样硬化(AS)作用。方法:49只新西兰成熟未孕雌兔分成6组。A组为正常对照组;B组为假手术组;C组为高脂对照组;D组为17βE2雌二醇组;E组为戊酸雌二醇组;F组为α-ZAL组。分别测定血清TC,LDL-C,HDL-C含量和血浆ET-1及NO水平,肉眼观察并用扫描仪测定各组主动脉内膜脂质斑块沉积面积与内膜总面积之比。并进行病理组织学观察。测定子宫重量/体重。结果:主动脉内膜脂质斑块沉积与内膜总面积之比为B、D、E、F组vs C组P<0.01。病理观察:C组内皮脱落和大量泡沫细胞;B、D、E、F组上述病理变化明显减轻,内皮基本正常或正常,仅有少量或无泡沫细胞。子宫重量/体重D、E、F组较C组明显增加,但F组增加明显小于D组、E组。血清TC、LDL-C、C组均明显升高,而B、D、E、F组明显低于C组,HDL-C各组无显著差异;血浆ET-1与NO水平C组明显升高,而B、D、E、F组明显下降。结论:α-ZAL可减少主动脉内膜脂质斑块沉积面积,减轻病理变化,减轻高脂血症,降低增高的ET-1与过度增高的NO,具有较强的抗AS作用。但对子宫增大作用明显小于17βE2与E2V。

α-ZAL、GST和17β E_2对去势食饵性大鼠HHCY所致血管内皮损伤的保护作用

目的复制去势(OVX)大鼠高同型半胱氨酸血症(HHCY)模型,比较植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)、染料木素(GST)和17β雌二醇(17βE2)对血管内皮的保护作用。方法实验分为6组:①正常对照组(Control);②假手术+2.5%蛋氨酸组(Sham);③切除卵巢+2.5%蛋氨酸组(OVX);④OVX+2.5%蛋氨酸+α-ZAL组(OVX+α-ZAL);⑤OVX+2.5%蛋氨酸+GST组(OVX+GST);⑥OVX+2.5%蛋氨酸+17βE2组(OVX+17βE2)。α-ZAL、GST和17βE2分别隔日肌注250μg/0.25ml,共12wk。双抗夹心法测定HCY和ET-1浓度,RT-PCR法检测主动脉组织ET-1 mRNA表达;主动脉作病理制片。结果血浆HCY含量(μmol.L-1):Sham与Con组比较明显升高,P<0.05;OVX组与Sham组相比明显升高,P<0.05;而OVX+α-ZAL、OVX+GST和OVX+17βE2组与OVX组相比均降低,P<0.01。血浆ET-1(ng.L-1)含量:OVX组与Sham组相比较ET-1升高,P<0.01,而OVX+α-ZAL、OVX+GST和OVX+17βE2组与OVX组相比均降低,P<0.01。主动脉组织ET-1 mRNA的表达:OVX组与Sham组相比较升高,P<0.05,而OVX+α-ZAL、OVX+GST和OVX+17βE2组与OVX组相比均降低,P<0.05,其它各组ET-1 mRNA表达均无变化。病理:OVX组血管内皮明显损伤,Sham组、α-ZAL、GST和17βE2组血管内膜大致正常,内皮细胞基本完整,未见明显的炎性细胞浸润。结论α-ZAL、GST和17βE2均能通过降低HCY含量和减少ET-1分泌、表达而保护血管内皮,三者的内皮保护作用相似。

α-玉米赤霉醇改善去卵巢高同型半胱氨酸血症大鼠的血管功能

目的探讨植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)对去卵巢高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠血管功能的保护作用。方法用高蛋氨酸(Met)饮食复制HHcy大鼠模型。40只雌性Wistar大鼠随机分为5组:(1)对照组(Con);(2)2.5%蛋氨酸组(Met);(3)卵巢切除+2.5%蛋氨酸组(OVX+Met);(4)卵巢切除+2.5%蛋氨酸+α-ZAL组(OVX+Met+α-ZAL);(5)卵巢切除+2.5%蛋氨酸+17β-E2组(OVX+Met+17β-E2)。12周后,测定血浆雌二醇(E2)及同型半胱氨酸(Hcy)的含量;离体胸主动脉环灌流,观察胸主动脉环对不同浓度苯肾上腺素(PE)、乙酰胆碱(ACh)和硝普钠(SNP)的反应。结果高蛋氨酸饮食可明显增高血浆Hcy水平,其中OVX+Met组大鼠Hcy水平升高最显著。与其他组相比,OVX+Met组大鼠胸主动脉环对PE的收缩反应明显增强,对ACh的舒张反应明显减弱。各组大鼠胸主动脉环对SNP的舒张反应无明显差异。结论α-ZAL可抑制去卵巢HHcy大鼠血浆Hcy水平的升高,减轻血管内皮细胞的损伤,明显改善大鼠的血管功能,其作用与17β-E2相似。

植物雌激素α-玉米赤霉醇对HUVEC组织因子基因表达的转录调控作用

目的探讨植物雌激素α玉米赤霉醇(ZAL)影响血管内皮细胞组织因子(TF)基因表达的转录调控机制,并与内源性动物类雌激素17β联雌二醇(17β联estradiol,E2)进行比较分析。方法进行人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代培养,利用基因重组技术构建4个含人TF基因5′上游不同长度序列的荧光素酶报告基因质粒,用脂质体转染法分别转入以下6组细胞:①正常对照组;②10-7molLE2刺激组;③10-7molLZAL刺激组;④10-6molLAngⅡ刺激组;⑤10-7molLE2+10-6molLAngⅡ刺激组;⑥10-7molLZAL+10-6molLAngⅡ刺激组;测定细胞裂解液中荧光素酶比活性(relativeluciferaseactivity,RLA)的变化。结果转染pGL3TF171+71的各组细胞RLA均较低,不同刺激组之间无显著差异;AngⅡ可使质粒pGL3TF593+71,pGL3TF316+71,pGL3TF236+71荧光素酶表达大量增加,E2、ZAL均可不同程度地抑制AngⅡ的上述效应,2者间无显著差异。结论含有1个NFκB位点和2个AP1位点的-236bp～-171bp区域在E2或ZAL影响TF基因转录中有重要作用。

α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠骨生物力学的影响

目的研究植物雌激素α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠骨生物力学的影响。方法 40只6月龄雌性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、模型组(OVX)、雌二醇组(OVX+E2)、α-ZAL组(OVX+α-ZAL)。术后三周假手术组和模型组灌胃给予生理盐水10mL/kg·d,雌二醇组给予戊酸雌二醇1mg/kg·d,α-ZAL组给予α-ZAL1mg/kg·d。12周后处死动物,分离右侧股骨,测定股骨最大载荷、最大挠度、弹性载荷、弹性挠度、最大应力和最大应变。结果α-ZAL组大鼠股骨最大载荷、最大挠度、弹性载荷、弹性挠度、最大应力和最大应变等骨生物力学指标较模型组显著提高。结论α-玉米赤霉醇能改善去卵巢大鼠骨生物力学性能,提示其具有良好的防治绝经后骨质疏松症的应用前景。

植物雌激素α-玉米赤霉醇对内皮祖细胞的促增殖效应

目的:观察植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)对内皮祖细胞(EPCs)增殖能力的影响并探讨其机制。方法:密度梯度离心法获取大鼠外周血单个核细胞,加用内皮细胞培养基EGM-2培养,免疫荧光染色和流式细胞术等进行EPCs鉴定,培养2～3代后用于实验。分别用10-5mol/LH2O2和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)及下游靶蛋白Akt(PI3K/Akt)抑制剂LY294002处理细胞,并加用10-6和10-7mol/Lα-ZAL进行干预。检测EPCs上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性以反映细胞损伤情况,用MTT法、EPCs克隆数及细胞总数计数反映EPCs增殖情况,Westernbloting法检测Akt及磷酸化Akt(phosphor-Akt)蛋白表达。结果:经鉴定培养细胞为EPCs;10-5mol/LH2O2及PI3K/Akt抑制剂LY294002可明显降低EPCs存活率(P<0.05),减少细胞克隆,增加LDH活性(P<0.01);而加入10-6和10-7mol/Lα-ZAL干预后能减轻以上作用(P<0.05),同时10-6mol/Lα-ZAL能减少LY294002抑制EPCsAkt的表达和磷酸化。结论:α-ZAL能促进EPCs的体外增殖能力,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠骨代谢生化指标的影响

目的:应用去卵巢大鼠建立绝经后骨质疏松症模型,观察α-ZAL对绝经后骨质疏松症的骨代谢生化指标的影响。方法:40只6月龄雌性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、模型组(OVX)、雌二醇组(OVX+E2)、α-ZAL(OVX+α-ZAL)。术后三周灌胃给予假手术组和模型组生理盐水1mL/100g·d,雌二醇组给予戊酸雌二醇1mg/kg/d,α-ZAL组给予α-ZAL1mg/kg/d。12周后处死动物,分离血清,测定ALP、BGP、TRACP和ICTP等血清骨代谢生化指标。结果:E2组和α-ZAL组TRACP和ICTP较模型显著降低。E2和α-ZAL能降低血清ALP和BGP浓度,但较假手术组升高。结论:α-ZAL对绝经后骨质疏松症模型动物具有与E2类似的调节骨代谢生化指标的作用,提示可能具有广阔的治疗绝经后骨质疏松症的应用前景。

植物雌激素α-玉米赤霉醇内皮依赖性舒张效应的机制研究

目的探讨植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)对大鼠胸主动脉环内皮依赖性舒张效应中一氧化氮合酶(NOS)-NO-环磷酸鸟苷(cGMP)系统的作用。方法采用体外血管环灌流的方法,先用10-6mol/L苯肾上腺素预收缩血管。观察10-10～10-5mol/L6个不同浓度α-ZAL对内皮完整和去除内皮的大鼠胸主动脉环的舒张作用。α-ZAL10-10～10-8mol/L为低浓度组,α-ZAL10-7～10-5mol/L为高浓度组,0.1%乙醇浓度为对照组。在高浓度组中分别预先加用10-5mol/L左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME组)和亚甲蓝(MB组)并观察其影响,测定动脉环中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和cGMP含量及灌流液中NO含量变化。结果L-NAME组和MB组均可减弱高浓度组中α-ZAL的内皮依赖性胸主动脉环舒张作用(P<0.05,P<0.01);与对照组比较,高浓度组胸主动脉环中eNOS、cGMP含量及灌流液中NO含量增高(P<0.05,P<0.01);与高浓度组比较,L-NAME组可降低灌流液中NO含量及胸主动脉环中cGMP含量(P<0.05,P<0.01);MB组可降低胸主动脉环中cGMP含量(P<0.01)。结论α-ZAL的内皮依赖性舒张作用与NOS-NO-cGMP系统的激活有关。

17β雌二醇和α玉米赤霉醇影响大鼠血液凝固和纤维蛋白溶解功能

为探讨 17β雌二醇及植物雌激素α玉米赤霉醇对去势大鼠凝血及纤溶功能的影响 ,并对二者的作用进行比较分析。选用 36只健康成年雌性Wistar大鼠 ,随机分为 4组 (每组均为 9只 ) :假手术对照组 ;去卵巢组 ;去卵巢 +补充 17β雌二醇组 ,去卵巢 14天后肌注 17β雌二醇 (1mg kg ,3天注射一次 ,共 35天 ) ;去卵巢 +补充α玉米赤霉醇组 ,去卵巢 14天后肌注α玉米赤霉醇 (1mg kg ,3天注射一次 ,共 35天 )。实验结束后大鼠经颈总动脉采血 ,分离血浆。用凝固法测定血浆凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间。用全自动生物化学分析仪测定血浆纤维蛋白原水平。用酶联免疫吸附法测定血浆组织因子水平。组织型纤溶酶原激活剂及纤溶酶原激活剂抑制物活性测定均采用发色底物法。结果发现 ,去卵巢组大鼠与对照组相比 ,凝血酶原时间明显缩短 ,而纤维蛋白原 ,组织因子等均明显升高 ,组织型纤溶酶原激活剂活性明显降低 ,而纤溶酶原激活剂抑制物活性明显升高 ;补充 17β雌二醇组或α玉米赤霉醇后 ,除纤溶酶原激活剂抑制物活性下降不明显外 ,大鼠的其他上述指标均与对照组接近 ,而与单纯去卵巢组有显著性差异。各组间活化部分凝血活酶时间的变化尚无统计学差异。以上结果表明 ,大鼠去卵巢后 ,内源性雌激素水平下降 。

α-玉米赤霉醇溶液标准物质的研制

研制了浓度为0．1mg／mL的α-玉米赤霉醇标准溶液。研制过程包括纯物质定性分析、纯物质纯度定值、纯物质定值不确定度评定、溶液标准物质配制、封装和保存；均匀性检验、稳定性检验、溶液标准物质不确定度评定。定值结果表明，α-玉米赤霉醇溶液标准物质的定值过程、均匀性和稳定性均符合国家有关标准物质要求。目前，该溶液标准物质已批准为国家二级标准物质，可为相关部门提供检测标准。

α-玉米赤霉醇改善Aβ诱导痴呆模型小鼠认知行为的实验研究

目的观察α-玉米赤霉醇(α-ZAL)对阿尔茨海默病(AD)小鼠模型认知行为的改善作用及其机制。方法将40只成年雌性小鼠随机分为对照组、模型组、苯甲酸雌二醇(EB)组和α-ZAL组,每组10只。除对照组外,其他组于实验开始后第7天于脑室内注射β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)3 nmol造成拟AD痴呆模型。对照组和模型组肌肉注射橄榄油0.05 ml/d,共14 d;EB组肌肉注射EB0.1 nmol/d,共14 d;α-ZAL组肌肉注射α-ZAL 0.1nmol/d,共14 d。Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力。分光光度法和同位素法测脑内氧化应激指标和一氧化氮(NO)系统改变。结果模型组Morris水迷宫末次寻台潜伏期明显延长(P<0.01),EB组和α-ZAL组较模型组缩短(P<0.05)。模型组脑内过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)下降(P<0.05),丙二醛(MDA)、原生型一氧化氮合酶(cNOS)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和NO上升(P<0.05);除α-ZAL组海马SOD和cNOS外(P>0.05),EB组和α-ZAL组各指标均优于模型组(P<0.01)。EB组和α-ZAL组之间无显著性差异(P>0.05)。结论α-ZAL和EB一样能通过提高脑内抗氧化和降低脂质过氧化能力,拮抗Aβ和NO的神经毒性,明显改善AD模型小鼠的认知行为。

α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞活性氧产生及其激活信号通路的影响

目的探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激的人脐静脉内皮细胞中活性氧（ROS）产生及其对激活信号通路的影响。方法用小分子RNA干扰（siRNA）技术消除人脐静脉内皮细胞的NADPH氧化酶p47^phox亚基；用分子探针2，7-DCF测定细胞内ROS的产生量；用RT-PCR测定p47^phox mRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定p47^phox蛋白的表达；用Western印迹测定ERK2及核因子（NF）-κB、应激蛋白（SP-1）和活化因子蛋白的表达。结果TNF-α刺激使细胞内ROS的产生量较对照组高155，4％；α-玉米赤霉醇预处理能够剂量依赖地抑制TNF—α对ROS的诱导效应。TNF-α作用细胞24h后，p47^phox的mRNA表达水平较对照组高212．8％，蛋白的表达也明显高；α-玉米赤霉醇预处理使TNF-α诱导的p47^phox mRNA表达水平低63．0％，蛋白表达水平也明显下降。p47^phox的siRNA完全阻断TNF-α诱导ROS的产生。α-玉米赤霉醇预处理和p47^phox的siRNA均阻断TNF-α对细胞外信号调控激酶的激活和转录因子SP-1的核转位，明显地抑制了NF—κB的核转位。结论α-玉米赤霉醇能够抑制内皮细胞中TNF—α诱导的ROS的产生及由ROS激活的信号转导通路，主要机制是通过抑制NADPH氧化酶p47^phox亚基的表达。

α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞血红素氧化酶1基因表达及胞质游离钙水平的影响

目的探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子仅（TNF-α）刺激的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血红素氧化酶1（HO-1）表达及胞质游离钙水平的影响及其作用机制。方法用小分子RNA干扰（siRNh）技术消除HUVEC的NADPH氧化酶p47p^hox亚基；用分子探针2，7-DCF测定细胞内活性氧（ROS）的产生量；用RT-PCR测定HO-1 mRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定HO-1蛋白的表达；以Fluo-3／AM为探针，用激光共聚焦显微镜测定胞质游离钙整体水平的变化。结果TNF-α刺激使细胞内ROS的产生量较对照组增加了155％（228.3±50.6比89.4±23.7，P〈0.05）；α-玉米赤霉醇预处理呈剂量依赖地抑制TNF-α对ROS的诱导效应；p47p^hox的siRNA完全阻断TNF-α诱导ROS的产生。TNF-α刺激使细胞内HO-1的mRNA表达水平较对照组增加了145％（0.88±0.10比0.36±0.11，P〈0.01），蛋白的表达也明显增加；α-玉米赤霉醇预处理呈剂量依赖地抑制TNF-α对HO-1 mRNA表达的诱导效应；α-玉米赤霉醇预处理及转染p47p^hox的siRNA均明显降低TNF-α诱导的HO-1蛋白的表达。TNF-α刺激使内皮细胞胞质游离钙整体水平比对照组增加179％（107.3±4.9比38.5±0.6，P〈0.01）；α-玉米赤霉醇预处理及转染p47p^hox的siRNA分别使TNF-α诱导的胞质游离钙水平降低46％（58.5±0.3比107.3±4.9，P〈0.01）及57％（46.3±2.1比107.3±4.9，P〈0.01）。结论ROS仅部分介导TNF-α对HUVEC中HO-1表达的诱导作用，α-玉米赤霉醇主要通过抑制NADPH氧化酶途径产生的ROS而降低TNF-α诱导的HO-1表达及胞质游离钙水平增加。

α-玉米赤霉醇对成骨细胞增殖、分化以及OPG和RANKL mRNA表达的影响

目的:探讨α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZAL)对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1增殖、分化及护骨素(osteoprotegerin,OPG)和NF-кB受体活化配体(receptor activator of nuclear factor-кB ligand,RANKL)mRNA表达的影响。方法:传代培养小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1,采用不同浓度的α-ZAL作用于细胞72 h后,MTT法检测细胞增殖活性,PNPP法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,RT-PCR法检测ALP,OPG及RANKL mRNA的表达水平。结果:10-6～10-12mol·L-1的α-ZAL可显著抑制成骨细胞的增殖(P<0.05);显著增加ALP活性(P<0.05),但不同剂量间存在作用时间差异;并且可显著上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.05)。结论:α-ZAL可抑制成骨细胞的增殖、促进其分化,并可通过上调OPG/RANKL mRNA表达比值抑制破骨细胞的形成,有望作为骨质疏松症的治疗药物。