六味地黄汤对阿霉素肾病小鼠尿蛋白及肾小球p-p38 MAPK、α-actinin-4、synaptopodin的影响

目的探讨六味地黄汤对阿霉素肾病(adriamycin nephropaghy,ADRN)小鼠尿蛋白的干预作用及可能机制。方法30只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机选取5只为空白组,余下小鼠以单次尾静脉注射阿霉素(0.01 g·kg^(-1))复制ADRN模型,2周后将造模成功的小鼠随机分为模型组、贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组,每组5只。空白组、模型组予等体积注射用水灌胃,贝那普利组予0.0013 g·kg^(-1)贝那普利灌胃,低、中、高剂量六味地黄汤组分别予9.75、19.5、39 g·kg^(-1)六味地黄汤灌胃,每日1次,连续8周。自动生化仪检测小鼠24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清钾;HE染色法、电镜观察小鼠肾脏病理改变及足突形态;免疫组织化学法、Western bolt检测小鼠肾脏磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)、α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、突触孔蛋白(synaptopodin)的表达;RT-PCR检测小鼠肾脏α-actinin-4、synaptopodin mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、24 h尿量、血清白蛋白降低,24 h尿蛋白定量升高(P<0.05);肾小球系膜细胞增生,部分系膜区扩大、肾小管蛋白管型,间质可见炎性细胞浸润,足突广泛融合;α-actinin-4蛋白及mRNA、p-p38 MAPK蛋白表达升高(P<0.05),synaptopodin蛋白及mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,各干预组病理改变及足突融合均得到不同程度改善,贝那普利组及中、高剂量六味地黄汤组24 h尿蛋白定量减少,高剂量六味地黄汤组p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),低、中、高剂量六味地黄汤组synaptopodin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。贝那普利组及低、中、高剂量六味地黄汤组组间比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论六味地黄汤可能通过抑制p38 MAPK通路活化和上调α-actinin-4、synaptopodin蛋白及mRNA表达,改善肾脏病理及足突融合,减轻足细胞损伤,减少ADRN小鼠尿蛋白。

Nephrin,podocin及α-actinin在小鼠肾小球足细胞系的表达与分布

目的 :探讨nephrin ,podocin及α actinin在小鼠肾小球足细胞系 (MPC5)的表达与分布 ,为进一步研究上述分子间的相互作用建立稳定的实验平台。 方法 :培养小鼠MPC5,以γ 干扰素诱导在 33℃传代增生 ,继而在37℃培养两周使细胞分化成熟以用于实验研究。相差显微镜观察足细胞形态 ;免疫荧光染色观察nephrin ,podocin ,α actinin及WT1在足细胞的分布 ;RT PCR检测足细胞nephrin ,podocin及α actinin 4的mRNA ;免疫蛋白印迹检测nephrin ,podocin ,α actinin及WT1蛋白。 结果 :成熟足细胞呈星形且有突起形成。免疫荧光及免疫蛋白印迹显示足细胞特异性的表达WT1分子。免疫荧光染色可见nephrin和podocin在足细胞内均呈线状分布于胞膜表面 ,α actinin呈细丝状分布于胞质内及伸出的突起中。在mRNA水平及蛋白水平均检测到nephrin ,podocin和α actinin 4表达 ,其蛋白大小分别为 180KDa,4 5KDa和 10 0KDa。 结论 :首次在mRNA水平及蛋白水平证实了小鼠MPC5能够表达nephrin ,podocin及α actinin ,为进一步研究这些分子间的相互作用奠定了基础。

糖肾煎对早期2型糖尿病肾病大鼠足细胞α-actinin-4、ZO-1表达的影响

目的:探讨α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、紧密连接蛋白(ZO-1)在早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏表达与DN的关系,中药糖肾煎对保护肾脏的作用机制。方法:采用单肾切除+高脂饲料+小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,结合行为干预建立早期(气阴两虚型)2型糖尿病肾病病证结合大鼠模型,按随机数字表法分为假手术组(N组)、模型组(M组)、糖肾煎组(T组)、贝那普利组(B组)。干预16周,观察各组大鼠一般状况、空腹血糖(FBG)、负荷后血糖(P2h BG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、24 h尿白蛋白(24 h-UAlb)、尿β2微球蛋白(U-β2MG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr))、足细胞密度及病理改变,应用免疫组化及荧光定量PCR方法观察α-actinin-4、ZO-1及mRNA表达。结果:与N组比较,M组一般状况较差,FBG、P2h BG、FINS、HOMA-IR、24 h-UAlb、U-β2MG水平指标均有明显上升,α-actinin-4、ZO-1的累积光密度值(IOD)下降,PCR表达下降,足细胞密度较少,足突增宽、融合;与M组比较,T、Z组各指标均有改善;与B组比较,T组HOMA-IR、α-actinin-4、ZO-1的IOD有所改善,余指标比较差异无统计学意义。结论:中药糖肾煎能上调足细胞α-actinin-4、ZO-1的表达从而保护足细胞、延缓DN的进展。

牛α-actinin 1基因的克隆及其多态性与繁殖性状的关联分析

本研究以牛睾丸组织总RNA为模板，采用RT-PCR的方法合成了α-actinin1的eDNA，并进行了组织表达谱和生物信息学分析，结果表明：牛α-actinin1基因在肝脏、睾丸、肺、瘤胃、子宫、小肠、脾脏、心脏、脂肪和肾脏组织中表达，eDNA为2911bp，包含2679个碱基组成的开放读码框（53-2731bp），编码892个氨基酸，主要包含CH、SPEC和EFh3个结构域。此外，本研究以双胎和单胎鲁西牛、尼里一拉菲水牛、摩拉水牛、晋南牛、荷斯坦奶牛、西门塔尔牛和南阳牛为研究对象，通过测序和PCR—RFLP相结合的方法进行SNP检测和基因型分析，探讨基因多态性与产犊数之间的关系，结果表明：在α-actinin1基因第13内含子的669bp处存在1个A／G的突变，使得产生HaeⅢ多态，产生AA和AG2种基因型；其基因多态性与产犊数之间的关联分析结果显示A—G的突变对产犊数没有显著影响（P〉0．05）。

糖尿病肾病大鼠肾组织α-actinin-4表达及通络泄浊方的干预作用

目的:探讨α-actinin-4在糖尿病肾病大鼠肾组织中表达的变化,并观察通络泄浊方对其表达的影响。方法:采用链脲佐菌素(STZ)法制作大鼠模型,随机分为正常对照组、模型组、通络泄浊方组、科素亚组和通络泄浊方+科素亚组。采用Realtime-PCR及Westernblot方法检测肾组织α-actinin-4mRNA和蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,模型组mRNA表达和蛋白明显降低(P<0.01),给药组与模型组相比,mRNA和蛋白表达明显增高(P<0.01)。结论:α-acti-nin-4的表达降低参与了糖尿病肾病大鼠蛋白尿的发生;通络泄浊方可以通过上调DN大鼠肾组织α-actinin-4mRNA和蛋白的表达而改善大鼠的肾功能及蛋白尿水平。

祛风通络方对阿霉素诱导的肾病大鼠足细胞Synaptopodin、α-Actinin-4蛋白的影响

目的探讨祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞Synaptopodin和α-Actinin-4蛋白的作用。方法采用一次性尾静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)的方法,建立阿霉素肾病大鼠模型。3周后造模成功,进行24 h尿蛋白定量及血清生化项目检测。此后随机分为空白对照组(A组,n=12),模型组(B组,n=8),祛风通络方小、中、大剂量组(分别为C、D、E组,每组n=8)和阳性对照组(F组,n=8)。从第4周起,A组和B组给生理盐水,C、D、E组分别给祛风通络方1.0,2.1,4.2 g/ml,F组给泼尼松25 mg/kg。各组均灌胃给药,10 ml/kg,1次/d,连续28 d。期间进行24 h尿蛋白定量、血清生化指标检测,实验结束时用real-time PCR法及Western blot法检测足细胞骨架蛋白Synaptopodin mRNA、α-Actinin-4 mRNA及Synaptopodin、α-Actinin-4蛋白表达。结果 1各干预组均可有效减少尿蛋白,升高血浆白蛋白、降低总胆固醇的含量。2阿霉素肾病大鼠中α-Actinin-4 mRNA及蛋白表达升高,Synaptopodin mRNA及白表达下降。经祛风通络方干预后,各组Synaptopodin mRNA及蛋白表达均上调,α-Actinin-4 mRNA及蛋白表达下调。结论祛风通络方对阿霉素肾病大鼠的治疗作用伴随着改变足细胞骨架蛋白Synaptopodin和α-Actinin-4表达的改变而实现。

糖肾康颗粒对糖尿病肾脏疾病气阴两虚血瘀证患者尿α-actinin-4、Synaptopodin的影响

目的观察糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease, DKD)气阴两虚血瘀证患者尿α-肌动蛋白-4(α-actinin-4)、突触孔蛋白(Synaptopodin)水平的变化及糖肾康颗粒的干预作用。方法将70例符合纳入标准的DKD气阴两虚血瘀证患者随机分为糖肾康组、对照组各35例。最终实际完成64例,其中糖肾康组33例,对照组31例,并另设正常组20例。两组患者均予常规治疗,糖肾康组同时予以糖肾康颗粒冲服,疗程均为8周。检测两组患者治疗前后估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtrate rate,eGFR)、尿白蛋白肌酐比值(urinary albumin creatinine ratio,UACR)、 24 h 尿蛋白定量(24-hour urine protein,24hUP)、尿α-actinin-4、尿Synaptopodin、血清肌酐(serum creatine, SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)、餐后2 h血糖(2- hour plasma glucose,2hPG)及糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)水平,并观察中医证候积分值的变化。结果糖肾康组患者临床疗效显著优于对照组(P< 0.05)。两组患者证候积分值均随疗程增加而降低(P< 0.05 ),且糖肾康组积分下降幅度均明显大于同期对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者UACR、24hUP均显著下降(P<0.05),且糖肾康组均较同期对照组下降更为显著(P<0.05)。两组患者治疗前后BUN、SCr、eGFR、FPG、2hPG及HbA1c水平比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。治疗前,两组患者尿α-actinin-4、Synaptopodin水平均明显高于正常组(P< 0.05 )。治疗后,糖肾康组尿α-actinin-4、Synaptopodin水平均明显下降(P<0.05);而对照组尿α-actinin-4、Synaptopodin水平与治疗前比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论糖肾康颗粒可明显改善DKD气阴两虚血瘀证患者的临床症状,降低尿蛋白,其作用机制可能与降低尿α-actinin-4、Synaptopodin水平有关。

CT-1C末端多肽对昆明小鼠心肌肌小节α-Actin、α-Actinin及UCP_2表达的影响

目的:观察心脏营养素-1(CT-1)慢性作用所诱导的小鼠重构心肌中,肌小节收缩性蛋白α-Actin、细胞骨架蛋白α-Actinin及线粒体解偶联蛋白-2(UCP2)的表达情况。方法:实验组昆明小鼠腹腔注射CT-1C末端肽(carboxy-terminal polypeptide of cardiotrophin-1,CT-1-CP)1、2、3、4周(每组10只,雌雄各半)后,对照组小鼠(10只,雌雄各半)腹腔注射生理盐水4周后,摘取小鼠心脏标本,石蜡包埋,切5μm厚切片,采用SABC检测肌小节结构蛋白α-Actin、α-Actinin与UCP2在小鼠心肌中的表达情况;同时采用Western blot检测小鼠心肌组织中3种蛋白质的相对表达量。结果:免疫组化结果显示,α-Actin的阳性颗粒主要集中于细胞核的周围,α-Actinin则趋于向肌节的横纹处汇聚,而UCP2则较均匀地散布于肌细胞浆中。结合Western blot相对灰度的比较分析,在对照组,α-Actin的表达水平略高于α-Actinin和UCP2,但3者之间并无明显的差异(WB:F=0.249,P>0.05)。注射CT-1-CP后,α-Actin的表达基本呈逐渐减弱的趋势,但对照组与4个注射组之间并无明显差异(χ2=7.386,P>0.05);与之相反,α-Actinin的表达则呈逐渐增强的趋势,阳性细胞数的百分比和阳性颗粒的染色强度都逐渐增多,而且各组间呈现出明显差异(χ2=21.977,P<0.01);UCP2的表达则在1周后增强,2周后达最高值,随后出现降低,4周后降至接近对照组的水平。结论:CT-1-CP的慢性作用可导致肌小节不同结构蛋白的比例发生改变,α-Actin的表达减少,α-Actinin的表达增多;而线粒体UCP2的表达达到一定峰值后即开始降低。

CD2AP和α-actinin-4在大鼠阿霉素肾病模型中的表达

目的:观察CD2相关蛋白(CD2AP)和α-actinin-4这两种足细胞相关分子在大鼠阿霉素肾病模型中蛋白表达水平的变化,探讨它们与蛋白尿发生发展的相关性。方法:30只SD大鼠随机分为肾病模型组和正常对照组,建立阿霉素肾病模型,在2、4、6、8周,应用光镜、电镜观察肾组织的病理改变,BCA法检测24h尿蛋白排泄量,半定量WesternBlot的方法检测大鼠肾皮质中CD2AP和α-actinin-4的表达。结果:随着肾病模型组大鼠尿蛋白量逐渐增加,肾组织病理改变逐步加重,肾皮质CD2AP的表达量先明显增加,后逐渐降至对照组水平,2、4、6周分别为对照组的3.0、1.8、1.2倍,而α-actinin-4的表达量无明显变化。结论:阿霉素肾病模型大鼠肾皮质CD2AP和α-actinin-4这两种足细胞相关分子的蛋白表达规律不同,前者与蛋白尿的发生发展有一定程度的相关性,后者则与尿蛋白量的变化无关。

α-actinin-4在糖尿病肾病大鼠的表达及其与足细胞数目的相关性

目的:探讨糖尿病肾病发展过程中α-actinin-4的表达变化及其与足细胞数目的关系。方法:建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型,应用免疫组化及RT-PCR方法观察在糖尿病肾病发展过程中α-actinin-4的蛋白及mRNA表达变化,以及应用WT-1来标记足细胞核,观察足细胞数目的变化。结果:8周时,糖尿病组染色强度较正常组明显增高(P<0.01),12周时变化更为明显(P<0.01)。α-actinin-4的mRNA的表达水平在各时间点与组化结果相同。8周时,糖尿病组足细胞数目较正常组明显降低(P<0.05),12周时变化更为明显(P<0.01)。α-actinin-4与足细胞数目呈负相关关系(r=-0.957,P<0.01),足细胞数目与尿蛋白呈负相关(r=-0.95,P<0.01)。结论:α-actinin-4在糖尿病肾病发展过程中表达增高,并与足细胞数目呈负相关,α-actinin-4的表达增高与尿蛋白的发生密切相关。

氯沙坦对晚期糖基化终产物诱导足细胞α-actinin-4表达的干预作用

目的观察晚期糖基化终产物(AGEs)对足细胞α-actinin-4的影响及氯沙坦的干预作用。方法不同浓度的AGEs(0,20,40,80μg/mL)干预足细胞24 h后,采用免疫印迹法检测足细胞α-actinin-4的表达。通过激光共聚焦显微镜观察足细胞肌动蛋白F-actin和α-actinin-4的分布,并在氯沙坦预处理足细胞后,观察α-actinin-4和F-actin的改变。结果与对照组相比,AGEs(80μg/mL)可明显降低足细胞α-actinin-4的表达[(62±13)%vs.100%,P<0.05],使α-actinin-4由膜周分布转为核周分布,并使肌动蛋白F-actin发生重构,而氯沙坦预处理可减轻AGEs介导的α-actinin-4的下调[(80±14)%vs.(62±13)%,P<0.05]和α-actinin-4和F-actin的重构,P<0.05。结论 AGEs可下调α-actinin-4表达,介导骨架蛋白的重构,而氯沙坦可减轻AGEs介导的这些改变。

α-Actinin影响丙型肝炎病毒非结构蛋白与脂筏的关联及复制

本文旨在探讨α-actinin参与丙型肝炎病毒(HCV)复制的机制。将α-actinin转染Huh7.5细胞,用JFH1感染,发现过表达α-actinin可显著增加HCVRNA水平及非结构蛋白表达,感染性HCV颗粒也同时增多。膜漂浮实验显示,α-actinin可与HCV非结构蛋白NS5A共定位于脂筏。抑制内源性α-actinin表达,可使复制子细胞内NS5A表达减少,且对非离子去污剂敏感而从脂筏脱落。免疫荧光实验显示,NS5A与内质网标志分子calnexin核周共定位消失。以上结果提示,α-actinin可通过影响非结构蛋白与脂筏的关联而参与HCV RNA的合成,为临床治疗及研制新型抗HCV药物提供理论依据和实验基础。

α-actinin2增加SK2通道在HEK293膜蛋白的表达(英文)

目的:证实α-Actinin 2与小电导钙激活钾通道(Small Conductance Ca^(2+)-activated K^+Channels,SK)的共同表达增加SK2在HEK293细胞膜上的表达。方法:HEK293细胞用RPMI 1640培养基培养。将HEK293细胞分为两组,对照组细胞转染pIRES—SK2质粒,实验组细胞共转染pIRES—SK2和pcDNA3—α-actinin2质粒。免疫荧光共聚焦屈微镜和蛋白印迹技术检测SK2通道蛋白在HEK293细胞膜上的表达。结果:免疫荧光共聚焦显微镜检测到转染pIRES—SK2质粒的HEK293细胞膜上有SK2通道蛋白的表达。蛋白印迹技术显示实验组蛋白条带亮度明显高于对照组。结论:α—Actinin 2能增加SK2在HEK293细胞膜上的表达。

α-actinin-4在糖尿病大鼠的表达及贝那普利对其的干预作用

目的探讨糖尿病肾病发展过程中α-actinin-4的表达变化及贝那普利对其的干预作用。方法建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型，贝那普利对其干预，应用免疫组化及RT-PCR方法观察在糖尿病肾病发展过程中α-actinin-4的蛋白及mRNA表达变化。结果8周时，糖尿病组染色强度较正常组明显增高（P〈0．01），12周时变化更为明显（P〈0．01）。α-actinin-4的mRNA的表达水平在各时间点与组化结果相同。贝那普利干预组8周时α-actinin-4表达较糖尿病组明显降低（P〈0．05），而在12周时其表达仍较糖尿病组低，但无统计学意义。结论α-actinin-4在糖尿病肾病发展过程中表达增高，贝那普利能下调其表达。

糖肾平对糖尿病肾病大鼠α-actinin-4表达及足细胞数目影响

目的：探讨糖肾平对糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）大鼠发病过程中足细胞表达的影响,及α-actinin-4的表达与足细胞数目和DN大鼠蛋白尿的相关性。方法：采取腹腔注射STZ诱导糖尿病肾病大鼠模型。测定大鼠24 h尿蛋白定量;应用免疫组织化学方法观察DN大鼠肾小球中α-actinin-4和WT-1表达情况。进一步设计体外细胞培养试验,采用Western blotting方法检测糖肾平对足细胞α-actinin-4和WT-1表达的影响。结果：糖肾平组大鼠24 h尿蛋白定量明显降低（P〈0.01）。与正常组相比,DN组大鼠肾组织中α-actinin-4蛋白表达水平明显降低（P〈0.01）,且α-actinin-4表达与尿蛋白呈负相关关系（r=-0.384,P〈0.05）。模型组足细胞数目较正常组明显降低（P〈0.01）,且α-actinin-4表达与足细胞数目呈正相关关系（r=0.498,P〈0.01）。糖肾平治疗后α-actinin-4的表达水平及足细胞数目均明显升高（P〈0.01）,且体外足细胞Western blotting实验结果与免疫组化结果一致。结论：α-actinin-4表达降低,足细胞数目减少。α-actinin-4表达与蛋白尿呈负相关,与足细胞数目呈正相关。糖肾平可能通过调控糖尿病肾病肾组织actinin-4蛋白表达,保护大鼠足细胞,进而降低24 h尿蛋白定量,起到保护糖尿病肾病肾功能及延缓病程进展的作用。

火鸡组织滴虫α-actinin1蛋白的原核表达及其在虫体中的定位分析

为研究火鸡组织滴虫(Histomonas meleagridis)α-actinin1蛋白(Hmα-actinin1)的功能,本研究根据GenBank中火鸡组织滴虫α-actinin1基因序列(FM200068)设计引物,经RT-PCR从虫体总RNA中扩增Hmα-actinin1基因,全长为1 839 bp,克隆至p ET-28a(+)构建原核表达载体后,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析显示,rHmα-actinin1蛋白以可溶形式存在,相对分子量约为73 ku。采用His标签层析法纯化重组蛋白后,常规免疫BALB/c小鼠后采集血清,利用间接ELISA检测结果显示血清抗体效价达1.102 400。Western blot分析rHmα-actinin1蛋白的抗原性,结果显示该蛋白能同时被鸡源、火鸡源火鸡组织滴虫阳性血清及鼠抗rHmα-actinin1阳性血清特异性识别。利用间接免疫荧光检测天然蛋白Hmα-actinin1在虫体中的分布,结果显示该蛋白主要分布于虫体的胞质内。上述结果表明,该蛋白具有很好的抗原性,本研究为火鸡组织滴虫治疗药物和疫苗研制提供了新的靶标,也为进一步研究火鸡组织滴虫致病机制奠定了基础。

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球α-actinin-4和Desmin表达的干预作用及机理研究

目的:观察祛风通络方对阿霉素肾病(AN)大鼠肾小球滤过屏障及α-actinin-4和Desmin的影响,探讨"祛风通络方"治疗MCN、改善蛋白尿的作用机理,同时对"风伏肾络"的病机理念进行理论的探讨和阐述,为"祛风通络方"的临床应用提供分子原子依据。方法:86只雄性清洁级Sprague-Dawley(SD)健康大鼠随机分为空白对照组(A组)和模型组(B组)、祛风组(祛风通络方、C组)、激祛组(激素+祛风通络方、D组)和激素组(E组)。分别给予相应干预,再次于不同时间测24h蛋白尿及相关生化指标,同时观察大鼠一般情况,肾小球滤过屏障超微结构变化,同时免疫组化染色结果判定[1],测定各组大鼠肾脏组织中α-actinin-4和Desmin的阳性面积百分比,及肾小球中着色的阳性物质光密度值,以判断表达和分布变化。并分析α-actinin-4和Desmin表达变化与尿蛋白的关系,两者之间的关系等。结果:造模成功时与空白对照组比较,模型组大鼠出现:超微结构显示GBM大致正常,足突间距增宽、融合甚至脱落、消失,α-actinin-4和Desmin在足细胞表达上调,高于空白对照组(Pn均<0.01)。α-actinin-4总体量没有显著变化(Pn>0.05),Desmin总体量明显上调(Pn<0.01)。干预结束时与模型组比较:各干预组超微结构病变均有不同程度改善,足突结构较前清晰,各干预组肾小球足细胞α-actinin-4蛋白和Desmin蛋白平均光密度值表达下调,D组减少最明显(Pn<0.01),C组和E组无显著差异(Pn>0.05)。各干预组分布较前规律,差异有统计学意义(Pn<0.05)。结论:1)祛风通络方可以降低阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄,且与激素联用效果更佳,表明其可以改善大鼠低蛋白状态、脂质代谢。2)祛风通络方可以改善α-actinin-4和Desmin的表达分布,可能是该方实现修复足细胞骨架的结构和功能并抑制足细胞进一步损伤的机制之一。

榛花消肾安胶囊干预实验性糖尿病大鼠足细胞相关蛋白α-actinin-4的研究

[目的]通过实验观察实验性糖尿病(DM)大鼠的肾脏及足细胞相关蛋白α-actinin-4的表达,表明"榛花消肾安胶囊"治疗糖尿病肾病的有效性。[方法]建立链脲佐菌素(STZ)诱导的实验性糖尿病大鼠模型分为DM模型组、对照组、中药组、西药组,中药组给予榛花消肾安胶囊,西药组给予厄贝沙坦片;检测空腹血糖、24 h尿微量白蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),应用光学显微镜和透射电镜及免疫组化方法观察足细胞骨架蛋白α-actinin-4的表达;应用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术检测α-actinin-4 m RNA表达。[结果]中药干预之后中药高、中、低剂量组及西药对照组尿量较DM模型组明显减少(P<0.01);中药各剂量组与西药对照组大鼠血糖均明显低于DM模型组(P<0.01);中药各剂量组和西药对照组大鼠α-actinin-4及m RNA含量均低于DM模型组(P<0.01)。[结论]榛花消肾安胶囊能够降低实验性DM大鼠血糖、Scr、BUN,减少尿微量白蛋白的排泄,而改善肾功能;能够抑制实验性DM大鼠早期肾脏体积增大,而抑制α-actinin-4蛋白表达及其m RNA的表达。

益气活血化湿方对被动型Heymann肾炎模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白α-actinin-4和CD2AP的调节作用

目的探讨益气活血化湿方及其拆方对被动型Heymann肾炎(PHN)模型大鼠足细胞裂孔膜蛋白α-actinin-4和CD2AP的调节作用。方法取雄性Wistar大鼠,制备经典的PHN模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、环孢素组、益气活血化湿方全方组、益气方组、活血方组和化湿方组,另取正常大鼠为对照组。各药物组分别灌胃给予相应药液,对照组和模型组大鼠灌胃给予等量0.9%NaCl溶液,连续6周。分别于第0、2、4、6周对各只大鼠眼眶静脉丛采血,代谢笼收集24 h尿液。全自动生化分析仪检测血清样本白蛋白(Alb)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平以及尿液样本24 h尿蛋白定量(UPRO)。干预结束后,取双侧肾脏。HE染色后光镜下观察肾组织形态学变化,透射电镜下观察肾小球基底膜、足细胞及足突的形态学变化。PCR和Western blot检测肾组织中α-actinin-4和CD2AP的mRNA及蛋白表达水平。结果①与对照组相比,模型组大鼠在各时间点UPRO和SCr水平均明显升高(P<0.05),Alb水平明显下降(P<0.05)。与模型组相比,环孢素组第4、6周UPRO水平明显下降(P<0.05),第2、4、6周Alb水平明显下降(P<0.05),但第2、4、6周SCr和BUN水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,全方组仅第6周UPRO水平明显下降(P<0.05)。与环孢素组相比,全方组第2、4、6周SCr和BUN水平明显降低(P<0.05)。②与对照组相比,模型组光镜下观察可见肾小球明显肿大,肾小球基底膜弥漫性增厚,毛细血管襻受压,部分肾小管上皮细胞肿胀;电镜下显示上皮细胞下大量电子致密物沉积,足突广泛融合或消失。与模型组相比,各药物干预组的肾小球病变程度均有减轻。③与对照组相比,模型组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CD2AP mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,环孢素组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.05),CD2AP mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。与模型组相比,全方组α-actinin-4蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。④与模型组比较,各拆方组在各时间点的UPRO、Alb、SCr和BUN水平均无明显变化(P>0.05)。病理学观察显示各拆方组肾小球损伤程度较模型组明显减轻。与模型组相比,益气方组α-actinin-4 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.05),活血方组CD2AP mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论益气活血化湿方可明显降低PHN模型大鼠尿蛋白水平,减轻肾小球损伤,其机制可能与下调裂孔膜蛋白α-actinin-4表达、上调CD2AP表达有关。其拆方益气方具有抑制α-actinin-4表达的作用,活血方具有促进CD2AP表达的作用。