INDUCTION OF APOPTOSIS OF HUMAN LEUKEMIA CELLS BY α-ANORDRIN

The apoptosis-inducing effect of a-anordrin (ANO)was investigated in this study. ANO 10-50 AM inhibited the growth of both human leukemia HL-60 and K562cells by 19-52%. Electron microscopy showed that ANO-treated cells exhibited the drastic changes including cell shrinkage, chromatin condensation, nuclear fragmentation, typical of apoptosis. Gel electrophoresis of DNA extracted farm botlt HL-60 and K562 cells treated with ANO revealed characteristic 'ladder' pattern.ANO 50 μM for 48 h caused approximately 50-70%apoptosis. Cycloheximide (CHX) and actinomycin D (Act D) did not prevent ANO-induced apoptosis in K562cells, however, apoptosis of HL-60 cells in the presence of ANO was partially blocked by these two agents.Moreover, it was found that tamoxifen synergically potcntiated and cstradiol partially antagonized ANOinduccd apoptosis in HL-60 cells. Results demonstrated that ANO could induce tumor cell apoptosis, which might contribute to its anticancer action.

Enzyme Dynamic Study on Calmodulin Ca^(++)-Mg^(++)-ATPase System of Red Blood Cells Inhibited byα-anordrin and Probimane

To clarify the possible mechanisms of α anordin and probimane on calmodulin Ca ++ Mg ++ APTase system, enzyme dynamic study was carried out by determining three dynamic parameters [the substrate concentration(ATP) response curve, dose(inhibitors) response curve and time response curve]. Our data have shown that the inhibitory rates of α anordrin and probimane are unrelated to substrate(APT) concentrations, but related to calmodulin concentrations. The inhibition of α anordrin and probimane is very quick that is completed within 1 to 5 min and can maintain more than 1 hr in the same inhibitory rates. So it is possible that α anordrin and probimane are calmodulin competitors with calmodulin like binding whose actions can occur by affecting the reaction balance of substrate and product on target enzymes of calmodulin( Ca ++ Mg ++ ATPase).

大鼠软骨肉瘤对甾醇类激素的依赖性及其与α-双炔失碳酯治疗关系

目的 研究Ｓｗａｒｍ 大鼠软骨肉瘤（ＳＲＣＳ） 的体内外生长对几种甾醇类激素的依赖性及其与α双炔失碳酯（αＡＮＯ）抑制ＳＲＣＳ生长之间的关系。 方法 在大鼠体内观察了肾上腺、卵巢和睾丸摘除以及αＡＮＯ对ＳＲＣＳ生长影响，用阿尔新蓝法观察了瘤组织的病理学改变，用免疫组化法研究了雌激素受体（ＥＲ） 和睾丸酮受体（ＴＲ） 的表达；在体外用台盼蓝排染法研究了氢化可的松、雌二醇、睾丸酮以及αＡＮＯ对ＳＲＣＳ细胞生长的影响。 结果 ＳＲＣＳ的生长在肾上腺摘除的大鼠中受到明显抑制，阿尔新蓝阳性基质减少，这些现象在雄鼠中比在雌鼠中明显，ＳＲＣＳ在卵巢和睾丸摘除的大鼠中的生长没有发生显著改变，αＡＮＯ 对ＳＲＣＳ的体内生长有较好的抑制作用，同时ＥＲ表达上调，而对ＴＲ无明显影响，三种激素在体外对ＳＲＣＳ都有促生长作用，其活性高低顺序为氢化可的松＞ 雌二醇＞ 睾丸酮，αＡＮＯ能够拮抗前二者的这种促生长活性，对睾丸酮无此作用。 结论 一些甾醇类激素能影响ＳＲＣＳ的生长，尤其是糖皮质激素的作用最显著；αＡＮＯ抑制ＳＲＣＳ的生长与其激素拮抗活性有关；

放线菌素D不能抑制α-双炔失碳酯诱导的白血病K562细胞凋亡

目的：研究放线菌素Ｄ（ＡｃｔＤ）对α－双炔失碳酯（α－ａｎｏｒｄｒｉｎ，ＡＮＯ）诱导的人白血病Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用光学显微镜观察细胞形态学变化；用流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分别检测ＤＮＡ含量和ＤＮＡ断裂。结果：ＡＮＯ５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理人白血病Ｋ５６２细胞２４ｈ引起大约１０％Ｋ５６２细胞产生凋亡。同时加入ＲＮＡ合成抑制剂ＡｃｔＤ０．００５μｍｏｌ·Ｌ－１不能抑制ＡＮＯ诱导的凋亡，相反地，ＡｃｔＤ加强ＡＮＯ的这一作用，使凋亡细胞从１０％上升到２０％。ＡｃｔＤ０．５μｍｏｌ·Ｌ－１本身可诱导约３２％的Ｋ５６２细胞凋亡。Ｓ期细胞对ＡＮＯ诱导的凋亡较敏感，而ＡｃｔＤ则较易诱导Ｓ期和Ｇ２－Ｍ期细胞凋亡。结论：ＡＮＯ诱导的Ｋ５６２细胞凋亡不依赖于新的ＲＮＡ合成。

α-双炔失碳酯等对Swarm大鼠软骨肉瘤在小鼠肾囊膜下生长的抑制作用

目的 研究双炔失碳酯 (ANO)及其 α异构体 (α-ANO)、三苯氧胺 (TAM)、顺铂 (CDDP)、全反式维甲酸(ATRA )对 Swarm大鼠软骨肉瘤 (SRCS)体内外生长的影响和机制。方法 观察药物 SRCS在小鼠肾囊腺下体内生长的影响 ;von Kossa法观察药物治疗对 SRCS中钙盐沉积的作用 ;用台盼蓝排染法观察了药物对 SRCS细胞体外生长的影响 ;以对硝基苯酚磷酸酯为底物研究药物对 SRCS细胞中碱性磷酸酯酶 (AL Pase)活性的影响 ;用邻甲酚酞络合酮比色法测定 SRCS细胞中的钙含量。结果 几种药物对 SRCS在小鼠肾囊膜下体内生长均有程度不一的抑制作用 ,α- ANO在 2 0 m g/ kg剂量下的生长抑制率为 79.4% ;CDDP、ATRA、TAM、α- ANO和 ANO作用 96 h对 SRCS细胞体外生长的 IC5 0 分别为 0 .45、1.47、115 .2、16 1.7和 2 41.5μmol/L ;α- ANO和 ATRA在体内可引起 SRCS中出现钙盐沉积 ;在体外作用 96 h可使 SRCS细胞中 AL Pase活性和钙含量显著性升高 ;而 CDDP和 TAM无上述现象。结论 α- ANO和 ATRA抑制 SRCS生长与其诱导 SRCS向成骨化方向分化有关 ,提示诱导分化治疗可能为临床治疗软骨肉瘤的新的有效途径。

α－双炔失碳酯及其代谢产物双炔失碳醇的体外抗肿瘤作用比较

双块失碳酯是国内常用的探亲避孕药，它的α异构体在体内外有明显的抗癌活性。本文比较了α－双炔失碳酯及其体内代谢产物双炔失碳醇的体外抗癌作用。结果表明，α－双块失碳酯对体外培养的六种肿瘤细胞株的生长抑制作用均比双炔失碳醇强一倍左右，其对ＨｅｐＡ细胞ＤＮＡ和ＲＮＡ合成的抑制作用亦强于双炔失碳醇，因此，至少从体外实验来看，双炔失碳醇并非α小双炔失碳酯的抗癌活性产物。

α-双炔失碳酯对前列腺癌LNCaP裸鼠移植瘤生长影响的研究

目的研究α-双炔失碳酯(α-anordrin)对前列腺癌雄激素依赖细胞系LNCaP裸鼠皮下移植瘤生长的影响并探讨其作用机制。方法建立前列腺癌雄激素依赖细胞系LNCaP裸鼠皮下移植瘤模型,将27只荷瘤裸鼠按肿瘤体积大小平均分为3组:对照组、α-双炔失碳酯1mg.kg-1组、5mg.kg-1组。皮下注射给药,隔天一次,给药周期30天,每隔5天测量肿瘤体积。于末次给药24h后摘眼球取血,测量血浆睾酮(T)、前列腺特异膜抗原(PSA)水平;取睾丸、精囊腺和前列腺称重;取肿瘤称重,并对瘤组织进行组织病理学检查和免疫组化Ki67、PCNA检测。计算肿瘤体积,抑瘤率,绘制生长曲线。结果α-双炔失碳酯给药组肿瘤体积、重量均小于给药组,1mg.kg-1组抑瘤率为34%(P<0.05),5mg.kg-1组抑瘤率为25%(P>0.05);给药组和对照组间血浆PSA含量无明显差别,PCNA和Ki67阳性表达率亦无差别。给药组裸鼠血浆T水平、睾丸、精囊腺重量显著低于对照组(P<0.01),前列腺重量亦有减轻。结论α-双炔失碳酯在低剂量下即可对前列腺癌雄激素依赖细胞系LNCaP裸鼠皮下移植瘤的生长产生抑制作用,并能显著降低裸鼠血浆T水平,抑制其性腺的正常生长。其抗肿瘤的机制可能与抑制体内雄激素分泌有关。

α-双炔失碳酯等对Swarm大鼠软骨肉瘤生长的抑制作用

目的：研究双炔失碳酯（ＡＮＯ） 及其α异构体（α－ ＡＮＯ） 、三苯氧胺（ＴＡＭ） 、顺铂（ＣＤＤＰ） 和全反式维甲酸（ＡＴＲＡ） 对Ｓｗａｒｍ 大鼠软骨肉瘤（ＳＲＣＳ） 体内外生长的影响及其机制。方法：观察了ＡＮＯ 等对ＳＲＣＳ 在大鼠体内生长的影响， 用Ｓｔｅｅｄ ｍａｎ 和Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ 法观察了药物作用后ＳＲＣＳ 的病理学改变， 用免疫组织化学技术观察了纤维连接蛋白（ＦＮ） 表达的变化；用ＭＴＴ 方法研究了药物对ＳＲＣＳ 细胞体外生长的影响，用台盼蓝排染法观察了雌二醇、氢化可的松和睾丸酮单独以及与药物合用对ＳＲＣＳ 细胞体外生长的影响； 以对硝基苯酚磷酸酯为底物观察了药物对ＳＲＣＳ 细胞中碱性磷酸酯酶（ ＡＬＰａｓｅ） 活性的作用。结果： 几种药物对ＳＲＣＳ 在大鼠体内的生长都有抑制作用，其中ＣＤＤＰ 和ＡＴＲＡ 作用最显著，分别在１ｍｇ／ｋｇ 和１０ｍ ｇ／ｋｇ 剂量下抑制率都达到了７０ ．６ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ，但后者无明显的毒副作用。经ＡＮＯ、α－ ＡＮＯ 和ＡＴＲＡ 治疗后的瘤组织出现钙盐沉积，同时ＦＮ 表达减少。ＡＮＯ、α－ＡＮＯ、ＴＡＭ 、ＡＴＲＡ 和ＣＤＤＰ 对ＳＲＣＳ 细胞体外生长的ＩＣ５０ 分别为２３２ ．２ 、１５?

α－双炔失碳酯诱导人白血病K562细胞凋亡

目的：研究α双炔失碳酯（Ａｎｏ）的抗肿瘤作用．方法：形态学研究分别应用光学显微镜和电子显微镜．细胞膜完整性检测用台盼蓝排除法．用流式细胞仪及琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ断裂．结果：Ａｎｏ２５－５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理Ｋ５６２细胞４８ｈ，细胞生长被明显抑制，５０μｍｏｌ·Ｌ－１时抑制率达６７％．细胞主要阻滞在Ｇ１期．处理后的细胞染色质凝缩，核断裂，体积缩小，呈典型的凋亡改变．Ｋ５６２细胞经Ａｎｏ５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理２４－４８ｈ后，提取细胞ＤＮＡ进行电泳，呈现典型的“ｌａｄｄｅｒ”带型．流式细胞仪检测约有７０％细胞发生凋亡，Ｓ期细胞比较敏感．此时，虽然发生广泛的ＤＮＡ断裂，但细胞膜仍然完整，排除台盼蓝．Ａｎｏ５０μｍｏｌ·Ｌ－１处理Ｋ５６２细胞８ｈ即能诱导部分细胞发生凋亡．结论：Ａｎｏ能诱导Ｋ５６２细胞凋亡．

α-双炔失碳酯抗激素依赖型与非激素依赖型前列腺癌的作用比较

目的比较α-双炔失碳酯(α-Ano)对激素依赖型与非激素依赖型前列腺癌体内外作用强弱的差别。方法应用SRB细胞染色法检测α-Ano对人前列腺癌激素依赖型细胞LNCaP、RV1、L1A和非激素依赖细胞DU145、PC-3生长的影响;裸鼠皮下接种人前列腺癌细胞RV1、PC-3,构建实体瘤模型,成瘤后分组并灌胃给药,观察测量肿瘤体积及质量变化,计算肿瘤增长百分率和抑瘤率,比较α-Ano对激素依赖型和非激素依赖型人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。结果α-Ano作用后,LNCaP、RV1和L1A细胞生存率均低于DU145、PC-3细胞;α-Ano高低剂量组均对裸鼠皮下RV1细胞移植瘤具有较强的抑制生长作用,而对PC-3细胞移植瘤作用较弱,仅高剂量组有一定抑制作用。结论α-Ano对激素依赖型前列腺癌的抑制作用强于非激素依赖型前列腺癌。