目的:探讨解整合素金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM17)在人胰腺癌细胞株中的表达及其对细胞增殖迁移的影响。方法:利用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测3种人胰腺癌细胞株内ADAM17mRNA和蛋白的表达水平。构...目的:探讨解整合素金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM17)在人胰腺癌细胞株中的表达及其对细胞增殖迁移的影响。方法:利用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测3种人胰腺癌细胞株内ADAM17mRNA和蛋白的表达水平。构建可诱导表达ADAM17-shRNA的慢病毒载体,转染人胰腺癌细胞株,并筛选出稳定转染的克隆细胞株。在不同浓度(0,30μg/m L)的多西环素诱导ADAM17-shRNA表达后,通过CCK-8法和细胞划痕实验检测人胰腺癌细胞的体外增殖、迁移能力。结果:ADAM17 mRNA及蛋白在人胰腺癌细胞株PANC1、SW1990和Patu8988中均有表达。与未诱导表达ADAM17-shRNA的对照组相比,诱导表达特异性ADAM17-shRNA后,细胞ADAM17蛋白表达和体外增殖、迁移能力均受到明显抑制(均P<0.05)。结论:ADAM17在人胰腺癌细胞中高表达,在其增殖、迁移过程中可能发挥重要作用。展开更多
目的:克隆和构建含有肿瘤坏死因子-α转换酶金属蛋白酶区(m etalloprote inase dom ain of hum an tumor necrosis factor-αconverting enzym e,TACEmp)基因表达载体,并在大肠埃希菌中高效表达。方法:用RT-PCR方法,从THP-1细胞中扩增出...目的:克隆和构建含有肿瘤坏死因子-α转换酶金属蛋白酶区(m etalloprote inase dom ain of hum an tumor necrosis factor-αconverting enzym e,TACEmp)基因表达载体,并在大肠埃希菌中高效表达。方法:用RT-PCR方法,从THP-1细胞中扩增出TACEmp基因片段,插入表达载体pET-D sbAmut,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;转化到大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,通过SDS-PAGE电泳分析表达产物。结果:克隆TACEmp基因并构建重组表达载体pET-D sbAmut-TACEmp转化入BL21,IPTG诱导后获得高效表达的TACEmp融合表达蛋白。结论:利用分子伴侣融合蛋白技术使TACEmp在原核表达系统中获得了高效可溶性表达。展开更多
文摘目的:克隆和构建含有肿瘤坏死因子-α转换酶金属蛋白酶区(m etalloprote inase dom ain of hum an tumor necrosis factor-αconverting enzym e,TACEmp)基因表达载体,并在大肠埃希菌中高效表达。方法:用RT-PCR方法,从THP-1细胞中扩增出TACEmp基因片段,插入表达载体pET-D sbAmut,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;转化到大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,通过SDS-PAGE电泳分析表达产物。结果:克隆TACEmp基因并构建重组表达载体pET-D sbAmut-TACEmp转化入BL21,IPTG诱导后获得高效表达的TACEmp融合表达蛋白。结论:利用分子伴侣融合蛋白技术使TACEmp在原核表达系统中获得了高效可溶性表达。
