慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者血清腺苷脱氨酶、α-L-岩藻糖苷酶和AFP-L3水平变化及其临床意义探讨

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)、乙型肝炎肝硬化(LC)和乙型肝炎相关性原发性肝癌(PLC)患者血清腺苷脱氨酶(ADA)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和甲胎蛋白-L3(AFP-L3)水平变化及其临床意义。方法2020年1月~2022年4月我院诊治的CHB患者76例、LC患者31例和乙型肝炎相关性PLC患者29例,采用酶比色法检测血清ADA水平,采用速率法检测血清AFU水平,采用ELISA检测血清AFP-L3水平。对CHB患者常规行肝活检术。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清指标诊断PLC的效能。结果46例G2~G4的CHB患者血清ADA、AFU和AFP-L3水平分别为(29.6±5.1)μ/L、(34.7±5.0)μ/L和(6.9±1.2)%,显著高于30例G0/G1的CHB患者【分别为(25.4±3.9)μ/L、(29.5±5.2)μ/L和(5.8±0.8)%,P<0.05】,55例S2~S4的CHB患者血清ADA、AFU和AFP-L3水平分别为(43.8±10.1)μ/L、(66.5±18.8)μ/L和(8.3±1.3)%,显著高于21例S0/S1的CHB患者【分别为(28.1±6.0)μ/L、(33.0±8.4)μ/L和(6.4±1.1)%,P<0.05】;PLC患者血清ADA、AFU和AFP-L3水平分别为(51.3±5.2)μ/L、(82.0±9.5)μ/L和(9.2±1.3)%,显著高于LC患者【分别为(38.1±4.6)μ/L、(51.8±5.1)μ/L和(7.8±1.1)%,P<0.05】或CHB患者【分别为(26.5±4.6)μ/L、(30.9±5.6)μ/L和(6.1±0.8)%,P<0.05】;分别以血清AFP-L3=7.9%、AFU=55.1μ/L和ADA=46.0μ/L为截断点,AFP-L3诊断PLC的AUC为0.857,其灵敏度为86.2%,特异度为88.8%,显著优于AFU(分别为0.752、79.3%和77.6%)或ADA(分别为0.722、75.8%和76.6%,P<0.05)。结论应用血清AFP-L3水平诊断乙型肝炎患者罹患PLC的效能显著高于血清ADA或AFU水平,值得临床进一步验证。

S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖的3-氨基-3-羧基丙基利用酶研究进展

S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是生物体内重要的辅因子。SAM的结构中具有3个不稳定的C-S键,不同的SAM依赖酶能够选择性地切割其中不同的C-S键来催化各种类型的反应。其中,利用SAM甲基部分的甲基转移酶和腺苷部分的SAM自由基酶被广泛研究。UniProt数据库中保存了超过1800000条SAM依赖的甲基转移酶序列;SAM自由基酶也已经成为最大的酶家族之一,数目超过700000个。但利用SAM中3-氨基-3羧基丙基(3-amino-3-carboxypropyl,ACP)的酶却报道相对较少,本文对目前这一类酶的研究进行分类介绍,并对这一领域未来研究方向进行展望。

O-(3-^(18)F-氟代丙基)-L-酪氨酸的合成及其生物分布

采用两步法合成氨基酸代谢显像剂O (3 18F 氟代丙基) L 酪氨酸(FPT)。首先,18F-与1,3 二对甲苯磺酸丙二酯(TsOCH2CH2CH2OTs)发生亲核氟化取代反应,生成3 18F 1 对甲苯磺酸丙酯(18FCH2CH2CH2OTs);然后,18FCH2CH2CH2OTs与L 酪氨酸二钠反应生成FPT。FPT总合成时间约为70min,未校正总放化产率为25%～30%,放化纯度大于95%。FPT在正常小鼠、肿瘤模型、炎症模型鼠体内的生物分布及荷瘤裸鼠PET显像结果表明:肾、肝、肺、血液等脏器放射性摄取较高,滞留时间较长,脑摄取放射性较低。FPT可被肿瘤细胞高摄取,而被炎症组织低摄取。给药后180min,荷瘤裸鼠PET显像清晰,肿瘤/肝脏放射性比值约为1.3。FPT制备简便,可以区分肿瘤和炎症,可望成为一种肿瘤氨基酸代谢PET显像剂。

手性5-l-氧基丁内酯并[3,4-d]-3-取代基-异噁唑啉类化合物的合成

研究了手性元 5 -( R) -( l-氧基 ) -2 ( 5 H ) -呋喃酮与取代苯甲醛肟以次氯酸钙作为氧化剂进行的区域选择性原位 1 ,3 -偶极环加成反应 ,同步生成两个新的手性中心 ,得到了一系列光学纯丁内酯并 [3 ,4-d]-3 -取代基 -异唑啉类化合物 ;应用波谱学手段及 X射线单晶衍射法确证了产物的绝对构型 ,并对产物的核磁共振氢谱规律性加以总结 .

N-异喹啉-3-羧酸-L-亮氨酸苄酯抗人食道癌作用的研究

目的:体内外研究N-异喹啉-3-羧酸-L-亮氨酸苄酯(N-isoquinoline-3-carbonyl-L-Leucinebenzylester,IQ-L-OBzl)对人食道癌细胞体抗肿瘤作用。方法:MTT法检测细胞活性;检测食管癌裸鼠移植瘤模型的瘤重,计算抑瘤率及外周血白细胞数;流式细胞仪检测细胞内活性氧(intracellular reactive oxygen species,ROS)的水平。结果:在体外实验中IQ-L-OBzl组的食管癌(Eca-109、EC-9706)IC50分别为(405.06±23.49)nmol/L、(485.79±48.47)nmol/L;体内实验中最高抑瘤率为(42.42±7.47)%,化合物的抑瘤率及瘤重有明显的浓度相关性;IQ-L-OBzl组细胞内ROS水平为(98.68±13.19)平均荧光强度(MFI),高于对照组(P<0.05)。结论:IQL-OBzl的体内、外抗食道癌作用与细胞内ROS有关,且对白细胞无明显毒副作用。

槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷对阿霉素致体外心肌细胞损伤的保护作用

目的观察槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷对阿霉素(ADR)致心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法实验选用出生24 h内的Wistar大鼠6只,雌雄不限,分离心肌细胞。采用纯化培养的心肌细胞建立ADR损伤模型,实验分为6组:空白对照组(正常细胞培养,加入等数量的MEM培养基,不加入任何药物)、二甲基亚砜(DMSO)对照组(加入含DMSO浓度为5μg/ml的MEM培养液)、ADR损伤组(加AOR浓度为1μg/ml的MEM培养液)、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷保护组(分别为低剂量12.5μg/ml、中剂量25μg/ml、高剂量50μg/ml槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷保护组)。分组给药后孵育24 h。显微镜下观察心肌细胞形态,MTT法测定心肌细胞存活率,应用试剂盒分别检测样品中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果与ADR损伤组比较,低、中、高剂量保护组均可使心肌细胞存活率增高(P<0.01),LOH活性降低(P<0.01或P<0.05),NO活性降低(P<0.01),SOD活性增强(P<0.01)。结论 12.5~50μg/ml槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷均能减轻ADR对心肌细胞损伤,具有明显的心肌细胞保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。

N-Boc-3-碘锌-L-丙氨酸甲酯的合成研究

以天然存在的手性氨基酸 L-丝氨酸为原料 ,经酯化、氨基保护后再把 3-位上的羟基对甲苯磺酰化 ,然后碘代生成 3-碘代丙氨酸衍生物 ,再与活化锌粉在超声波作用下生成 N- Boc- 3-碘锌 - L-丙氨酸甲酯 ,这种产物是合成氟代酪氨酸的中间体。利用 1 H- NMR,IR和 MS对 N- Boc- 3-碘锌 -

3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸对成骨细胞前体增殖和成骨分化的作用

目的观察不同浓度的3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸(3,3',5-triiodo-L-thyronine,T3)对小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1 subclone 14)细胞增殖及分化水平的作用.方法分别给予不同浓度T3干预细胞,培养1、2、3 d后采用CCK8法检测细胞增殖水平;在成骨分化诱导试剂干预7 d基础上,结合上述T3给药,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测各浓度组成骨细胞分化水平,通过实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹(Western blot)法检测各浓度组的成骨细胞标记性基因及蛋白的表达差异.结果在分别干预1、2、3 d后,T3随着浓度增高,对细胞的增殖水平均呈明显上调;而且相同剂量的T3对于细胞增殖呈时间依赖性增强.此外,MC3T3-E1 Subclone 14细胞诱导7 d后,对比于0对照组,低浓度T3(1 nmol/L)对成骨细胞各分化参数均无明显作用,而10、100、1000 nmol/L的T3对细胞ALP染色,成骨细胞相关基因及蛋白均明显上调,其中以10和100 nmol/L组最为显著.结论T3对于MC3T3-E1 Subclone 14细胞的增殖和成骨细胞分化均有显著的促进作用.

1-丁基-3-甲基咪唑-L-樟脑磺酸盐催化合成monastrol

目的探索环境友好、操作简便的monastrol合成方法。方法以间羟基苯甲醛、乙酰乙酸乙酯和硫脲为起始原料,在无溶剂微波加热条件下,用绿色室温离子液体1-丁基-3-甲基咪唑-L-樟脑磺酸盐催化Biginelli反应合成monastrol。结果 1-丁基-3-甲基咪唑-L-樟脑磺酸盐在无溶剂微波加热条件下可催化Biginelli反应合成monastrol,操作简单、耗时缩短、环境友好。结论以新型绿色室温离子液体1-丁基-3-甲基咪唑-L-樟脑磺酸盐为催化剂,经微波促进无溶剂Biginelli反应合成monastrol是一种操作简便、反应温和的绿色合成方法。

HPLC-ELSD法测定赤雹不同药用部位中山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷的含量

目的:建立赤雹不同药用部位(根、茎、果实)中山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷含量的PLC-ELSD测定方法。方法:采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器检测。色谱柱:Alltima C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(19∶81);柱温:30℃,流速:0.8 ml·min^(-1)。ELSD条件:漂移管温度:105℃;载气流速:2.8 L·min^(-1)。结果:山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷在51.15~920.70μg·ml^(-1)浓度范围内线性关系良好(r=0.999 8);平均回收率根、茎、果实分别为100.1%,100.5%,101.1%,RSD分别为1.82%,1.79%,1.54%(n=6)。结论:该方法简便、准确,可用于赤雹药材的质量控制。

RP-HPLC法测定香椿叶中槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷

目的 建立测定中药香椿叶中槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷的反相高效液相色谱法.方法 采用Waters XBridge Shield RP18色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液（20∶80）,体积流量为1.0mL/min,检测波长为254 nm,柱温为40℃.结果 在以上色谱条件下,供试品溶液中的槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷与干扰成分完全分离,其在5.260～105.2 mg/mL范围内线性关系良好（r2 =0.999 1）,重复性实验RSD=1.96％（n=6）,平均加样回收率为99.3％～104.1％ （n=3）,RSD为4.23％ ～4.78％.结论 6个产地香椿叶中槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷的量分别为0.826％±0.025％（山西运城）、0.271％ ±0.006％（河南西平）、0.459％ ±0.016％（河南焦作）、0.222％±0.006％（四川简阳）、0.808％ ±0.019％（山东西牟）和0.293％±0.008％（江苏镇江）.

螺[1-溴-4-(1R,2S,5R)-l-孟氧基-5-氧杂-6-氧代双环[3.1.0]己烷-2,2'-(3'-α-膦酸二乙酯基-(S)-苯甲氧基-4'-l-(1R,2S,5R)-孟氧基丁内酯)]的晶体结构

报道了标题化合物合成和晶体结构。X-射线结构分析表明,该化合物的分子式为C39H58BrO10P,Mr = 797.74,晶体属于单斜晶系,空间群为P21,晶胞参数a = 12.858(3), b = 25.130(5), c = 14.125(3) ? = 105.15(3), V = 4405(2) ?, Z = 4, Dc = 1.203 g/cm3, ?= 1.019 mm-1, F(000) = 1688,R = 0.0726, wR = 0.1201,共收集到9691个独立衍射点,其中可观测点5638个(I≥2s(I))。每个分子中有6个环,13个手性中心,2个五员环呈信封式构象,并分别与三员环组合成[2.4]螺环和[3.1.0]桥环化合物,4个新生成的手性中心的绝对构型为C(6)(S), C(7)(S), C(3)(R), C(2)(R),新引入的磷酸酯官能团C(9)为S构型。

血清高尔基蛋白73、甲胎蛋白异质体3、甲胎蛋白和α-L-岩藻糖苷酶水平诊断原发性肝癌的效能分析

目的探讨应用血清高尔基蛋白体73(GP73)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)、AFP和α-L-岩藻糖苷酶(AFU)水平诊断原发性肝癌(PLC)患者的效能。方法 2015年1月～2017年3月我院诊治的PLC患者261例,乙型肝炎肝硬化患者201例,慢性乙型肝炎患者238例和体检健康人200例,采用酶联免疫吸附试验法检测血清GP73水平,采用亲和吸附离心管法检测血清AFP-L3,采用全自动化学发光仪检测血清AFP,采用商用试剂盒检测血清AFU水平。绘制血清GP73、AFP-L3、AFP和AFU诊断PLC的ROC曲线,确定截断点(cut-off-value),计算ROC曲线下面积(AUC),判断它们的诊断效能。结果肝癌组血清GP73水平显著低于慢性肝炎组和肝硬化组,差异有统计学意义(P<0.05),血清AFP-L3显著高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05),血清AFU水平显著高于健康人和肝硬化组,但低于慢性肝炎组,差异有统计学意义(P<0.05);以非肝癌人群为对照,血清GP73、AFP-L3、AFP和AFU诊断肝癌的ROC曲线下面积分别为0.564 (95%CI:0.485～0.636)、0.724 (95%CI:0.555～0.786)、0.745(95%CI:0.654～0.806)和0.571(95%CI:0.385～0.536),血清AFP-L3联合AFP诊断肝癌的截断点分别为8.25%和49.25 ng/ml,其灵敏度(Se)为55.5%,特异度(Sp)为85.0%,正确性(Ac)为80.1%,显著高于血清AFP-L3诊断的55.5%、85.0%和76.4%或AFP诊断的57.1%、82.7%和75.2%(P<0.05);在261例肝癌患者中,血清AFP<9.6 ng/ml者71例(27.2%),其中PG73>106.5 ng/ml者30例(42.3%),提示GP73对AFP阴性肝癌有一定的诊断价值;在201例肝硬化患者中,血清AFP<9.6 ng/ml者98例(48.8%),其中PG73>106.5 ng/ml者52例(53.1%),提示血清GP73水平容易受到肝硬化的影响。结论应用血清AFP联合AFP-L3检测能够提高诊断肝癌的效能,但它们的灵敏度都还不够高,影响因素较多。临床医生需结合病史、影像学检查和动态血清学检测才能做出更为科学的结论。

肿瘤PET分子探针3-O-(2-^(18)F-氟乙基)-L-多巴的合成及初步生物学评价

正电子类氨基酸显像剂是^(18)F-氟代脱氧葡萄糖(^(18)F-Fluorodeoxyglucose,^(18)F-FDG)在临床肿瘤PET显像应用中的重要补充。针对6-^(18)F-氟-L-多巴(^(18)F-FDOPA)前体制备及标记过程的复杂性,本研究设计合成了一种新型^(18)F标记的氨基酸类肿瘤PET显像剂3-O-(2-^(18)F-氟乙基)-L-多巴(3-O-(2-^(18)Ffluoroethyl-L-DOPA,^(18)F-FEDOPA),并对其内生物分布及肿瘤PET显像进行了评价。以L-多巴(LDOPA)为原料经多步反应合成标记前体化合物N-叔丁氧羰基-(3-O-甲苯磺酸酯乙基-4-O-叔丁氧羰基)-L-多巴甲酯,通过^(18)F亲核取代反应实现放射性标记,经半制备高效液相色谱纯化、盐酸水解、NaOH中和后得到^(18)F-FEDOPA注射液。放化合成时间为90min,放化产率(33±6)%(n=10,衰减校正),放射性比活度为55GBq/μmol,放化纯度>99%,4h后测定放化纯度>95%,稳定性良好。小鼠体内生物分布表明,^(18)F-FEDOPA主要经肾脏代谢,心脏和脑组织摄取值较低,骨骼摄取随时间无明显变化。microPET/CT显像显示,^(18)F-FEDOPA在H22和S180肿瘤组织有明显摄取;与^(18)F-FDG相比,^(18)FFEDOPA在注射60min时肿瘤与心(或脑)的比值高。因此,^(18)F-FEDOPA有望成为一种新型氨基酸代谢类肿瘤PET显像剂。

凉味剂3-L-薄荷氧基丙烷-1,2-二醇的合成研究

采用一种新方法,通过开环、水解两步反应合成了3-L-薄荷氧基丙烷-1,2-二醇凉味剂。首先用乙酸环氧丙醇酯与薄荷脑在路易斯酸催化作用下进行开环反应得到1-乙酰氧基-3-L-薄荷氧基丙烷-2-醇。开环的最佳条件为：三氟化硼乙醚为催化剂,反应温度0～10°C,反应时间4 h,薄荷脑与乙酸环氧丙醇酯摩尔比1.2∶1.0,催化剂与乙酸环氧丙醇酯摩尔比0.04∶1.0,收率70.5%。1-乙酰氧基-3-L-薄荷氧基丙烷-2-醇经NaOH水解得产物,在此反应中加入甲苯为溶剂,使反应易操作,收率为95.5%。并通过MS和1H NMR确定中间体和产物的结构。

C4'-CF3-α-L-脱氧胸苷亚磷酰胺单体的合成

化学修饰是改善反义核酸成药性的重要手段。在本文的研究中,采用化学合成的方法,以已知的化合物(S)-1,3-二(苄氧基)-4-(1,3-二噻烷-2-基)丁-2-酮为原料,经过4步反应,得到苄基保护的C4'-CF3-β-L-脱氧胸苷5a和C4'-CF3-α-L-脱氧胸苷5b。然后通过氯化钯催化氢化脱除5b的苄基保护基,制得C4'-CF3-α-L-脱氧胸苷6。通过核磁共振1H谱、13C谱、19F谱和二维NOESY谱,确认了5a,5b和6的结构以及C4'和C1'的构型。经过两步常规反应,将6转化为C4'-CF3-α-L-脱氧胸苷亚磷酰胺8,并使用1H谱,31P谱,ESI-MS高分辨率质谱确定了最终目标产物8的结构正确性。

HPLC同时测定鸭跖草提取物中咖啡酸、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和异荭草素的含量

采用高效液相色谱法同时测定鸭跖草提取物中咖啡酸、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和异荭草素的含量。色谱条件为:色谱柱为Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,以甲醇(A)-体积分数0.1%甲酸水(B)梯度洗脱:0~17 min,22%A^42%A;17~28 min,42%A^56%A;28~40 min,56%A^90%A,检测波长为350 nm,流速为1 m L/min,柱温为35℃。咖啡酸、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷和异荭草素分别在2.16~86.4 mg/L、6.445~257.8 mg/L和3.293~131.7 mg/L范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.36%,99.42%和98.00%。该方法准确、可靠、重复性好,可用于鸭跖草提取物的质量评价与控制。

3-氯-L-丙氨酸盐酸盐的合成研究

通过对反应过程的优化,探索3-氯-L-丙氨酸盐酸盐的最佳合成工艺并对中间产物以及最终产物进行质谱表征。实验得最佳工艺为:5.00 g的L-丝氨酸和4.15 ml二氯亚砜,低温反应1 h后升温至40℃继续反应4.5 h,产率约83.9%;5.00 g的L-丝氨酸甲酯盐酸盐和7.36 g五氯化磷,冰水浴下反应2 h后升温至30℃继续反应2 h,产率约95.3%;5.00 g的3-氯-L-丙氨酸甲酯盐酸盐在50 mL的6 mol/L的盐酸中先回流反应1 h后再蒸馏反应0.8 h,产率约75.4%。总产率约60.3%。

N-[(S)-1-(乙氧羰基)-3-苯丙基]-L-丙氨酸的合成

以苯乙酮和乙醛酸为原料制得3-苯甲酰基丙烯酸乙酯,与L-丙氨酸苄酯对甲苯磺酸盐经迈克尔加成、还原、拆分制得标题化合物,总收率约20%,纯度达99.8%。该方法简单可行,工艺可靠。

丙氨酰谷氨酰胺通过JAK2/STAT3通路减轻失血性休克小鼠急性肺损伤的作用机制

目的研究N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(NLAG)通过Janus激酶2(JAK2)/信号传导与活化转录因子3(STAT3)通路减轻失血性休克小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制。方法选择野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、模型组、NLAG+模型组、Ad-NC组、Ad-NC+模型组、Ad-NC+NLAG+模型组和Ad-JAK2+NLAG+模型组,每组8只。采用心脏穿刺、抽取30%总血量的方法建立失血性休克致ALI模型,造模前30 min给予生理盐水或NLAG腹腔注射干预,造模前2周给予相应的腺病毒Ad-NC或Ad-JAK2尾静脉注射。造模后24 h计算肺指数=肺湿重/体质量,肺组织进行HE染色并计算肺损伤评分,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性和p-JAK2、p-STAT3表达水平。结果模型组肺指数,肺损伤评分,肺组织TNF-α、IL-6、MDA含量及p-JAK2、p-STAT3表达高于对照组,SOD活性低于对照组(P<0.05);NLAG+模型组肺指数,肺损伤评分,肺组织TNF-α、IL-6、MDA含量及p-JAK2、p-STAT3表达低于模型组,SOD活性高于模型组(P<0.05);尾静脉注射腺病毒后,Ad-JAK2+NLAG+模型组肺指数,肺损伤评分,肺组织TNF-α、IL-6、MDA含量及p-JAK2、p-STAT3表达高于Ad-NC+NLAG+模型组,SOD活性低于Ad-NC+NLAG+模型组(P<0.05)。结论NLAG明显减轻失血性休克小鼠的ALI,该作用与抑制JAK2/STAT3通路介导的炎症反应和氧化应激有关。