洪连对ANIT所致肝损伤小鼠的保护作用

目的:研究洪连对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)所致黄疸型肝损伤小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法:采用灌胃ANIT(100 mg·kg-1)花生油溶液造成小鼠急性肝损伤模型,连续给药7 d,末次给药1 h后取血、肝脏,检测血清中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT),天门冬氨酸转氨酶(AST),总胆汁酸(TBA),总胆红素(TBIL)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,PCR检测肝组织中TNF-αmRNA的表达量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化。结果:与模型组比较,洪连(1.0,2.0,4.0 g·kg-1)可显著降低肝损伤小鼠血清ALT,AST,TBIL和TNF-α的水平和肝匀浆中MDA含量,同时显著升高小鼠肝匀浆中GSH-Px的含量,洪连(2.0,4.0 g·kg-1)可显著降低肝损伤小鼠血清TBA的水平和显著升高肝匀浆中SOD含量(P<0.01),洪连(1.0 g·kg-1)组TBA,SOD含量与模型组比较无统计学差异。洪连提取物各剂量组均可显著降低肝组织中TNF-αmRNA相对表达量(P<0.01)。病理切片显示洪连(2.0,4.0 g·kg-1)组能显著改善肝组织的病理变化。结论:洪连对ANIT所致小鼠黄疸型肝损伤有保护作用。

白花蛇舌草对ANIT诱导的胆汁淤积大鼠保肝作用研究

目的研究白花蛇舌草对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积肝病大鼠的保肝作用及机制。方法将48只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,白花蛇舌草高、中、低剂量组(1、0.5、0.25 g·kg^(-1)),熊去氧胆酸组(100 mg·kg^(-1)),每组8只,均连续灌胃给予相应药物5 d。其中第3天除正常对照组外,其他各组采用灌胃给予ANIT(65 mg·kg^(-1))制备ANIT诱导胆汁淤积肝病大鼠模型。检测各组大鼠血清肝功指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP),血清黄疸指数总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)及肝脏抗氧化应激因子谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;测定各组大鼠胆汁流量以及胆汁中TBIL和TBA的含量;采用HE染色检测肝脏病理变化;Real-time PCR法检测肝脏组织中胆汁酸合成、转运、排泄和重吸收等相关基因的表达水平。结果与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠血清的ALT、AST、ALP、TBA、TBIL水平显著增加,而胆汁流量和胆汁中TBA和TBIL的排泄则显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.01);胆汁酸合成与转运的主要核受体(FXR、SHP)、胆汁酸顶腔侧膜转运体(BSEP、MRP2、MDR2)、胆汁酸合成酶(CYP7A1、CYP8B1、CYP27A1)和胆汁酸重吸收转运体(NTCP、OATP1A1、OATP1A2)的mRNA表达水平显著降低,而胆汁酸基底侧膜转运体(MRP3、MRP4、OSTα、OSTβ)的mRNA表达水平则显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,白花蛇舌草组大鼠血清的ALT、AST、ALP、TBA、TBIL水平显著降低(P<0.01),而大鼠胆汁流量和胆汁中TBA和TBIL的排泄量则显著升高(P<0.01);肝脏组织病理损伤显著改善;胆汁酸核受体(FXR、SHP)、胆汁酸顶腔侧膜转运体(BSEP、MRP2、MDR2)和胆汁酸基底侧膜转运体(MRP3、MRP4、OSTα、OSTβ)的mRNA表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),而胆汁酸合成酶(CYP7A1)和胆汁酸重吸收转运体(NTCP、OATP1A1)的mRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论白花蛇舌草具有改善胆汁淤积肝损伤作用,其机制可能通过激活FXR-SHP轴的表达,从而促进胆汁酸外排,减少胆汁酸合成与重吸收作用有关。

桂枝通过调控FXR通路改善ANIT诱导的肝内胆汁淤积大鼠模型的机制研究

研究桂枝通过调控法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)通路改善α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导大鼠肝内胆汁淤积的作用及机制。将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组(60 mg·kg-1)、桂枝60 mg·kg-1治疗组、桂枝20 mg·kg-1治疗组5组,每组8只。除正常组和模型组外,其余各组按对应浓度连续水溶液0. 005 m L·g-1体质量灌胃,每天1次,灌胃7 d;除正常对照组外,其余各组于灌胃第5天予100 mg·kg-1ANIT灌胃造模,每天1次,灌胃3 d。末次给药24 h后腹主动脉取血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBi L)、总胆汁酸(TBA)水平;取大鼠肝脏组织1. 5~2 cm,经10%甲醛固定,进行石蜡包埋切片,并行HE染色,免疫组化(IHC)分析FXR的表达;取大鼠肝脏组织提取RNA及蛋白,检测FXR mRNA表达及FXR下游分别与胆汁酸合成、解毒、转运相关的SHP,UGT2B4,BSEP蛋白的表达情况。结果表明,与正常组比较,模型组血清ALT,AST,TBi L,TBA的水平升高(P<0. 01),肝脏损伤严重,FXR蛋白和mRNA表达降低,SHP,UGT2B4,BSEP蛋白表达均降低(P<0. 05,P<0. 01);与模型组比较,药物组能在不同程度上降低血清ALT,AST,TBi L,TBA水平(P<0. 05,P<0. 01),改善肝脏组织损伤,增加FXR蛋白灰度值,促进FXR mRNA和FXR,SHP,BSEP和UGT2B4蛋白的表达(P <0. 05,P <0. 01)。桂枝可以缓解ANIT诱导的肝内胆汁淤积,减轻肝细胞损伤,降低血清ALT,AST,TBi L,TBA水平。其机制可能是通过FXR-SHP,FXR-UGT2B4,FXR-BSEP信号通路来进行干预。故而,在肝内胆汁淤积的发病过程中,可以尝试在桂枝改善肝内胆汁淤积方面做更进一步的探索和尝试,为临床治疗肝内胆汁淤积提供有效药物。

灵芝多糖对α-萘异硫氰酸酯致大鼠肝损伤的保护作用

目的:观察灵芝多糖(GLP)对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致大鼠急性黄疸模型的退黄降酶作用。方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、ANIT肝损伤模型组、GLP高(400 mg.kg-1)、中(200 mg.kg-1)、低(100 mg.kg-1)剂量组和阳性药组(茵栀黄颗粒)。各治疗组连续灌胃给药7 d后,ANIT诱发黄疸模型,48 h后摘眼球取血,分离血清,以血清肝功能指标、SOD的活力和MDA含量以及肝脏组织病理学的改变为观察指标。结果:与模型组比较,GLP高、中剂量组可不同程度的的降低ALT、AST、TBIL、ALP、γ-GT活性和MDA含量,升高SOD活性(P<0.01或P<0.05)。肝脏病理组织学检查表明,GLP能明显减轻肝细胞变性、坏死和肝小胆管增生。GLP高、中、低剂量组之间存在量效关系。结论:GLP具有降低实验性胆汁淤积大鼠血清胆红素、转氨酶和改善肝脏组织损伤的作用,其作用机制可能与抗氧化作用有关。

基于FXR信号通路研究藏族药二十五味松石丸对胆汁淤积型肝损伤大鼠的保护作用机制

基于法尼醇X受体(FXR)信号通路探讨藏族药(以下简称"藏药")二十五味松石丸对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)致大鼠胆汁淤积型肝损伤的保护作用及机制。将SD大鼠随机分为空白组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组以及藏药二十五味松石丸低、中、高剂量组(0.09,0.18,0.36 g·kg^-1),实验采用预防性给药方案。第1~4天UDCA组和藏药二十五味松石丸混悬液各组分别预防性灌胃给药;第5天空白组给予等体积橄榄油空白试剂,其余各组给予ANIT造模试剂,各给药组第5~6天继续给药2 d;第7天造模后48 h,大鼠股动脉取血。检测血清中碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、直接胆红素(DBIL)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)水平,观察肝脏组织病理学变化。通过实时荧光定量法检测肝组织中相关基因FXR,SHP,CYP7A1,MRP2,MRP3,NTCP,BSEP mRNA相对表达量的变化,采用Western blot法检测肝组织中FXR,SHP,UGT2B4蛋白表达量的变化。结果显示,藏药二十五味松石丸能显著降低ANIT模型大鼠血清中ALT,ALP,DBIL,TBIL,TBA的含量水平(P<0.01,P<0.05);SHP和NTCP mRNA表达显著上调(P<0.01,P<0.05),CYP7A1和MRP3 mRNA表达显著下调(P<0.01,P<0.05);FXR,SHP的蛋白表达均显著上调(P<0.01,P<0.05)。藏药二十五味松石丸对ANIT致大鼠胆汁淤积型肝损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与FXR信号通路介导的胆汁酸代谢相关。