PDGFRβ与β2-syntrophin蛋白相互作用的初步研究

目的探索并鉴定β型血小板源性生长因子受体(platelet-derived growth facter recepterβ,PDGFRβ)与PDZ蛋白β2-syntrophin新的结合作用以及该相互作用的分子基础,为进一步研究PDGFRβ相关信号转导通路的调节提供线索。方法制备GST-PDGFRβ羧基端的融合蛋白,通过GST pull-down技术,检测PDGFRβ-CT与β2-syntrophin的PDZ结构域及完整的β2-syntrophin蛋白的相互作用。结果成功构建了重组质粒pGEX-PDGFRβ-CT。在大肠埃希菌中成功表达融合蛋白后,通过体外蛋白质结合实验证实了PDGFRβ-CT与β2-syntrophin的PDZ结构域和兔脑组织中内源性的β2-syntrophin蛋白可以相互作用。结论PDGFRβ-CT与β2-syntrophin之间存在相互作用,该相互作用是由PDGFRβ的羧基末端与β2-syntrophin的PDZ结构域结合而实现的,此结果为研究PDGFRβ介导的下游信号转导通路以及细胞特定调控受体功能的机制奠定了基础。

AD模型小鼠脑组织AQP4、SNTA1表达水平的变化及DADS的干预研究

目的探讨二烯丙基二硫化物(DADS)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的干预作用,为AD的防治提供理论依据。方法将20只5月龄APPswe/PS1d E9双转基因鼠按窝别和体质量分为AD模型组和AD干预组,同时将野生型小鼠分为野生对照组和野生干预组,每组10只。干预组小鼠每日1次灌胃给予50 mg/kg DADS,AD模型组小鼠和野生对照组小鼠每日1次灌胃等量溶媒,连续处理6月。采用水迷宫和旷场实验测定小鼠神经行为学变化。免疫组化法分析大脑皮质β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积情况,q RT-PCR和Western blot法分别检测大脑皮质水通道蛋白4(AQP4)、α-互养蛋白(SNTA1)m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组相比,AD模型组小鼠水迷宫实验中定位航行逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少,在旷场实验中中央停留时间延长、穿格次数和直立次数减少,大脑皮质Aβ沉积数量增多,AQP4m RNA及蛋白表达升高,SNTA1m RNA及蛋白的表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与AD模型组相比,DADS干预组小鼠的定位航行逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增多,中央停留时间缩短、穿格次数和直立次数增多,大脑皮质Aβ沉积数量减少,AQP4及SNTA1 m RNA及蛋白的表达水平上调,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 AD模型小鼠大脑皮质AQP4表达升高,但SNTA1表达的降低可改变AQP4极性分布而影响AQP4的功能。DADS可明显减少AD模型小鼠大脑皮质Aβ沉积,改善认知能力,其作用机制可能与DADS调节AQP4表达及其极性分布有关。