溶酶体和泛素蛋白酶体功能障碍协同加剧PC12细胞内α-synuclein异常聚集

目的探讨溶酶体和蛋白酶体功能障碍在帕金森病发病中的作用机制。方法分别及联合应用溶酶体抑制剂E64、蛋白酶体抑制剂lactacystin处理神经元样分化的PC12细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性及代谢状态,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光双标方法观察PC12细胞内硫黄素S、α-synuclei蛋白阳性聚集包涵体的形成,及应用Hoechst33258观察α-synuclei蛋白、硫黄素S双标阳性细胞的凋亡。结果应用上述抑制剂后细胞活性下降(呈浓度依赖性)而细胞凋亡率上升;经药物处理后PC12细胞出现α-synuclei蛋白聚集和包涵体形成,E64组为(7.94±0.97)%,lactacystin组为(20.33±2.40)%,合用组为(36.77±3.50)%,与对照组比较及各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);α-synuclei蛋白阳性包涵体细胞存在明显凋亡改变(17.29%±1.54%)。结论溶酶体和蛋白酶体功能障碍有可能通过诱导多巴胺神经元细胞内α-synuclei蛋白异常聚集在PD发病机制中发挥重要作用。