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小鼠α1,2岩藻糖基转移酶基因的克隆及表达 被引量:1
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作者 林蓓 齐藤真木子 岩森正男 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2005年第6期536-544,共9页
本文报告小鼠GDP岩藻糖:β半乳糖苷α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-fucosyltansferase,α1,2- FT)基因的克隆,并进行功能鉴定。利用RT-PCR方法克隆小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因编码区 MFUT-Ⅱ,测序后将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位... 本文报告小鼠GDP岩藻糖:β半乳糖苷α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-fucosyltansferase,α1,2- FT)基因的克隆,并进行功能鉴定。利用RT-PCR方法克隆小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因编码区 MFUT-Ⅱ,测序后将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ; 采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过对底物特异性比较研究酶的性质;应用 Northern印迹杂交法研究基因在小鼠组织中的表达情况;应用southern印迹杂交法分析基因存在状态。结果证实MFUT-Ⅱ为小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因家族的新成员,含有一个完整的开放读码框,可编码347个氨基酸.其估计分子质量为39 kDa,和小鼠H及Secl基因具有序列同源性,分别与人类Se基因(79.0%)、大鼠Rat FTB(89%)基因、兔Rabbit FT-Ⅲ基因(77%)具有较高的序列同源性。用MFUT-Ⅱ基因转染的COS-7细胞具有α1,2-FT活性,MFUT-Ⅱ可在多种组织中产生 3.5kb大小的mRNA转录产物。基因Southern印迹杂交分析结果显示:基因MFUT-Ⅱ仅为一个拷贝。这些结果证明MFUT-Ⅱ为小鼠的Se基因。 展开更多
关键词 α1 2-岩藻糖基转移酶 基因 克隆 表达 小鼠
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Differentially expressed genes in hepatocellular carcinoma induced by woodchuck hepatitis B virus in mice 被引量:11
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作者 Mark Feitelson 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第4期575-578,共4页
INTRODUCTIONHepatocellular carcinoma(HCC)is one of the major causes of death in the word.The mechanism of carcinogenesis is unknown,although it is widely accepted that HBV and HCV are clsely related to liver cancer[1-... INTRODUCTIONHepatocellular carcinoma(HCC)is one of the major causes of death in the word.The mechanism of carcinogenesis is unknown,although it is widely accepted that HBV and HCV are clsely related to liver cancer[1-5[1-5].Previously,a variety of studies have described the differences in gene expression which distinguished tumor from nontumor[6-11].Cloning of the genes,especially the genes associated with HBV and HCV,is still very important to account for the development of liver cancer. 展开更多
关键词 Animals Carcinoma Hepatocellular Cloning Molecular DNA Complementary Databases Nucleic Acid gene expression Regulation Neoplastic gene expression Regulation Viral Hepatitis B Hepatitis B Virus Woodchuck Humans mice Polymerase Chain Reaction Research Support Non-U.S. Gov't
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Expression of vascular endothelial growth factor and its role in oncogenesis of human gastric carcinoma 被引量:37
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作者 Du-Hu Liu Xue-Yong Zhang Dai-Ming Fan Yu-Xin Huang Jin-Shan Zhang Wei-Quan Huang Yuan-Qiang Zhang Qing-Sheng Huang Wen-Yu Ma Yu-Bo Chai Ming Jin Institute of Digestive Disease,Xijing Hospital,~2 Department of Gastroenterology,Tangdu Hospital,~3Department of Histology and Embryology,~4 Department of Microbiology,~5 Department of Biochemistry,Fourth Military Medical University,Xi’an 710033,Shaanxi Province,China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第4期500-505,共6页
AIM: To establish the role of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the oncogenesis of human gastric carcinoma more directly. METHODS: The expression of VEGF and its receptor kinase-domain insert containing rec... AIM: To establish the role of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the oncogenesis of human gastric carcinoma more directly. METHODS: The expression of VEGF and its receptor kinase-domain insert containing receptor (KDR) in human gastric cancer tissue were observed by immunohistochemical staining. VEGF levels were manipulated in human gastric cancer cell using eukaryotic expression constructs designed to express the complete VEGF(165) complimentary DNA in either the sense or antisense orientation. The biological changes of the cells were observed in which VEGF was up-regulated or down-regulated. RESULTS: VEGF-positive rate was 50%, and VEGF was mainly localized in the cytoplasm and membrane of the tumor cells, while KDR was mainly located in the membrane of vascular endothelial cells in gastric cancer tissues and peri-cancerous tissue. In 2 cases of 50 specimens, the gastric cancer cells expressed KDR, localized in both the cytoplasm and membrane. Introduction of VEGF(165) antisense into human gastric cancer cells (SGC-7901, immunofluorescence intensity, 31.6%)) resulted in a significant reduction in VEGF-specific messenger RNA and total and cell surface VEGF protein (immunofluorescence intensity, 8.9%) (P【0.05). Conversely, stable integration of VEGF(165) in the sense orientation resulted in an increase in cellular and cell surface VEGF (immunofluorescence intensity, 75.4%) (P【0.05). Lowered VEGF levels were associated with a marked decrease in the growth of nude mouse xenografted tumor (at 33 days postimplantation, tumor volume: 345.40 +/- 136.31 mm3)(P【0.05 vs control SGC-7901 group: 1534.40 +/- 362.88 mm3), whereas up-regulation of VEGF resulted in increased xenografted tumor size (at 33 days postimplantation, tumor volume: 2350.50 +/- 637.70 mm3) (P【0.05 vs control SGC-7901 group). CONCLUSION: This study provides direct evidence that VEGF plays an important role in the oncogenesis of human gastric cancer. 展开更多
关键词 gene expression Regulation Neoplastic Adult Aged Animals Cell Division Cloning Molecular DNA Antisense DNA Complementary Endothelial Growth Factors Endothelium Vascular Female Humans LYMPHOKINES Male mice mice Nude Middle Aged Neovascularization Pathologic Receptor Protein-Tyrosine Kinases Receptors Growth Factor Receptors Vascular Endothelial Growth Factor Stomach Neoplasms Transfection Tumor Cells Cultured Vascular Endothelial Growth Factor A Vascular Endothelial Growth Factors
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鼠白细胞介素-12双亚基共表达质粒的构建及在体内外的表达 被引量:3
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作者 陈玮 邵传森 +6 位作者 沈建根 鲍建芳 潘建平 韩伟 寿林 项哨 郑树 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2002年第1期15-18,共4页
目的 :构建双亚基共表达鼠白细胞介素 - 12 (m IL- 12 )真核表达质粒 ,并观察其在体内外的表达。方法 :将m IL - 12 p35和 p4 0全长编码 c DNA构建在 pc DN A 3.1载体上 ,然后把 p35表达单元 (CMV- p35 - BGH PA)插入pc DNA 3.1/ p4 0载... 目的 :构建双亚基共表达鼠白细胞介素 - 12 (m IL- 12 )真核表达质粒 ,并观察其在体内外的表达。方法 :将m IL - 12 p35和 p4 0全长编码 c DNA构建在 pc DN A 3.1载体上 ,然后把 p35表达单元 (CMV- p35 - BGH PA)插入pc DNA 3.1/ p4 0载体 ,使两个目的基因均受各自的启动子 CMV控制 ,构建成 m IL - 12双亚基共表达质粒 p Cm IL -12 ,并进行体内外表达。结果 :p Cm IL - 12在体外转染 COS- 7细胞后 ,经 EL ISA证实有 m IL- 12表达 ,其表达上清能在体外明显增强小鼠 NK细胞活性。小鼠皮内注射 p Cm IL - 12亦能增强小鼠 NK细胞活性。结论 :所构建的质粒在体内外均能表达有生物学活性的 m IL- 展开更多
关键词 白细胞介素-12 生物合成 质粒 基因表达 MIL-12 天然杀伤细胞 遗传载体 分子克隆 双亚基共表达 小鼠
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PS1基因真核表达载体的构建与鉴定
5
作者 宁丽峰 王慧萍 +2 位作者 李铁 桑建利 李佳慧 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第2期117-119,123,共4页
目的构建PS1基因真核表达载体,为PS1基因功能研究提供工具。方法从C57BL/6小鼠不同胚胎中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应扩增PS1基因编码区,将其克隆入pMD18-T载体中。通过聚合酶链反应,酶切和DNA测序鉴定。结果 PS1在9日龄小鼠胚胎... 目的构建PS1基因真核表达载体,为PS1基因功能研究提供工具。方法从C57BL/6小鼠不同胚胎中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应扩增PS1基因编码区,将其克隆入pMD18-T载体中。通过聚合酶链反应,酶切和DNA测序鉴定。结果 PS1在9日龄小鼠胚胎的cDNA中高表达。测序显示融合基因GFP-PS1和PS1-GFP中PS1为全长PS1编码序列。Western blot检测显示融合蛋白GFP-PS1与PS1-GFP的相对分子质量均为77 kD左右。结论成功地构建了PS1基因真核表达载体。 展开更多
关键词 早老素1基因 小鼠 胚胎 基因克隆 真核表达
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小鼠LIF编码基因的克隆与真核表达载体pcDNA3.1-LIF的构建
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作者 姜秋 艾永华 +2 位作者 聂代邦 孙宏晨 欧阳红生 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期782-785,F0002,共5页
目的:通过克隆小鼠LIF编码基因,构建pcDNA3.1-LIF真核表达载体,为下一步建立转基因动物模型奠定基础。方法:采用ICR雌性小鼠子宫组织,提取总RNA,运用RT-PCR技术,扩增出小鼠LIF基因全长编码序列,采用同源重组方法构建具有新霉素抗性的小... 目的:通过克隆小鼠LIF编码基因,构建pcDNA3.1-LIF真核表达载体,为下一步建立转基因动物模型奠定基础。方法:采用ICR雌性小鼠子宫组织,提取总RNA,运用RT-PCR技术,扩增出小鼠LIF基因全长编码序列,采用同源重组方法构建具有新霉素抗性的小鼠LIF真核表达载体pcDNA3.1-LIF。结果:通过PCR获得了约612bp大小的特异性cDNA片段。经核苷酸序列分析,扩增得到的片段与小鼠LIFcDNA序列同源性为100%。经PCR及酶切鉴定筛选阳性克隆菌,表明LIF编码序列正确连入pcDNA3.1载体中。结论:成功克隆了小鼠LIF编码基因,并构建了真核表达载体pcDNA3.1-LIF。 展开更多
关键词 白血病抑制因子 聚合酶链反应 基因克隆 真核表达载体 小鼠 近交ICR
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激活转录因子-2调控小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20分子机制的初步研究
7
作者 王文江 冯琦 +1 位作者 袁杰 高玉光 《蚌埠医学院学报》 CAS 2014年第11期1460-1463,共4页
目的:通过克隆激活转录因子-2(ATF-2)基因以及真核表达载体的构建,初步研究ATF-2对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20(MMP-20)基因表达的影响。方法:根据引物设计原则设计ATF-2基因逆转录-聚合酶链反应(PCR)引物,从小鼠成釉细胞中提取总RN... 目的:通过克隆激活转录因子-2(ATF-2)基因以及真核表达载体的构建,初步研究ATF-2对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20(MMP-20)基因表达的影响。方法:根据引物设计原则设计ATF-2基因逆转录-聚合酶链反应(PCR)引物,从小鼠成釉细胞中提取总RNA逆转录所得c DNA为模板,进行PCR法扩增。得出含有HindⅢ和xhol酶切位点的ATF-2目的基因连接到pc DNA 3.1/myc-His A真核表达载体上;用重组质粒转染小鼠MMP-20基因,观察其对MMP-20基因转录活性的影响。结果:经过PCR引物扩增得到1 463 bp基因片段,将获得的重组质粒pc DNA 3.1/myc-His A-ATF-2双酶切分析鉴定,测序结果与Gen Bank登录基因序列完全一致;双荧光素酶结果显示ATF-2可以促进MMP-20启动子的表达(P<0.01),且在-825^+23(848 bp)启动子区段促进作用最明显。结论:成功实现了ATF-2基因克隆及真核表达载体的构建,并发现ATF-2对MMP-20启动子区域活性表达起正向调节作用。 展开更多
关键词 激活转录因子-2 基因克隆 载体构建 小鼠
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野生型和突变型小鼠前体mRNA加工因子31基因克隆及真核表达载体的构建
8
作者 袁松涛 李宁东 +2 位作者 左爱军 梁东春 赵堪兴 《眼视光学杂志》 2006年第4期236-239,共4页
目的构建野生型和突变型小鼠前体mRNA加工因子31(pre-mRNA processing factor 31,PRPF31)基因的真核表达载体。方法通过逆转录聚合酶链反应(reverse tran-scriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增小鼠PRPF31野生型全长编码序... 目的构建野生型和突变型小鼠前体mRNA加工因子31(pre-mRNA processing factor 31,PRPF31)基因的真核表达载体。方法通过逆转录聚合酶链反应(reverse tran-scriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增小鼠PRPF31野生型全长编码序列、体外定点突变获得331del12突变型PRPF31的cDNA编码序列,将上述两序列分别克隆入pGEM-T Easy载体,经限制性内切酶NheⅠ和EcoRⅠ双酶切后,再克隆入pTracer-CMV真核表达载体,予DNA测序鉴定。结果PCR成功扩增出野生型和突变型PRPF31基因,DNA序列分析证实两种基因的真核表达载体构建成功。结论野生型和突变型PRPF31基因真核表达载体的构建,为研究PRPF31基因突变引起视网膜色素变性的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 前体mRNA加工因子31 基因克隆 真核表达载体 视网膜色素变性 小鼠 逆转录聚舍酶链反应/方法
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人神经营养素-3基因重组腺病毒载体的构建、表达和生物活性检测 被引量:4
9
作者 王俊梅 曾园山 +5 位作者 刘然义 吴立志 薛刚 黄文林 熊轶 王延华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期460-464,共5页
目的构建具有生物活性的人神经营养素_3(NT_3)基因重组腺病毒表达载体。方法从人脑组织mRNA中扩增NT_3基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的质粒。再与腺病毒骨架DNA(Adeno-X viral DNA)体外连接,形成重... 目的构建具有生物活性的人神经营养素_3(NT_3)基因重组腺病毒表达载体。方法从人脑组织mRNA中扩增NT_3基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的质粒。再与腺病毒骨架DNA(Adeno-X viral DNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd_NT_3)。用pAd_NT_3转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno_NT_3)。结果NT_3基因RT-PCR扩增产物约801 bp。Adeno_NT_3 PCR鉴定为正确重组子。RT_PCR、免疫细胞化学、ELISA及Western blot检测显示,Adeno_NT_3能在其转染的293细胞表达和分泌NT_3。这种NT_3能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞。结论应用体外连接法成功构建了人NT_3基因重组腺病毒表达载体,其表达产物具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞的活性作用。 展开更多
关键词 神经营养素-3 基因克隆 重组腺病毒 基因表达 神经干细胞 免疫细胞化学 小鼠
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小白鼠乳铁蛋白基因片段克隆及不同泌乳阶段乳铁蛋白基因表达的差异 被引量:2
10
作者 汪以真 韩菲菲 黄海青 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期83-88,共6页
从泌乳期小白鼠乳腺组织中提取总RNA,用反转录酶反转录为cDNA后,根据已报道的小白鼠乳铁蛋白(LF)cDNA设计一对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)进行扩增,获得一条897bp的片段,克隆于pGEM-TVector后进行序列分析表明,该片段为LF基因cDNA的... 从泌乳期小白鼠乳腺组织中提取总RNA,用反转录酶反转录为cDNA后,根据已报道的小白鼠乳铁蛋白(LF)cDNA设计一对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)进行扩增,获得一条897bp的片段,克隆于pGEM-TVector后进行序列分析表明,该片段为LF基因cDNA的部分序列,编码299个氨基酸组成的多肽,是成熟肽的主体部分.本研究得到的基因片段与已报道的小白鼠子宫LFcDNA部分序列的同源性达到99%.以LF基因片断的成功克隆为基础,本实验室构建了一优化的半定量RT-PCR法,以β-actin为内标,研究不同泌乳阶段小白鼠乳腺组织LF基因表达的差异.结果显示,不同泌乳阶段小白鼠LF基因表达有差异,在泌乳第1日,LF基因的表达量较高,从泌乳第1日到泌乳第10日和第18日,LF基因表达量呈下降趋势,到乳腺组织退化的干乳期(泌乳第25日),LF基因表达量又明显升高. 展开更多
关键词 小白鼠 乳铁蛋白基因 克隆 泌乳阶段 表达
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小鼠轮状病毒EW株VP7基因的克隆及其在重组腺病毒中的表达
11
作者 李勇 王健伟 +4 位作者 屈建国 于修平 王大燕 姜秀丽 洪涛 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2003年第6期595-599,606,共6页
目的:构建表达小鼠轮状病毒(EDIM)EW株VP7基因的重组腺病毒,以在小鼠模型上研究轮状病毒的免疫保护机制。方法:用RT-PCR方法扩增EDIMVP7全长cDNA并进行基因序列分析,将所得的VP7基因片段插入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,获得重组质粒pSh... 目的:构建表达小鼠轮状病毒(EDIM)EW株VP7基因的重组腺病毒,以在小鼠模型上研究轮状病毒的免疫保护机制。方法:用RT-PCR方法扩增EDIMVP7全长cDNA并进行基因序列分析,将所得的VP7基因片段插入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,获得重组质粒pShuttleCMV-EVP7,将该质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183获得重组腺病毒质粒pAdCMV-EVP7,将该质粒线性化后转染293细胞包装重组腺病毒rvAdEVP7。以rvAdEVP7感染293细胞,并分别应用电子显微镜、PCR、RT-PCR和Westernblot等方法观察rvAdEVP7的形态、VP7基因整合、遗传稳定性、VP7基因在细胞内转录及表达等有关生物学特性。结果:获得了小鼠轮状病毒的全长cDNA,重组腺病毒rvAdEVP7具有典型的腺病毒形态,PCR、RT-PCR和Westernblot等分子生物学方法分析显示:rvAdEVP7中确有特异性的VP7基因稳定整合;有较好的遗传稳定性;感染293细胞后能有效转录;可表达轮状病毒主要结构蛋白VP7。结论:成功构建含VP7基因的重组腺病毒rvAdEVP7,为进一步研究轮状病毒的免疫保护机制打下了基础。 展开更多
关键词 重组腺病毒 轮状病毒 VP7基因 基因表达 克隆 分子 小鼠
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小鼠睫状神经营养因子基因的克隆及真核表达载体的构建
12
作者 袁松涛 左爱军 +2 位作者 李宁东 梁东春 赵堪兴 《天津医药》 CAS 北大核心 2006年第7期476-478,共3页
目的:分别构建野生型和截短型小鼠睫状神经营养因子(CNTF)基因的真核表达载体。方法:通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增小鼠CNTF野生型全长编码序列,体外定点突变获取截短型CNTF的互补DNA(cDNA)编码序列,将上述两序列分别克隆至pGEM-T... 目的:分别构建野生型和截短型小鼠睫状神经营养因子(CNTF)基因的真核表达载体。方法:通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增小鼠CNTF野生型全长编码序列,体外定点突变获取截短型CNTF的互补DNA(cDNA)编码序列,将上述两序列分别克隆至pGEM-TEasy载体,经限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切后,将野生型和截短型CNTF基因连入pTracer-CMV真核表达载体,DNA测序鉴定。结果:PCR成功扩增了野生型和截短型CNTF基因,DNA序列分析证实两种真核表达载体中的CNTF序列与GeneBank中目的序列一致。结论:野生型和截短型CNTF基因真核表达载体的成功构建为视网膜色素变性(RP)的基因治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 睫状神经营养因子 基因克隆 真核表达载体 视网膜色素变性 小鼠
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ICR鼠皮肤Sonic Hedgehog(Shh)基因的克隆及表达
13
作者 朱晓芳 王琴 +4 位作者 成蓓 高慧 原志伟 朱国强 范卫新 《中国麻风皮肤病杂志》 2009年第9期665-667,共3页
目的:检测ICR胎鼠皮肤组织克隆Sonic Hedgehog(Shh)基因在胎鼠皮肤的表达。方法:分离12.5~16.5 d胎龄的胎鼠背部皮肤,用Trizol-酚-氯仿抽提法提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增胎鼠皮肤Shh全部编码基因,重组于pMD19-T载体进行克隆测序分析... 目的:检测ICR胎鼠皮肤组织克隆Sonic Hedgehog(Shh)基因在胎鼠皮肤的表达。方法:分离12.5~16.5 d胎龄的胎鼠背部皮肤,用Trizol-酚-氯仿抽提法提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增胎鼠皮肤Shh全部编码基因,重组于pMD19-T载体进行克隆测序分析。应用合成地高辛标记的反义Shh-mRNA探针,整体原位杂交技术检测Shh基因在ICR鼠皮肤上的表达。结果:从15.5 d胎鼠背部皮肤中成功扩增Shh基因,Blast分析与GeneBank公布的Shh基因编码区一致。同时15.5 d以后胎鼠背部皮肤检测到Shh基因的表达。结论:Shh基因可能参与了皮肤毛囊的形成。 展开更多
关键词 Sonic Hedgehog(Shh) 克隆 基因表达 ICR鼠
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成年小鼠Myomaker基因克隆及组织表达分析
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作者 张枫惠 路盟 +4 位作者 李玉红 朱自欣 秦健 李颖靓 杜荣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期3025-3032,共8页
为研究Myomaker基因在成年小鼠骨骼肌中的表达情况,试验从随机抽取的3只健康成年小鼠骨骼肌中提取总RNA,通过PCR方法扩增Myomaker基因的编码区序列(CDS),并对其进行生物信息学分析。此外,利用免疫组织化学和Western blotting法分析Myoma... 为研究Myomaker基因在成年小鼠骨骼肌中的表达情况,试验从随机抽取的3只健康成年小鼠骨骼肌中提取总RNA,通过PCR方法扩增Myomaker基因的编码区序列(CDS),并对其进行生物信息学分析。此外,利用免疫组织化学和Western blotting法分析Myomaker蛋白在小鼠骨骼肌组织中的定位与表达。结果显示,Myomaker基因CDS区全长666bp,编码221个氨基酸,同源性比对结果显示,小鼠与斑马鱼、鸡、猫、牛、犬、人、鹦鹉、猪Myomaker基因CDS区同源性分别为71.7%、80.7%、83.7%、83.2%、84.1%、86.4%、80.6%和84.0%,氨基酸同源性分别为75.9%、79.3%、85.5%、85.5%、88.3%、86.9%、81.4%和93.2%。Myomaker基因编码蛋白分子式为C_(1154)H_(1769)N_(275)O_(295)S_(18),分子质量为24ku,等电点为9.14,不稳定性指数为39.22,平均疏水性为0.501。免疫组织化学和Western blotting分析表明,小鼠Myomaker蛋白在健康成年小鼠骨骼肌中存在表达,且表达于部分肌细胞膜上。本试验结果可为Myomaker基因的深入研究奠定基础。 展开更多
关键词 Myomaker基因 健康成年小鼠 骨骼肌 克隆 表达
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三个新的小鼠Pax-8剪接体的克隆及时空表达
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作者 宋丽娟 倪云杰 +5 位作者 林振浩 侯良磊 吴漪皓 胡欢欢 黄晓燕 杨德业 《温州医学院学报》 CAS 2015年第4期240-242,247,共4页
目的:转录因子Pax-8在胚胎发育及肿瘤发生中具有重要作用,本研究旨在克隆及鉴定小鼠Pax-8基因亚型,并检测其时空表达。方法:从野生型C57BL/6胎鼠的心脏中提取总RNA(Trizol法),反转录成c DNA,应用Q5超保真酶进行目的基因扩增,并克隆至真... 目的:转录因子Pax-8在胚胎发育及肿瘤发生中具有重要作用,本研究旨在克隆及鉴定小鼠Pax-8基因亚型,并检测其时空表达。方法:从野生型C57BL/6胎鼠的心脏中提取总RNA(Trizol法),反转录成c DNA,应用Q5超保真酶进行目的基因扩增,并克隆至真核表达质粒,进行酶切鉴定及测序鉴定。结果:在小鼠发育不同时期,除已知全长Pax-8a外,发现3个新的小鼠Pax-8选择性剪接体,分别命名为Pax-8b(第4外显子缺失)、Pax-8c(第4和第11外显子缺失)、Pax-8d(第4和第9外显子缺失)。结论:小鼠心脏中Pax-8存在四种选择性剪接体,且在不同发育时期差异表达。 展开更多
关键词 Pax-8基因 剪接体 时空表达 克隆 小鼠
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稳定表达人MAGE-1基因的小鼠细胞系的建立与鉴定
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作者 何竞 张贺秋 +3 位作者 冯晓燕 宋晓国 王国华 凌世淦 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第5期436-438,443,共4页
目的:克隆人黑素瘤抗原-1(MAGE-1)基因,构建真核表达载体,建立稳定表达人MAGE-1的小鼠细胞株。方法:提取人肝癌细胞的总RNA,RT-PCR法获得人MAGE-1 cDNA,将测序正确的MAGE-1基因克隆至真核表达载体pcDNA3中,进行酶切鉴定和序列测定。将... 目的:克隆人黑素瘤抗原-1(MAGE-1)基因,构建真核表达载体,建立稳定表达人MAGE-1的小鼠细胞株。方法:提取人肝癌细胞的总RNA,RT-PCR法获得人MAGE-1 cDNA,将测序正确的MAGE-1基因克隆至真核表达载体pcDNA3中,进行酶切鉴定和序列测定。将重组质粒pcDNA/MAGE和空载体pcDNA3分别转染入小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中,经G418筛选获得稳定表达株,用RT-PCR和W estern印迹检测MAGE-1基因的转录及蛋白表达。结果:从肝癌细胞中成功克隆到人MAGE-1基因,经测序证明基因正确,酶切和序列测定表明,人MAGE-1基因的真核表达质粒已成功构建。将此重组质粒转入的SP2/0细胞可稳定表达人MAGE-1基因。结论:成功构建可稳定表达人MAGE-1基因的小鼠转基因细胞,为MAGE-1的免疫治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 黑素瘤 克隆 真核细胞 基因表达 小鼠 转基因
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一种新型(S)-羰基还原酶的克隆及其功能表达 被引量:5
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作者 耿亚维 张荣珍 +1 位作者 王珊珊 徐岩 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期60-66,共7页
【目的】从近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCC M203011)基因组中钓取新型(S)-羰基还原酶基因(scrⅡ),对其生物转化手性醇的功能进行了验证。【方法】采用PCR的方法,从C.parapsilosis基因组中扩增出一段可能的羰基还原酶基因sc... 【目的】从近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCC M203011)基因组中钓取新型(S)-羰基还原酶基因(scrⅡ),对其生物转化手性醇的功能进行了验证。【方法】采用PCR的方法,从C.parapsilosis基因组中扩增出一段可能的羰基还原酶基因scrⅡ。以构建的重组菌Escherichia coli BL21/pET28a-scrⅡ为生物催化剂,2-羟基苯乙酮为底物进行催化反应,经HPLC分析,计算终产物的光学纯度和产率,确定了转化反应的最适温度和pH值。【结果】scrⅡ基因全长为840bp,编码279个氨基酸,与已报道的(S)-羰基还原酶基因scr的一致性为85%。氨基酸序列分析表明SCRⅡ具有典型短链醇脱氢酶的功能域:辅酶结合区域Thr40-Gly41-(X)3-Gly45-X-Gly47和催化三联体结构Ser172-(X)n-Tyr187-(X)3-Lys191。在30℃,0.1mmol/LIPTG的诱导下,(S)-羰基还原酶(SCRⅡ)在E.coli中过量表达。以10%(w/v)的重组菌为催化剂,高浓度(6g/L)2-羟基苯乙酮为底物,在最适反应温度35℃和pH5.5的条件下,转化产物(S)-苯基乙二醇的光学纯度高达99.1%e.e.,产率为89.6%。与(S)-羰基还原酶SCR相比较,底物浓度提高了一倍,产物的光学纯度和产率分别提高了10%和28%。【结论】采用分子克隆技术分离出新型羰基还原酶SCRⅡ的编码基因,该酶的发现为手性醇的高效制备奠定了坚实的研究基础。 展开更多
关键词 短链羰基还原酶 基因克隆 表达 (S)-苯基乙二醇 生物转化
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小鼠Tim-3真核表达载体pTARGET-Tim-3的构建
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作者 孟静 刘晓立 +1 位作者 郭春 马春红 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第11期37-40,共4页
目的构建小鼠Tim-3真核表达载体,并在黑色素瘤细胞系B16中表达小鼠TIM-3。方法以脾细胞RNA为模板,逆转录PCR扩增鼠Tim-3编码区基因,T-A克隆至真核表达载体pTARGET,构建重组质粒pTARGET-Tim-3,采用脂质体转染法转染黑色素瘤细胞系B16细胞... 目的构建小鼠Tim-3真核表达载体,并在黑色素瘤细胞系B16中表达小鼠TIM-3。方法以脾细胞RNA为模板,逆转录PCR扩增鼠Tim-3编码区基因,T-A克隆至真核表达载体pTARGET,构建重组质粒pTARGET-Tim-3,采用脂质体转染法转染黑色素瘤细胞系B16细胞,以逆转录PCR和Westernblot验证Tim-3在B16细胞中的表达。结果利用酶切和测序的方法,筛选、鉴定pTARGET-Tim-3真核表达载体,转染黑色素瘤细胞系B16细胞,经逆转录PCR和Westernblot证实TIM-3高效表达。结论成功构建小鼠Tim-3真核表达载体,Tim-3在转染的小鼠B16细胞系中高表达。 展开更多
关键词 基因 克隆 分子 DNA 重组 真核表达 小鼠
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小鼠IL-35基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
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作者 房红莹 赵李祥 +3 位作者 吴燕 胡博 刘跃均 刘海燕 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 2012年第4期518-523,共6页
目的克隆小鼠白细胞介素-35(IL-35)基因并在大肠杆菌中表达和纯化。方法用RT-PCR方法从小鼠脾脏扩增出IL-35的两个亚基Ebi3和p35的成熟肽基因片段,采用重叠PCR法将Ebi3基因和p35基因通过(Gly4Ser)3接头连接,得到的融合基因片段先克隆于p... 目的克隆小鼠白细胞介素-35(IL-35)基因并在大肠杆菌中表达和纯化。方法用RT-PCR方法从小鼠脾脏扩增出IL-35的两个亚基Ebi3和p35的成熟肽基因片段,采用重叠PCR法将Ebi3基因和p35基因通过(Gly4Ser)3接头连接,得到的融合基因片段先克隆于pMD19-T载体,再亚克隆到表达载体pET-30b(+),并转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Western blot检测目的蛋白,用Ni螯合层析方法纯化表达产物。结果从小鼠脾细胞总RNA中扩增出Ebi3和p35的基因片段,重叠PCR法得到的融合基因经鉴定含预期序列;构建的重组表达载体pET-30b(+)-IL-35在BL21(DE3)中经IPTG诱导后表达出约50kd的融合蛋白;West-ern blot检测结果显示,该融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应;经Ni螯合层析方法纯化获得单一蛋白条带。结论小鼠IL-35在大肠杆菌中表达并纯化,为进一步研究其功能及应用价值奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 白细胞介素-35 基因克隆 原核表达 小鼠
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