酪氨酸激酶抑制剂对hTrp3蛋白介导的α_(1B)-AR引起的Ca^(2+)内流的影响

目的 探讨Trp3(transientreceptorpotential 3)蛋白是否参与α1B AR引起的Ca2 + 内流以及酪氨酸激酶对其调控作用。方法 采用脂质体转染 ,将hTrp3cDNA分别转染到HEK2 93细胞和已有α1B受体稳定表达的HEK2 93细胞 ;Westernblot方法检测Trp3蛋白表达情况 ;Fura 2 /AM荧光分光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 + 浓度。结果 HEK2 93细胞上可检测到hTrp3的内源性表达 ,转染后其表达增加。α1B HEK2 93细胞转染hTrp3cDNA后 ,α1B AR引起的Ca2 +内流显著增加 (P <0 0 1) ;转染hTrp3cDNA对thapsigargin诱导的Ca2 + 内流无作用。 5～ 30 μmol·L-1genistein对转染细胞α1B AR诱发的Ca2 + 内流有抑制作用 ,最大抑制率达(75 2± 12 6 ) %。结论 Trp3cDNA转染可能主要通过非CRAC(calciumreleaseactivatedcalcium )途径增加α1B AR引起的Ca2 + 内流 。

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织α_1肾上腺素受体亚型mRNA表达的研究

目的 了解α1肾上腺素受体 (α1 adrenergicreceptor,α1 AR)三种亚型α1A AR ,α1B AR和α1D ARmRNA在大鼠肺组织的表达位置及缺氧性肺动脉高压发病过程中大鼠肺组织α1 AR亚型mRNA相对表达量的改变情况。方法 采用雄性Wistar大鼠 5 5只 ,随机分为正常对照组 (n =10 ) ,缺氧 2周组 (n =13)、缺氧 4周组 (n =10 ) ,生理盐水组 (n =10 ) ,酚妥拉明组 (n =12 ) ,应用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法 ,检测各组大鼠肺组织α1 AR三种亚型mRNA的相对表达量。应用组织原位杂交技术检测α1 AR三种亚型在正常大鼠肺组织中的表达部位。结果 ( 1)随缺氧时间的延长 ,肺动脉压力升高。 ( 2 )各实验组大鼠肺组织中α1 AR亚型mRNA的表达均以α1A AR为主 ,α1B AR次之 ,α1D AR含量最少。 ( 3)随缺氧时间的延长 ,α1A AR和α1B AR两种亚型mRNA相对表达量升高 ,缺氧 2、4周组与对照组差异有显著性 ,缺氧 2、4周组间差异亦有显著性。 ( 4 )随缺氧时间的延长 ,α1D ARmRNA的相对表达量增多 ,但缺氧组与对照组相比差异无显著性。 ( 5 )酚妥拉明组与生理盐水组比较 ,α1A AR ,α1B AR和α1D AR三种亚型mRNA的相对表达量差异均无显著性。 ( 6 )正常大鼠外周肺组织中三种α1 AR亚型的mRNA主要表达于肺小动脉和小静脉?