一种兼具抗病毒活性及pHSA结合活性的蛋白——乙型肝炎病毒前S2肽段与人α2a型干扰素的融合蛋白

α型干扰素(IFN-α)是一类具有广谱抗病毒活性的蛋白质,是当前研究资料较为充分而应用前景较为广阔的生物治疗药物之一。本实验室研制的重组人α2a型干扰素(IFN-α2a)已获国家批准进入临床验证。已有资料表明,α型干扰素对于慢性肝炎具有显著的疗效,但需要较大的剂量和较长的疗程。如果能够使IFN的作用具备一定的细胞特异性,将有可能提高疗效、降低用药量并减轻副作用。

人α2a干扰素酵母工程菌高产培养条件的研究

研究了摇瓶培养条件对人α2 a干扰素酵母工程菌生长及表达的影响 ,结果表明 ,当基础料中腺嘌呤含量为 2 0μg/m L,在发酵进行至 1 2 h时再加入 2 0μg/m L腺嘌呤时 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别达到了 7.3× 1 0 6IU/m L及 6 .77× 1 0 7IU/mg。发酵过程中后期补入适量葡萄糖 ,且维持低糖水平 ,有利表达。维持总碳源含量不变 ,使培养基中葡萄糖与蔗糖比例为 1∶ 0 .1 ,结果 IFN- α2 a生物活性及比活分别比对照增加了一倍以上。在发酵进行至 1 2 h时 ,加入 2 g/L谷氨酸 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别比对照提高了 1 .76倍及 1 .94倍 ,而添加 0 .2 5～ 1 .0 g/L赖氨酸也能显著提高表达水平。培养基初始 p H对产物表达有较大影响 ,初始 p H为 6 .5时 ,对表达最有利。利用上述摇瓶培养优化条件 ,在 2 .6 L 生物反应器中进行补料分批培养 ,人 α2 a干扰素生物活性达到了1 .3× 1 0 7IU/m L,为原工艺的 3倍。

酿酒酵母重组人α2a干扰素补料分批培养

在 2 .6L全自动发酵罐中对人 α2 a干扰素重组酵母的补料分批培养过程作了初步研究。结果表明 ,培养过程中待葡萄糖耗尽时流加葡萄糖 ,并维持低糖浓度 ;在培养 1 0 h～ 2 0 h时 ,恒速流加 2 0 mg/L的腺嘌呤 ,能较大幅度提高表达水平 ,生物活性从原工艺的 3.1× 1 0 9IU/L提高至1 .3× 1 0 10 IU/L。表达期 p H值对生产水平有很大影响 ,宜控制在 5.0～ 5.