RT-PCR法检测 SMMC-7721人肝癌细胞α5β1整合蛋白 mRNA的表达

整合蛋白α 5β 1是一类存在于细胞表面的细胞粘附分子，在肝癌的发生发展和演进中起着重要的作用。研究了快速定量检测整合蛋白α 5β 1 mRNA表达的 RT－ PCR方法，结果表明：在 PCR反应体系中加入 25 ng到 200 ng mRNA的逆转录产物呈较好的线性关系，并以此为反应条件测定 pcDNA3－α 5， pcDNA3－β 1质粒共转染或单转染的α 5β 1.6－ 7721, α 5.3－ 7721, β 1.6－ 7721细胞株 mRNA的表达，表明经 pcDNA3－α 5， pcDNA3－α 1质粒感染后人肝癌细胞株 SMMC7721细胞中整合蛋白α 5β 1的表达有较大幅度的提高，而且α5，β1亚基间可能存在相互的诱导作用。

TNF-α对人肝癌细胞E-钙粘蛋白、α_5β_1整合蛋白及粘着斑激酶蛋白表达的影响

目的 研究应用肿瘤坏死因子 (TNF α)单独处理SMMC 772 1肝癌细胞不能引起肝癌细胞凋亡的原因。方法 采用免疫组化ABC法 ,结合图像分析仪及流式细胞术和Western印迹方法测定SMMC 772 1细胞表面E 钙粘蛋白 (E cadherin)、α5β1整合蛋白 (α5β1intergrin)、粘着斑激酶 (FAK )表达及粘着斑激酶磷酸化的程度。结果 在肿瘤坏死因子的作用下 ,E 钙粘蛋白的表达略有下降 ,但无明显差异。整合蛋白α5亚基的表达明显下降 ,而整合蛋白 β1亚基表达基本无变化。粘着斑激酶的蛋白表达随着肿瘤坏死因子浓度的增加略有下降 ,但变化不明显 ,粘着斑激酶的磷酸化程度无明显的变化。结论 单独用肿瘤坏死因子处理SMMC 772 1肝癌细胞后 ,并没有阻断由整合蛋白α5β1亚基及E 钙粘蛋白介导的 2条信号通路 ,且由胱冬肽酶 (caspases)介导的凋亡也没有被完全启动 ,不足以引起细胞的凋亡。

整合蛋白α_5β_1的表达与胃癌生物学行为及微血管密度的关系

目的 探讨整合蛋白α5β1和微血管密度在胃癌组织中表达的临床意义及其相互关系。方法 采用免疫组化SP法检测了 3 5例胃癌组织及其中 10例胃癌淋巴结转移灶和 8例慢性浅表性胃炎组织中整合蛋白α5β1的表达及微血管密度 (MVD)。结果 胃癌组织中整合蛋白α5β1表达水平及MVD均显著高于慢性胃炎 (t=3 .3 2 ,P<0 .0 1;t =2 .3 0 ,P<0 .0 5 ) ;胃癌原发灶中整合蛋白α5β1的表达仅与胃癌浸润深度相关 (t =2 .2 9,P<0 .0 5 ) ,而MVD则与胃癌浸润深度、淋巴结有无转移及TNM分期之间密切相关 (t =3 .0 7,P<0 .0 1;t =2 .48,P<0 .0 5 ;t=2 .94,P<0 .0 1) ;胃癌淋巴结转移灶中整合蛋白α5β1表达水平较相应的原发灶显著增高 (t =2 .45 ,P<0 .0 5 ) ;整合蛋白α5β1的表达及MVD均与胃癌组织学分级无关(t=0 .15 ,P >0 .0 5 ;t=0 .41,P >0 .0 5 ) ;胃癌组织中整合蛋白α5β1不同表达水平间MVD的差异无显著性意义 (F =1.43 ,P >0 .0 5 ) ,相关性分析显示两者无显著相关性 (r =0 .15 6,P =0 .3 7)。结论 整合蛋白α5β1在胃癌组织中的表达显著上调并与胃癌的进展有关 ,有可能成为判断胃癌侵袭和转移能力的指标及基因治疗的靶标 。

整合蛋白α5、β1亚基在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究整合蛋白α5、β1亚基在前列腺癌(PCa)中的表达及与病理分级和临床分期的关系。方法:采用免疫组化ABC法检测30例正常前列腺组织和30例PCa石蜡标本中整合蛋白α5、β1亚基的表达水平。结果:与正常前列腺组织相比,PCa组织整合蛋白α5、β1亚基表达减弱或消失(P<0.05)。整合蛋白α5、β1亚基表达水平随PCa的病理分级(分化程度)升高而升高,随临床TNM分期的升高而降低。结论:在正常前列腺组织中整合蛋白α5、β1亚基的表达比PCa中高,其表达水平与PCa的病理分级呈正相关关系,和临床分期呈负相关关系,整合蛋白α5、β1亚基的研究为PCa的诊断及增殖提供了一个有价值的指标。

人肝细胞癌中整合蛋白α5β1表达的生物学意义

为了探讨整合蛋白α5β1在肝细胞癌中表达状况及其生物学意义，本文应用Northern，印迹杂交、免疫组化及图像分析技术对肝癌细胞株7721、人肝细胞癌(HCC)组织作整合蛋白α5β1表达分析。结果表明，整合蛋白α5、β1 mRNA在肝癌细胞中表达量明显低于正常肝细胞，且与肝癌的分化程度相关；肝癌浸润部位癌细胞整合蛋白α5β1表达减少；伴肝内转移组其原发灶内α5、β1表达水平较无肝内转移组明显下降，但其静脉内癌栓外周部癌细胞表达增强。结果提示，整合蛋白α5β1的表达对HCC分化、浸润、转移起重要作用。

失巢凋亡过程中整合蛋白α5β1过表达对人肝癌细胞Survivin表达的影响

目的:探讨整合蛋白α5β1过表达引起肝癌细胞凋亡的机理。方法:利用poly-hema使细胞非贴壁生长12 h、18 h、24 h,诱导失巢凋亡。通过Western印迹法检测Survivin表达量。结果:随着Poly-hema诱导时间的增加,α5β1-7721和β1-7721细胞凋亡和死亡率也随之增加而Survivin表达量则减少,β1-7721细胞的减少程度显著大于α5β1-7721,在18h时减少了55％。结论:Survivin在β1-7721细胞的凋亡过程中所起的作用大于α5β1-7721细胞。

FAK和整合蛋白α5、β1亚基在胃癌中表达的比较及其临床意义

目的 比较粘着斑激酶 (FAK)和整合蛋白 (integrin)α5、β1亚基在胃癌及癌旁组织中的表达与肿瘤细胞分化、浸润、转移等生物学行为的关系及相互关系。方法 用免疫组织化学亲合素生物素法 (ABC)检测 75例胃癌及癌旁组织石蜡标本FAK和整合蛋白α5、β1亚基蛋白的表达水平。结果 FAK、整合蛋白α5亚基和整合蛋白 β1亚基的表达为 或 分别是胃癌组织 5 7%、2 9%和 2 5 % ,癌旁组织 4%、76%和 84% ;低分化胃癌组织 68%、18%和 16% ,高中分化组织 42 %、45 %和 39% ;有淋巴结转移的组织 77%、31%和 31% ,无转移的组织 36%、2 8%和 19% ;浸润程度较深的组织 68%、2 9%和 2 5 % ,浸润程度较浅的组织 19%、31%和 2 5 %。结论 FAK较整合蛋白α5、β1亚基可以更有效地衡量胃癌的发生与发展 ,FAK的表达量可作为胃癌发生、发展过程中一种较有价值的病理指标。FAK可能既是一种转化相关酶又是一种演变相关酶。