α7-nAchR激动剂GTS-21对放射性肠炎小鼠的疗效及对其血清炎症因子的影响

目的探讨α7-n AchR激动剂GTS-21对放射性肠炎小鼠的临床疗效,并观察其对血清炎症因子水平的影响。方法选取100只成年雌性BALB/c小鼠,对其腹部进行10 Gy照射建立放射性肠炎模型,并随机分为GTS-21组和对照组,各50只。其中GTS-21组分别在照射前1 d和照射后1 d腹腔注射GTS-21,对照组腹腔注射无菌生理盐水。分别于照射后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d抽取小鼠尾静脉血检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平。对比不同时刻两组小鼠体质量、粪便成型量、血清炎症因子水平变化。另在照射5 d后处死并采用HE染色观察肠道隐窝深度。结果对照组小鼠体质量、粪便成型量每2个时刻间对比差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗后2 d、3 d、4 d和5 d时GTS-21组小鼠体质量、粪便成型量均明显高于对照组(P<0.05);两组血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均随着时间的延长逐渐显著升高,除1 d后每2个时刻间对比差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗后2 d、3 d、4 d和5 d时GTS-21组小鼠血清炎性因子水平均明显低于对照组(P<0.05);GTS-21组小鼠肠道隐窝深度明显高于对照组。结论α7-n AchR激动剂GTS-21对放射性肠炎小鼠有理想的治疗作用,并且能够降低血清炎症因子水平,增多肠道隐窝结构。

慢性睡眠剥夺对小鼠海马胶质细胞α7-nAChR影响的研究

目的探讨慢性睡眠剥夺对小鼠海马组织α7-nAChR表达及星形胶质细胞和小胶质细胞表面α7-nAChR的表达的影响。方法成年C57BL/6J小鼠随机分为3组:正常对照(control,CC)组、慢性睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)组、慢性睡眠剥夺后腹腔注射α7-nAChR激动剂PHA-543613(SD+PHA-543613)组。采用Western印迹、实时荧光定量PCR分别检测各组小鼠海马组织α7-nAChR蛋白及基因的表达;使用免疫荧光染色法观察各组小鼠海马组织星形胶质细胞、小胶质细胞表面α7-nAChR的表达变化。结果 SD组与CC组比较,SD组海马组织的α7-nAChR蛋白表达、mRNA表达和星形胶质细胞表面α7-nAChR的表达均明显低于CC组(P=0.001,P=0.038,P=0.003);SD组与SD+PHA-543613组比较,SD+PHA-543613组海马组织的α7-nAChR蛋白表达、mRNA表达和星形胶质细胞表面α7-nAChR的表达较SD组升高(P=0.037,P=0.002,P=0.027)。结论慢性睡眠剥夺不仅抑制海马组织α7-nAChR基因及蛋白的表达,同时降低α7-nAChR在星形胶质细胞表面的表达,海马组织胶质细胞α7-nAChR的减少可能是慢性睡眠剥夺后认知功能下降的危险因素。

α7-nAChR在海马星形胶质细胞上的表达

目的探讨α7-nAChR亚基在体内、体外海马星形胶质细胞上的表达。方法从大鼠脑中分离海马后进行冰冻切片,采用免疫荧光双染技术,首先用抗-GFAP抗体对星形胶质细胞进行鉴定,再观察α7-nAChR在星形胶质细胞上的表达。体外表达的研究在培养星形胶质细胞上进行,先分离获得新生SD大鼠的海马组织,提取并培养海马星形胶质细胞,纯化鉴定后,用配体结合实验和细胞免疫荧光双标分析α7-nAChR在星形胶质细胞上的表达。结果海马组织中抗-GFAP染色阳性的细胞抗-α7-nAChR染色也呈阳性,但仅部分抗-α7-nAChR染色阳性的细胞抗-GFAP染色也呈阳性。体外纯化后的星形胶质细胞既能与FITC标记的α-BTX结合,荧光染色呈阳性,同时,细胞免疫荧光双标分析显示星形胶质细胞抗-GFAP和抗-α7-nAChR染色均呈阳性。结论α7-nAChR在体内体外星形胶质细胞上均能正常表达。

α7-nAChR在肺癌中的表达和临床意义

目的 :检测α7-烟碱型乙酰胆碱受体(α7-niccotinic acetylcholine receptor,α7-n ACh R)在肺癌组织中的表达,探讨其与临床病理学特征的关系及意义。方法:采用免疫组织化学染色法检测130例肺癌组织及40例癌旁肺组织中α7-nAChR表达,并分析α7-nAChR表达与吸烟、病理分型、分化程度、临床分期、淋巴结转移等关系。结果:肺癌组织α7-nAChR阳性表达率70.77%,癌旁组织阳性率37.50%,肺癌组织中α7-n ACh R阳性表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001)。肺癌组织中α7-nAChR的表达水平与肺癌患者吸烟、临床分期、分化程度相关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤大小、病理分型、淋巴结转移之间的关系无统计学意义(P>0.05)。结论:α7-nAChR高表达在肺癌的发生中起一定作用,可为肺癌的α7-nAChR靶向治疗提供一定依据。

α7-nAChR/PI3K/AKT/GSK-3β通路在慢性睡眠剥夺后的保护作用及其机制研究

目的观察α7-nAChR/PI3K/AKT/GSK-3β通路在慢性睡眠剥夺后的保护作用,并探讨其作用机制。方法成年C57BL/6J小鼠随机分为3组:对照(CC)组、慢性睡眠剥夺(SD)组、慢性睡眠剥夺后腹腔注射α7-nAChR激动剂-PHA-543613(SD+PHA-543613)组。采用Western-blot印迹检测各组小鼠海马组织α7-nAChR及p-AKT、p-GSK-3β、Nrf-2、HO-1蛋白表达变化;使用实时荧光定量PCR检测各组小鼠海马组织α7-nAChR mRNA水平及炎性因子与抑炎因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ、MCP-1、Arg-1、CD206、TGF-β、YM-1mRNA表达水平;采用免疫荧光染色法观察各组小鼠海马组织星形胶质细胞、小胶质细胞表面α7-nAChR的表达变化;通过水迷宫评估小鼠的行为学。结果慢性睡眠剥夺7 d后,SD组海马组织的α7-nAChR蛋白、mRNA的表达明显低于CC组(P=0.001,P=0.038),SD组海马组织p-AKT蛋白表达显著低于CC组(P=0.019),p-GSK-3β蛋白表达量高于CC组(P=0.011);慢性睡眠剥夺后腹腔注射α7-nAChR激动剂-PHA-543613后海马组织星形胶质细胞表面α7-nAChR的表达高于SD组(P=0.027),p-AKT、p-GSK-3β的蛋白表达也明显高于SD组(P=0.047,P=0.017);腹腔注射α7-nAChR激动剂-PHA-543613后,SD+PHA-543613组海马组织Nrf-2、HO-1蛋白表达量和抑炎因子CD206、TGF-β的mRNA表达量与SD组相比明显增多(P=0.020,P=0.016,P<0.01,P<0.01),而促炎因子TNF-α、MCP-1的mRNA表达量与SD组相比显著下降(均P<0.01)。腹腔注射α7-nAChR激动剂-PHA-543613后小鼠的逃避潜伏期与SD组相比缩短,处于目标象限时间延长、穿越平台次数增多(P=0.000,P=0.000,P=0.001)。结论慢性睡眠剥夺后刺激α7-nAChR通过激活PI3K/AKT/GSK-3β减轻神经炎症和氧化应激。

烟碱型乙酰胆碱受体α3-nAChR和α7-nAChR在口腔癌中的表达

目的研究烟碱型乙酰胆碱受体α3-nAChR和α7-nAChR在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达,为口腔癌发病机制的研究提供实验依据。方法随机选取20例福尔马林固定的口腔鳞状细胞癌组织标本,10例正常口腔黏膜作为对照。采用免疫组织化学染色和荧光定量PCR方法,检测烟碱型乙酰胆碱受体α3-nAChR和α7-nAChR在OSCC中的表达。结果口腔鳞状细胞癌中α3-nAChR的mRNA水平是正常口腔黏膜的3.97倍(P<0.05),蛋白表达水平显著高于正常口腔黏膜(P<0.05),α7-nAChR的mRNA水平是正常口腔黏膜的8.41倍(P<0.05),蛋白表达水平也显著高于正常口腔黏膜(P<0.05)。结论α3-nAChR、α7-nAChR与烟草相关口腔鳞状细胞癌的发生密切相关,在OSCC治疗中有望成为有价值的分子靶点。

α7-nAChR和α9α10-nAChR的同源模建研究

目的:构建了人的α7-nAChR和α9α10-nAChR的二聚体模型。方法:采用同源模建和分子动力学的方法,以高同源性的2QC1和2BYR作为复合模板,构建了人的α7-nAChR和α9α10-nAChR的二聚体模型,并通过PROCHECK、ERRAT及PROSA程序对其进行了构象和能量的评价。结果:通过对200 ps,500 ps,1.2 ns下模型的C-loop区进行比较分析发现:1.2 ns下模型的C-1oop区构象更趋于合理状态。对所建模型进行构象和能量的评价以及分子对接的验证结果表明:本文中模建的α7-nAChR和α9α10-nAChR模型是合理的、可靠的。结论:该研究所建立的模型是合理可靠的,为设计α7-nAChR和α9α10-nAChR的高选择性配体提供了重要的理论基础。

兔子宫内膜上皮细胞α7-nAChR介导MAPK信号通路抑制炎性反应的机制

子宫内膜上皮细胞可通过自我调控降低过度炎症反应以避免细胞损伤,但调控机制尚不清楚。本研究旨在探讨α7烟碱乙酰胆碱受体(α7-nAChR)是否介导调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路参与细胞避免炎症过度反应。通过体外培养兔子宫内膜上皮细胞,脂多糖(LPS)刺激细胞炎症反应、α7-nAChR抑制剂和激动剂处理细胞,比较α7-nAChR表达与MAPK信号通路的相关性,探讨α7-nAChR介导细胞炎症自我调控可能的机制。Western blot检测结果表明,兔子宫内膜上皮细胞在100μg/L LPS刺激12 h后,JNK1/2和P38MAPK磷酸化水平明显低于细胞空白对照组,α7-nAChR抑制剂MLA(5μmol/L)与α7-nAChR激动剂共同处理后ERK1/2、JNK1/2及P38MAPK磷酸化水平上升,而α7-nAChR激动剂PNU282987(5μmol/L)和尼古丁(10 mg/L)可明显逆转MLA效应,且MAPK信号通路关键因子磷酸化与α7-nAChR表达呈部分负相关。结果表明,α7-nAChR介导调控MAPK信号通路是细胞避免炎症过度反应自我调控的潜在机制。

α7-nAChR介导的小花棘豆臭豆碱对小鼠海马组织谷氨酸代谢的调控机制

臭豆碱是小花棘豆的主要有毒成分之一,本试验目的是证明臭豆碱通过作用α7烟碱乙酰胆碱受体(α7-nAChR)调控谷氨酸代谢的毒理作用。结果显示,9 mg/kg和18 mg/kg臭豆碱口服剂量可激动小鼠海马组织α7-nAChR,促进谷氨酸释放及上调谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)表达,该效应可被α7-nAChR抗激动剂MLA抑制。但是,36 mg/kg臭豆碱口服剂量却增加小鼠海马谷氨酸浓度及下调GLAST表达。结果表明,超过36 mg/kg臭豆碱剂量则通过抑制α7-nAChR降低GLAST表达,导致谷氨酸代谢障碍从而具有潜在的谷氨酸神经毒性。

参枝苓口服液对APP/PS1双转基因小鼠海马α7-nAChRs和mGluR5表达的影响

目的探讨参枝苓口服液对APP/PS1双转基因小鼠海马神经元突触信号传递相关蛋白α7-nAChRs和mGluR5表达的影响。方法将雄性3月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分成5组,模型组、多奈哌齐组[0.92 mg/(kg·d)],参枝苓大剂量组[50 g/(kg·d)]、参枝苓中剂量组[25 g/(kg·d)]、参枝苓小剂量组[12.5 g/(kg·d)]。正常组为同月龄同背景野生型C57BL/6J小鼠。连续灌胃3个月,进行行为学跳台实验。实验结束后取海马组织,运用蛋白印迹法(Western blot)和免疫组织化学方法检测小鼠海马CA1区突触相关蛋白α7-nAChRs和mGluR5的表达。结果 Western blot检测显示,模型组小鼠海马α7-nAChRs的蛋白条带比正常组小鼠明显变窄,颜色变浅(P<0.01)、而mGluR5蛋白条带明显增宽,颜色变深(P<0.01);与模型组小鼠相比,各干预组α7-nAChRs蛋白条带增宽、颜色变深(P<0.05或P<0.01),mGluR5蛋白条带变窄、颜色变浅(P<0.05或P<0.01)。免疫组织化学染色检测小鼠海马α7-nAChRs和mGluR5的阳性细胞表达结果与Western blot检测结果一致。结论参枝苓口服液可能是通过调节小鼠海马CA1区突触中的关键蛋白,改善突触功能发挥减缓阿尔茨海默病(AD)大脑损伤,维持记忆获得能力,从而发挥抗痴呆作用。

α7-烟碱乙酰胆碱受体在肺癌发生、发展及治疗中的作用

烟碱乙酰胆碱受体(nAChRs)作为兴奋性和抑制性神经递质的中央调节器,控制癌细胞、癌微环境和远处转移生长因子、血管生成因子和神经营养因子的合成和释放。吸烟和其他潜在的不良环境和生活方式等因素上调nAChRs促癌作用并下调其抑癌作用。其中,α7-nAChR在肺癌细胞中高表达,并参与癌细胞的增殖、凋亡和迁移,有望成为肺癌治疗的一个新型靶点。

SH-SY5Y细胞α7尼古丁受体基因抑制对APP代谢的影响

目的采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达,了解对β淀粉样前体蛋白(APP)代谢中的γ-分泌酶两个重要组分早老蛋白(PS)及单过性跨膜蛋白(NCT)水平的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7nAChR的小干扰RNA(siRNA),用实时PCR法和Western印迹法分别测定细胞中α7 nAChR、PS及NCT在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低;PS蛋白mRNA及蛋白水平均升高,而NCT水平无明显变化。结论α7 nAChR基因表达抑制后γ-分泌酶组分之一PS的水平明显升高,这种改变可能与α7 nAChR基因表达抑制后β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生增多有关,可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系。

SH-SY5Y细胞α7神经型尼古丁受体基因沉默对突触相关蛋白的影响

目的研究神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)α7神经型尼古丁受体基因(α7 nAChR)表达沉默后对细胞突触相关蛋白的影响,探讨α7 nAChR神经保护作用机制及在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的发病机制中的作用。方法用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western blot)法分别测定细胞中囊泡相关蛋白(synaptophysin)和突触后膜蛋白(PSD-95)mRNA蛋白表达水平的变化。结果α7 nAChR沉默组的突触相关蛋白PSD-95、SYPmRNA及蛋白表达都有明显的减少。结论沉默SH-SY5Y细胞α7 nAChR水平能够使细胞突触相关蛋白水平减少。这可能提示了α7 nAChR与细胞突触密切相关,并且α7 nAChR对突触有一定的保护作用,进一步说明α7nAChR在阿尔茨海默病的发病中起着重要作用。

α7-烟碱型乙酰胆碱受体在肺炎和肺癌中的研究进展

烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)是细胞膜上门控离子通道受体,乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)与其相互作用,激活细胞增殖、凋亡等下游信号通路,参与肺组织多种病理生理过程,在肺癌的发生发展过程中发挥重要作用。α7-nAChR是nAChRs的重要亚型,通过胆碱能抗炎通路对肺炎产生重要影响,还可以参与肺癌细胞增殖、血管生成、转移以及抑制细胞凋亡等过程。尼古丁作为α7-nAChR的激动剂,其调节机制研究对肺癌药物的研发具有重要意义。本文将对α7-nAChR及其下游信号通路在肺炎和肺癌中的作用进行综述,为制定抗炎策略和研究新型抗癌药物提供依据。

SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因过表达对钙调蛋白表达的影响

目的构建稳定的α7神经型尼古丁受体(α7 nAChR)过表达的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,研究α7 nAChR过表达对钙调蛋白(CaM)表达水平的影响。方法设计α7 nAChR引物并扩增α7 nAChR特异性编码的核苷酸序列,退火后克隆至pc DNA 3.1质粒,构建α7 nAChR-pcDNA 3.1重组质粒。将α7 nAChR-pcDNA 3.1重组质粒转染SH-SY5Y细胞,用含G418的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量(Realtime)PCR和蛋白质印迹方法检测转染细胞中α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化,蛋白质印迹方法检测CaM表达水平的变化。结果构建的α7 nAChR mRNA过表达质粒成功转入SH-SY5Y细胞后,经G418筛选获得稳定转染细胞克隆株,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达量分别增加了533%和110%,CaM表达量增加了43%。结论成功构建了α7 nAChR mRNA过表达的SH-SY5Y细胞株,α7 nAChR表达上调增加了CaM表达水平,这可能与阿尔茨海默病的发病有一定的关系。

SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因沉默对CaM、CaMKⅡ蛋白水平的影响

目的构建稳定的α7 n AChR沉默的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞,研究α7神经型尼古丁受体(n AChR)基因沉默对钙调蛋白(Ca M)、钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)水平的影响,了解α7 n AChR神经保护作用及其与阿尔茨海默病(AD)发病机制的关系。方法将α7 n AChR shRNA重组质转染到SH-SY5Y,用含嘌呤霉素的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法(Western-blot)检测细胞中α7n AChR mRNA及蛋白表达水平的变化;Western-blot方法测定Ca M、Ca MKⅡ蛋白表达水平。结果获得稳定转染α7 n AChR shRNA重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α7 n AChR mRNA及蛋白表达量分别减少了95%和80%。Ca M、Ca MKⅡ蛋白表达量分别减少了48.5%和35%。结论成功构建了α7 n AChR mRNA沉默的SH-SY5Y细胞细胞株,α7 n AChR沉默降低了Ca M、Ca MKⅡ的蛋白水平,可能影响信号通路转导,这可能与阿尔茨海默病(AD)的发病有一定的关系。

α7尼古丁受体mRNA表达抑制对SH-SY5Y细胞氧化应激水平的影响

目的探讨通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达后细胞氧化应激水平的变化,以了解该受体的神经保护作用。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小分子干扰RNA,Real-time PCR法检测转染细胞中α7 nAChR mRNA水平蛋白质印迹方法检测蛋白表达水平;并用Aβ1～42处理培养细胞,比色法测定细胞脂质过氧化产物水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果转染siRNA后,α7 nAChR mRNA水平和蛋白表达水平分别降低了81.7%和76.9%;细胞脂质过氧化水平升高38.4%;SOD和GSH-PX活性分别降低30.3%和21.1%。用Aβ1～42处理细胞后氧化应激水平升高,且转染siRNA后能增强Aβ的神经毒性作用。结论α7 nAChR基因表达抑制后能增强细胞氧化应激水平,同时增强Aβ的神经毒性作用。

基于中药数据库的α7型尼古丁乙酰胆碱受体抑制剂的虚拟筛选

研究了DMXB-A与α7型尼古丁乙酰胆碱受体(α7 nAchR,这里指α7二聚体)的结合模型,并以DMXBA为模板化合物,采用相似性搜索从中药数据库中筛选出19个中药分子,运用分子对接技术,研究了19个中药分子与α7型尼古丁乙酰胆碱受体的结合模式,最终筛选出一个最佳的分子Mol7235,并进一步研究了该分子与α7二聚体的活性口袋的非键作用和分子表面匹配情况.

EphB/Ephrin-B1信号对睫状神经节α7-尼古丁乙酰胆碱受体电流的影响

目的探讨EphB/Ephrin-B1信号对鸡胚睫状神经节(CG)神经元上α7-尼古丁乙酰胆碱受体(α7-nAChRs)电流的影响。方法用膜片钳技术分别在培养的和急性分离的CG神经元上记录α7-nAChRs电流。细胞被随机分为:对照组、Ephrin-B1Fc处理组、IgG处理组和Ephrin-B1处理组,观察电流的变化。结果对照组、IgG组和Ephrin-B1处理组之间α7-nAChRs电流无显著差异(P>0.05),而这3组与Ephrin-B1Fc处理组之间有显著差异(P<0.05)。Ephrin-B1Fc可浓度依赖性抑制α7-nAChRs电流,该过程可在数分钟内发生,并呈现可逆性。培养的和急性分离的CG神经元Ipeak/Cm的IC50分别为0.032mg/L和1.4mg/L。结论Eph/Ephrin-B1信号可影响CG神经元α7-nAChRs的电流,提示Eph/Ephrin-B1可能参与交感神经系统功能的调控。

α7尼古丁受体基因抑制对SH-SY5Y细胞胆碱酯酶及胆碱乙酰化酶水平的影响

目的采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达,了解对细胞胆碱酯酶(AChE)及胆碱乙酰化酶(ChAT)水平的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小干扰RNA(siRNA),用real-time PCR法和Western blotting法分别测定细胞中α7nAChR、AChE及ChAT在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低;α7 nAChR基因表达抑制能明显升高AChE及ChAT mRNA和蛋白表达水平,尤其是AChE的表达水平。结论α7 nAChR基因表达抑制可能通过增加细胞AChE水平而增加神经递质乙酰胆碱的分解,而ChAT的表达升高可能为一种代偿机制,这可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系。