α7nAChR激动剂经内质网应激调控NLRP3炎症小体改善缺氧缺血性脑损伤的分子机制研究

目的探究α7nAChR激动剂通过介导内质网应激(ERS)调控NLRP3炎症小体表达对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的影响及可能机制。方法选择出生7 d左右的SPF级SD雄性大鼠48只,随机分为假手术组(S组)、模型组(HIBD组)、HIBD+α7nAChR激动剂PNU282987组(HP组),每组16只。HIBD组和HP组大鼠均进行HIBD模型复制;S组进行假手术,不做结扎和缺氧处理。HP组模型复制成功后1 h腹腔注射0.8 mg/kg PNU282987,HIBD组和S组同时间腹腔注射等量生理盐水。模型复制48 h后采用水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;HE染色观察脑组织病理变化;TTC染色法检测脑梗死面积;TUNEL法检测大脑皮质、海马CA1区神经细胞凋亡;Western blotting检测脑组织中NLRP3蛋白及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的相对表达量。结果水迷宫实验结果显示,3组大鼠逃避潜伏期、穿越圆台次数比较,差异有统计学意义(P<0.05);ELISA检测结果显示,HIBD组和HP组大鼠血清IL-18、IL-1β水平较S组升高(P<0.05),HP组大鼠血清IL-18、IL-1β水平较HIBD组降低(P<0.05);HE染色结果显示,S组脑皮层完整,细胞排列正常,无明显神经元损伤,HIBD组可见脑皮层神经元排列较为紊乱,细胞间隙变宽,细胞膜破裂,HP组神经元排列紊乱,水肿程度、坏死程度较HIBD组轻;TTC染色结果显示,S组无明显梗死灶,HIBD组和HP组均可见白色梗死灶,其中HP组梗死面积占比明显低于HIBD组(P<0.05);TUNEL法结果显示,HIBD组和HP组大鼠脑皮层和海马CA1区神经细胞凋亡率较S组升高(P<0.05),HP组大鼠脑皮层和海马CA1区神经细胞凋亡率较HIBD组降低(P<0.05);Western blotting检测结果显示,HIBD组和HP组大鼠NLRP3、GRP78、CHOP蛋白相对表达量较S组升高(P<0.05),HP组NLRP3、GRP78、CHOP蛋白相对表达量较HIBD组降低(P<0.05)。结论α7nAChR激动剂可改善大鼠HIBD,其机制可能与其能抑制ESR途径、降低NLRP3炎症小体表达有关。

Toll样受体7激动剂治疗过敏性疾病的研究进展

Toll样受体(TLR)7是TLR家族中的一员,是Ⅰ型跨膜糖蛋白,由细胞质Toll/白细胞介素-1受体同源性(TIR)信号传导结构域和包含19~25个串联富含亮氨酸重复基序的外部抗原识别结构域组成。人体内TLR7主要分布在浆树突状细胞(pDC)和B细胞的胞体内体膜上,通过高尔基体的囊泡从内质网穿梭至内体。内体膜上的TLR7与病毒来源的单链RNA分子或咪唑啉类似物结合从而被激活,进一步诱导Ⅰ型干扰素的合成,从而启动辅助性T淋巴细胞(TH)1细胞的激活,快速招募炎症细胞到感染部分,发挥抗病毒、抗肿瘤以及抗过敏的功能。TLR7激活后由于具有调节TH1/TH2细胞比例的作用,其配体用于治疗过敏性疾病的研究日益受到关注。该文围绕TLR7激动剂对过敏性哮喘、过敏性鼻炎以及过敏性脑炎的临床前研究和临床试验研究进行综述,以期为过敏性疾病的治疗提供新思路。

激活α7nAchR促进肥胖小鼠的脂肪稳态和米色脂肪生成及产热作用

目的观察肥胖小鼠脂肪组织形态学改变以及脂代谢、炎症等相关指标的异常表现,探索激活α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAchR)促进肥胖机体白色脂肪米色化产热的作用机制。方法取诱导成肥胖小鼠40只和10只低脂进食小鼠,分为空白组、高脂组、模型组、激动剂组、抑制剂组(10只/组)。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠附睾白色脂肪组织,评估细胞数量、大小及形态。ELISA检测白色脂肪组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1(IL1β)、白细胞介素10(IL10)、转化生长因子-β(TGF-β)表达水平。qRT-PCR检测白色脂肪一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)mRNA。PCR检测解偶联蛋白(UCP-1)、PR结构域蛋白16(PRDM-16)、线粒体生成的关键调节因子(PGC-1α)mRNA水平。Western blot检测白色脂肪核转录因子P65(NF-κB P65)、磷酸化蛋白酪氨基酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化传导及转录激活因子3(p-STAT3)表达水平。结果与空白组比较,高脂组体质量明显增加(P<0.01),白色脂肪组织中出现较多脂肪空泡,脂滴明显增大,iNOS mRNA及TNF-α、IL-1β水平升高(P<0.01),而Arg-1 mRNA及IL-10、TGF-β水平降低(P<0.01);而与模型组相比,药物干预的3组体质量均有所减轻(P<0.05),白色脂肪中脂滴缩小。激动剂组白色脂肪中PRDM-16、PGC-1α、UCP-1 mRNA下降最为明显。而激动剂组TNF-α、IL-1β水平降低(P<0.05,P<0.01),IL-10、TGF-β水平升高(P<0.01),M1/M2巨噬细胞比值降低。结论激活α7 nAchR后可以改善应用β3受体激动剂产生的白色脂肪组织稳态受损,促进白色脂肪中M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化减轻白色脂肪炎症反应,促进白色脂肪组织米色化,提高米色化产热效能。

α7-nAchR激动剂GTS-21对放射性肠炎小鼠的疗效及对其血清炎症因子的影响

目的探讨α7-n AchR激动剂GTS-21对放射性肠炎小鼠的临床疗效,并观察其对血清炎症因子水平的影响。方法选取100只成年雌性BALB/c小鼠,对其腹部进行10 Gy照射建立放射性肠炎模型,并随机分为GTS-21组和对照组,各50只。其中GTS-21组分别在照射前1 d和照射后1 d腹腔注射GTS-21,对照组腹腔注射无菌生理盐水。分别于照射后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d抽取小鼠尾静脉血检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平。对比不同时刻两组小鼠体质量、粪便成型量、血清炎症因子水平变化。另在照射5 d后处死并采用HE染色观察肠道隐窝深度。结果对照组小鼠体质量、粪便成型量每2个时刻间对比差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗后2 d、3 d、4 d和5 d时GTS-21组小鼠体质量、粪便成型量均明显高于对照组(P<0.05);两组血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均随着时间的延长逐渐显著升高,除1 d后每2个时刻间对比差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗后2 d、3 d、4 d和5 d时GTS-21组小鼠血清炎性因子水平均明显低于对照组(P<0.05);GTS-21组小鼠肠道隐窝深度明显高于对照组。结论α7-n AchR激动剂GTS-21对放射性肠炎小鼠有理想的治疗作用,并且能够降低血清炎症因子水平,增多肠道隐窝结构。

血管紧张素-(1-7)及其受体激动剂AVE0991治疗大鼠急性肺损伤的效果

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]及其特异性受体激动剂AVE0991用于治疗大鼠急性肺损伤(ALI)的效果。方法选择清洁级雄性SD成年大鼠45只,6~8周龄,体重250~300 g。采用随机数字表法将大鼠分为五组:对照组(C组)、ALI组(L组)和Ang-(1-7)组(LA组)、AVE0991组(LAV组)和Ang-(1-7)抑制剂(A-779)(LAN组),每组9只。L组静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg,机械通气V T_(1)5 ml/kg,持续4 h;C组静脉注射与L组等容量的生理盐水,机械通气V T_(8)ml/kg,持续4 h;LA组、LAV组和LAN组静注LPS 5 mg/kg,机械通气V T_(1)5 ml/kg,持续2 h后分别静注Ang-(1-7)50 pmol·kg^(-1)·min^(-1)、AVE0991500 pmol·kg^(-1)·min^(-1)和A-779100 pmol·kg^(-1)·min^(-1),继续机械通气2 h。记录机械通气前(T_(0))、机械通气2 h(T_(1))、药物处理30 min(T_(2))、60 min(T_(3))、90 min(T_(4))、120 min(T_(5))时的肺动脉压(PAP);T_(1)和T_(5)时取肺动脉血行血气分析,记录LA组、LAV组和LAN组的PaCO_(2)、PaO_(2)。处死大鼠,对支气管肺泡灌洗液(BALF)采用瑞氏-姬姆萨染色行白细胞分类计数,采用ELISA法检测股静脉血TNF-α浓度,采用肺组织称重法计算肺湿/干重比(W/D),采用HE染色观察肺组织病理改变并评估肺损伤程度。结果与T_(1)时比较,T_(2)时LA组PAP明显降低(P<0.05),T_(2)—T_(4)时LAV组PAP明显降低(P<0.05),T_(5)时LA组PaO_(2)明显升高(P<0.05)。与C组比较,L组和LAN组BALF中白细胞计数明显增多(P<0.05),L组、LA组、LAV组和LAN组血清TNF-α浓度和W/D值明显升高(P<0.05)。与L组比较,LA组和LAV组BALF中白细胞计数、血清TNF-α浓度和W/D值明显降低(P<0.05)。与LA组比较,LAN组BALF中白细胞计数、血清TNF-α浓度和W/D值明显升高(P<0.05)。C组肺组织损伤轻微,L组肺组织损伤中度,LA组和LAV组肺组织损伤轻度,LAN组肺组织损伤严重。结论Ang-(1-7)及AVE0991可以减轻大鼠大潮气量通气合并LPS所致ALI的炎症反应,改善肺损伤,具有肺保护作用。

κ阿片受体激动剂对心肺转流大鼠术后认知功能及α7nAChR表达的影响

目的探讨κ阿片受体(kappa opioid receptors,KORs)激动剂U50488H对心肺转流(cardiopulmonary bypass,CPB)后大鼠认知功能及α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAChR)表达的影响。方法成年雄性SD大鼠32只,体重400～450g,随机分为四组:Sham组(S组)、CPB组(C组)、CPB+U50488H组(K组)、CPB+KORs拮抗剂Nor-BNI+U50488H组(N组),每组8只。四组大鼠于术前5d开始进行水迷宫训练,每天4次。S组不建模型,动静脉穿刺后进行机械通气60min,其余三组心肺转流60min。术后1d进行Morris水迷宫实验,随后处死大鼠,采集血清,取海马组织。采用ELISA法检测血清IL-1β、TNF-α、S100-β浓度、海马ACh含量及ChAT和AchE活性;采用Western blot法检测海马α7nAChR蛋白含量。结果与S组比较,C、K和N组逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少,目标象限游泳距离和停留时间明显缩短(P<0.05);血清IL-1β、TNF-α和S100-β浓度明显升高,海马α7nAChR蛋白含量明显降低(P<0.05)。与C组比较,K组逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数明显增多,目标象限游泳距离和停留时间明显延长(P<0.05);血清IL-1β、TNF-α和S100-β浓度明显降低,海马α7nAChR蛋白含量明显升高(P<0.05)。与S组比较,C组、N组海马Ach含量及ChAT活性明显降低,AchE活性明显升高。与C组比较,K组海马Ach含量及ChAT活性明显升高,AchE活性明显降低(P<0.05)。结论 KORs激动剂激活胆碱能抗炎通路,上调α7nAChR的表达,减轻炎症反应,从而改善CPB后大鼠认知功能。

在线净化液相色谱-串联质谱法测定畜禽粪便中7种β_2-受体激动剂

建立了同时测定畜禽粪便中福莫特罗、沙美特罗、卡布特罗、克伦异磅特罗、克伦潘特、克伦塞罗和羟甲基克伦特罗7种β2-受体激动剂的超高效液相色谱-串联质谱（ UPLC-MS/MS）分析方法。样品经酸性乙腈充分提取后,再用0.2％甲酸溶液稀释,提取液用阳离子交换在线净化柱（ HyperSep Retain CX）净化,2％氨水-甲醇溶液将分析物洗脱转入至Hypersil Gold C18分析柱,经色谱分离后,用串联质谱检测。在正离子电喷雾条件下,采用选择反应监测模式检测,以外标法定量。结果表明,7种β受体激动剂在0.5～100μg/L的浓度范围内线性良好,线性相关系数均大于0.9928。取3倍信噪比下,畜禽粪便中7种β2受体激动剂的检出限为1μg/kg,定量限为5μg/kg。在空白猪、鸡粪便中添加5～50μg/kg水平的7种β2受体激动剂,得到平均回收率为67％～112％,其相对标准偏差为2.9％～10.2％。本方法简单快速,适用于畜禽粪便中β2-受体激动剂残留的定量及确证分析。

TLR7/8激动剂及其在肿瘤免疫治疗中的研究进展

0引言TLRs在固有免疫系统中是宿主对抗入侵病原体的第一道屏障。TLRs不但在免疫细胞上有表达,近年来发现,其在肿瘤细胞上也有不同组合的表达。肿瘤细胞上表达的TLRs对肿瘤的发展起着十分重要的作用。

Toll样受体7激动剂对K562细胞抑制作用的研究

本研究旨在探讨Toll样受体(TLR)7激动剂gardiquimod对人慢性髓系白血病细胞K562的抑制作用。以异戊烯焦磷酸法扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的gardiquimod处理γδT细胞和K562细胞48 h,用MTT法检测细胞增殖情况。以流式细胞术检测gardiquimod处理前后K562细胞内TLR7表达、细胞周期及凋亡的变化。用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对K562的杀伤活性。结果表明,gardiquimod 0.69-11.0μg/ml可明显促进γδT细胞增殖,在5.5-11.0μg/ml浓度下抑制K562细胞增殖;gardiquimod处理K562细胞后未检测到凋亡,但细胞周期有明显变化,而且处理后的K562细胞更易被γδT细胞杀伤。结论:gardiquimod能够抑制K562细胞增殖,阻滞细胞周期,并增强其对γδT细胞杀伤的敏感性。

TLR7激动剂Imiquimod减弱转染IL-10的小鼠髓样树突状细胞的负向调节功能

目的 :观察Toll样受体7(Toll like receptor 7,TLR7)激动剂Imiquimod对白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)转染小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone-marrow derived dendritic cell,mDC)免疫功能影响。方法:转染IL-10至小鼠m DC,TLR7激动剂Imiquimod刺激48 h,利用流式细胞仪检测DC表面标志MHCⅡ、CD80、CD86及Fas L等分子的表达;ELISA检测细胞产生IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果 :IL-10抑制m DC表达MHCⅡ、CD80、CD86分子,降低其分泌IL-6、TNF-α,促进其表达Fas L,而TLR7激动剂刺激增加了IL-10转染m DC表达MHCⅡ、CD80、CD86分子,促进其产生IL-6、TNF-α,抑制Fas L表达。结论:TLR7激动剂可逆转IL-10诱发的DC免疫应答低下。

核受体激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF-7细胞芳香化酶的调节作用

目的 :探讨各种核受体包括过氧化酶体增生物激活受体 γ(PPARγ)和 α(PPARα)、维甲酸受体 (RAR)、维甲类 X受体 (RXR)、维生素 D受体 (VDR)、甲状腺素受体 (TR)和糖皮质激素受体 (GR)的激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌 MCF- 7细胞芳香化酶活性的调节作用。 方法 :测定人卵巢颗粒细胞和 MCF- 7细胞在上述各种核受体激动剂处理前后芳香化酶活性的变化和细胞色素 P4 5 0芳香化酶 (P4 5 0 arom) m RNA的表达水平。结果 :(1) PPARγ和 RXR激动剂均能显著抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性 ,两者结合使用抑制作用更进一步增强 ,并且伴有 P4 5 0 arom m RNA水平下降 ;(2 ) RAR和 RXR激动剂合用能显著刺激乳腺癌 MCF- 7细胞芳香化酶活性 ,并使 P4 5 0 arom m RNA表达水平升高。 结论 :人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF-

α7烟碱型乙酰胆碱受体与阿尔茨海默病的关系

背景:α7烟碱型乙酰胆碱受体在大脑皮质和海马高度表达,并在阿尔茨海默病的病理发展过程中起重要调控作用,是阿尔茨海默病治疗的潜在靶点。目的:总结α7烟碱型乙酰胆碱受体和阿尔茨海默病的密切关系和相互作用机制。方法:检索中国知网、PubMed数据库中相关文献,中文检索词为“α7烟碱型乙酰胆碱受体,阿尔茨海默病,β-淀粉样蛋白,激动剂,正变构调节剂,拮抗剂”;英文检索词为“alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor,Alzheimer’s disease,beta amyloid protein,agonist,positive allosteric modulator,antagonist”,文献检索时限为各数据库建库至2024年7月,依据入选标准对检索结果进行录用或排除,最终纳入符合标准的83篇文献进行综述。结果与结论:α7烟碱型乙酰胆碱受体通过与β-淀粉样蛋白的相互作用减轻β-淀粉样蛋白的神经毒性,如促进阿尔茨海默病的突触可塑性和胆碱能突触的快速传递、减轻β-淀粉样蛋白诱导的神经中枢炎症反应、抵抗神经细胞凋亡,从而对阿尔茨海默病患者的脑具有保护作用等。α7烟碱型乙酰胆碱受体作为阿尔茨海默病治疗靶标具有很大的潜能,但是又存在一系列问题有待解决,比如α7烟碱型乙酰胆碱受体的脱敏性、适度活性稳定性及基因多态性等问题。筛选高特异、安全性和以α7烟碱型乙酰胆碱受体为核心的多靶点结合作用的药物,将成为未来阿尔茨海默病治疗研究的一个方向。

Toll样受体7小分子激动剂偶联流感病毒灭活疫苗的研究

目的研究Toll样受体7小分子激动剂SZU-101(T7)偶联H1N1流感病毒灭活疫苗对小鼠的免疫原性及安全性评价。方法将SZU-101与流感疫苗共价偶联形成SZU-101偶联流感疫苗(Flu-T7);体外评价Flu-T7的对脾脏淋巴细胞免疫诱导活性;体内评价Flu-T7对特异性抗体的诱导效果及特性,将BALB/c小鼠随机分为4组,每组8只,分别为生理盐水组、T7组、单独疫苗(Flu)组、Flu-T7组,采用腹腔注射免疫小鼠,3次免疫后检测血清中Flu特异性Ig G及其分型,并考察每组小鼠的生长状况。结果体外实验显示Flu-T7组比Flu组刺激产生更多的IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-6细胞因子(P<0.05),体内实验显示Flu-T7诱导的Flu特异性Ig G的血清抗体效价显著增高,同时利用Ig G2a/Ig G1的比例表明Flu-T7促进小鼠特异性Th1型免疫反应。各组小鼠脾脏指数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Flu-T7具有良好的有效性及安全性,有望成为新型高效的流感灭活疫苗。

ChAT/α7nAChR/核因子κB信号途径在类风湿关节炎发病中的免疫调控

背景:胆碱能抗炎通路广泛参与类风湿关节炎发生发展,然而胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)/烟碱型乙酰胆碱7受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)/核因子κB信号途径在类风湿关节炎发病中的免疫调控机制研究未见报道。目的:探究类风湿关节炎发病中ChAT/α7nAChR/核因子κB信号途径的免疫调控机制。方法:取32只雌性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为4组,每组8只:除健康对照组外,关节炎模型组、迷走神经切断组和假手术组均采用牛Ⅱ型胶原和弗氏完全/不完全佐剂构建关节炎大鼠模型,造模成功后,迷走神经切断组切断颈部左侧迷走神经,假手术组仅分离迷走神经。术后5周,检测各组大鼠体质量、关节炎评分和关节肿胀度、脾脏及关节病理变化,ELISA检测血清白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平,qRT-PCR及Western blot、免疫组化检测ChAT/α7nAChR/核因子κB通路核心基因mRNA及蛋白表达。结果与结论:①与健康对照组相比,关节炎模型组大鼠体质量下降(P<0.05),关节炎评分升高(P<0.01),踝关节肿胀度加重,关节间隙减小伴炎细胞浸润,脾脏白髓及生发中心增大增多,血清白细胞介素、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平升高(P<0.05,P<0.01),关节中α7nAChR、ChAT、IκBα、核因子κB p50/p65的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),在关节面中显著表达;②与关节炎模型组和假手术组相比,迷走神经切断组大鼠体质量下降(P<0.05),关节炎评分升高(P<0.05,P<0.01),踝关节肿胀度加重伴畸形,关节间隙消失伴炎细胞浸润,脾脏白髓及生发中心增大融合,血清白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平升高(P<0.05,P<0.01),关节中α7nAChR、ChAT、IκBα、核因子κB p50/p65 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),在关节面中显著表达;③结果提示,迷走神经通过调控胆碱能抗炎通路刺激ChAT/α7nAChR/核因子κB信号途径,进而参与类风湿关节炎的疾病进程,提示胆碱能抗炎通路可能是治疗类风湿关节炎的潜在靶标。

α7胆碱能受体激动剂PNU刺激SD大鼠星形胶质细胞钙调蛋白的表达

目的:探讨α7胆碱能受体(α7nAChRs)激动剂(PNU)对SD大鼠星形胶质细胞钙调蛋白(CaM)表达水平的影响。方法:将培养第3~4代的星形胶质细胞分为对照组、PNU处理组(PNU组)、α7nAChRs阻断剂(MLA)联合PNU处理组(联合组);对照组不加PNU和MLA处理,PNU组以1、5及10μmol/L的PNU处理星形胶质细胞6、12、18及24 h,联合组以0.05、0.1及0.15μmol/L浓度的MLA预先处理星形胶质细胞2 h后,选择加入上调CaM蛋白表达水平最高的PNU浓度和最佳时间(PNU组筛选后所得)处理细胞;运用蛋白印迹(Western blotting)方法检测3组星形胶质细胞CaM的蛋白表达水平。结果 :与对照组比较,1、5及10μmol/L PNU刺激星形胶质细胞6、12、18及24 h可使CaM蛋白表达水平升高(P<0.05);加入5μmol/L PNU培养12 h后,上调作用最明显;联合组(0.05、0.1及0.15μmol/L的MLA预先处理星形胶质细胞2 h后,再加入PNU 5μmol/L培养12 h)与PNU组比较,星形胶质细胞裂解液中CaM蛋白的表达受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PNU激活星形胶质细胞后可提高CaM的蛋白表达水平,MLA可阻断该表达。

TLR7激动剂CL097对实验性自身免疫性葡萄膜炎中Th17细胞活性的促进作用

背景 研究表明,Toll样受体7（TLR7）在自身免疫性疾病中发挥重要作用,但TLR7在实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中是否通过树突状细胞（DCs）调控辅助性T淋巴细胞17（Th17）的作用机制鲜见报道.目的 探讨TLR7激动剂CL097处理的小鼠骨髓树突状细胞（BMDCs）对光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP） 1-20-特异性Th17细胞的影响.方法 采用C57BL/6小鼠股骨和胫骨分离小鼠骨髓细胞,将重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）及重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）加入培养基在体外定向诱导BMDCs,于诱导后第6天在培养基中加入5μg/ml CL097作用8h,对照组加入PBS,采用实时荧光定量PCR技术检测CL097处理组与对照组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β及转化生长因子-β（TGF-β） mRNA的相对表达量.小鼠腹腔内注射百日咳毒素1μg,注射后2h将IRBP1-20与等容积含有结核分枝杆菌HR37RA的完全弗氏佐剂充分乳化后主动免疫C57BL/6小鼠,眼底检查参照Caspi 0 ～4分的标准进行炎症评分.免疫后第13天取眼球制作病理切片,苏木精-伊红染色后行组织病理学检查,并分离小鼠脾脏及淋巴结中IRBP1.20-特异性T细胞,分别与CL097处理组及对照组的BMDCs共培养5d,收集细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测2个组细胞中IL-17、γ干扰素（IFN-γ）、维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）和T细胞中表达的T盒21转录因子（T-bet） mRNA的相对表达量;采用流式细胞仪检测并分析CL097处理组和对照组Th1与Th17细胞比例的变化.结果 EAU模型成功建立.实时荧光定量PCR检测结果显示,CL097处理组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=4.560,P=0.045; t=5.476,P=0.032; t=17.240,P=0.003）,而TGF-β mRNA相对表达量明显低于对照组,差异有统计学意义（t=10.410,P=0.009）.CL097处理组BMDCs与IRBP1-20-特异性T细胞共培养后,RORγt和IL-17 mRNA相对表达量较对照组明显升高,差异均有统计学意义（t=8.844,P=0.012;t=8.831,P=0.013）,而CL097处理组中T-bet、IFN-γmRNA的相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义（t=2.078,P=0.173; t=1.082,P=0.393）.流式细胞仪检测证实,CL097处理组Th17细胞的百分比为（17.750±4.793）％,明显高于对照组的（10.240±3.173）％,差异有统计学意义（t=4.938,P=0.039）,CL097处理组和对照组Th1细胞的百分比分别为（1.123±0.356）％和（1.060±0.384）％,差异无统计学意义（t=2.714,P=0.113）.结论 TLR7激动剂CL097促进BMDCs分泌与Th17细胞极化相关的细胞因子,并促进IRBP1-20-特异性Th17细胞的分化.

Toll样受体7激动剂在肝脏疾病中的研究

Toll样受体7(TLR7)是参与固有免疫的一类重要蛋白分子,也是连接固有免疫与适应性免疫的桥梁。TLR7被激活后可通过不同信号通路对肝脏疾病产生作用。近年TLR7激动剂在肝脏疾病中的研究和应用不断增多。本文就TLR7激动剂在不同肝脏疾病中的研究进展作一综述。

TLR7激动剂作为狂犬病疫苗佐剂免疫效果的研究

为提高狂犬病疫苗对机体的保护效果,本研究将不同浓度的Toll样受体7小分子激动剂(T7)作为佐剂加入到rabies vaccine中记为rabies vaccine+T7,分别将其与小鼠脾淋巴细胞一起培养,检测不同T7浓度对其细胞因子IFN-γ和IL-12的刺激,筛选适合的T7浓度;制备该浓度的rabies vaccine+T7溶液,通过对小鼠细胞免疫能力、中和抗体水平以及保护效果等方面评价T7对rabies vaccine的免疫佐剂效应,并以含铝佐剂的rabies vaccine(rabies vaccine+Al)为对照。结果显示,5.6μmol/L^11.3μmol/L的T7在体外可诱导良好的IFN-γ和IL-12反应;在体内,rabies vaccine+T7免疫小鼠诱生的特异性IFN-γ斑点形成细胞(SFC)数均高于其它组,产生中和抗体水平的速度比rabies vaccine+Al组快,保护效果与rabies vaccine+Al组相当。本研究结果表明T7作为佐剂能在一定程度上提高rabies vaccine的效果,有望开发为新型人用rabies vaccine的佐剂。

星形胶质细胞α7神经型尼古丁受体激动剂Nicotine和PNU对钙调蛋白水平的影响

目的:探讨星形胶质细胞α7神经型尼古丁受体(α7nAChRs)激动剂Nicotine和PNU对钙调蛋白(CaM)表达水平的影响。方法:第3~4代乳鼠大脑星形胶质细胞分为对照组和实验组,对照组不加α7nAChRs激动剂,实验组分别加入α7nAChRs激动剂Nicotine或PNU处理细胞,Nicotine或PNU的浓度为1、5及10μmol/L,处理时间为6、12、18及24 h;采用蛋白印迹(Western blotting)方法检测Nicotine或PNU不同浓度及不同时间点细胞裂解液中的CaM蛋白水平。结果:5μmol/L Nicotine处理6、12、18及24 h和10μmol/L Nicotine处理12、18及24 h的星形胶质细胞裂解液中的CaM蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),其余Nicotine浓度和处理时间点星形胶质细胞裂解液中CaM蛋白表达水平虽略高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);浓度为1、10μmol/L的PNU处理24 h,CaM蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),其他浓度及时间点的CaM蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论 :星形胶质细胞α7 nAChRs的激活可以使CaM的蛋白表达水平增加。

TLR7激动剂替代IFN-γ诱导CIK细胞杀伤肿瘤的研究

目的:探讨TLR7激动剂(Toll like receptor 7 agonist,Tlr7a)替代IFN-γ体外培养细胞因子诱导杀伤性细胞(Cytokine-induced killer cell,CIK)抗肿瘤的免疫效应。方法:分离健康人外周血单个核细胞,在体外诱导CIK。分两组:CIK组和Tlr7a-CIK组。对各组分别进行免疫杀伤性研究,检测细胞免疫表型并分析对K562肿瘤细胞的杀伤活性。结果:CD56+细胞在Tlr7a-CIK组显著增加(P<0.05),Tlr7a-CIK组杀伤活性较CIK组显著增强(P<0.05)。结论:Tlr7a可以替代IFN-γ促进CIK细胞杀伤肿瘤。