蓝氏贾第鞭毛虫α8-贾第素基因克隆、表达与免疫反应性的鉴定

目的对蓝氏贾第鞭毛虫的α8-贾第素(α8-giardin)基因进行克隆和表达,并检测其免疫反应性。方法利用PCR方法获得α8-贾第素基因开放阅读框(ORF)片段,经双酶切将其连入原核表达载体p ET-30a(+),构建重组表达载体p ET30a(+)-α8-giardin。经PCR和酶切鉴定后,将该载体转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),筛选出阳性菌落并诱导其表达。经亲和层析柱纯化后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测重组蛋白。结果自蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA扩增得到约930 bp的α8-贾第素基因片段。经PCR和酶切鉴定表明,重组表达载体p ET30a(+)-α8-giardin构建成功。SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示,α8-贾第素重组蛋白以非可溶性形式存在于包涵体中,相对分子质量(Mr)约为36 000,可被抗His标签抗体和兔抗贾第虫血清识别。结论克隆蓝氏贾第鞭毛虫α8-贾第素基因,纯化的重组α8-贾第素蛋白具有免疫反应性。