αA晶体蛋白基因启动子与HSP70融合基因对大鼠半乳糖性白内障的抑制作用

目的通过观察αA晶体蛋白基因启动子(αACP)与HSP70基因的融合基因表达载体(即pαACP-HSP70)对大鼠半乳糖性白内障的抑制作用,了解外源性HSP70在白内障发生发展中的作用。方法颈背部皮下注射D-半乳糖建立半乳糖性白内障大鼠模型;利用多价阳离子脂质体法包裹表达质粒,球后注射质粒到半乳糖性白内障大鼠眼部。裂隙灯观察大鼠晶状体混浊度的变化。通过荧光显微镜直接观察绿色荧光蛋白基因(EGFP)的表达。结果半乳糖+α-70组、半乳糖+HSP70组和半乳糖+EGFP组均可直接观察到大鼠晶状体上皮细胞中有绿色荧光,且半乳糖+α-70组荧光强度最强,与半乳糖+HSP70组、半乳糖+EGFP组有统计学意义(P<0.05),NS组与半乳糖+NS组未见绿色荧光蛋白表达;半乳糖+α-70组白内障出现的程度与同期的半乳糖+NS组、半乳糖+EGFP组及半乳糖+HSP70组相比明显减轻(P<0.05),并且其所出现白内障的时间亦延迟(P<0.05)。结论 pαACP-HSP70融合基因能在大鼠晶体上皮细胞内表达;外源HSP70可能起到延缓白内障发生和发展的作用。

αA晶体蛋白基因启动子与HSP70融合基因表达载体的构建及鉴定

目的构建αA晶体蛋白基因启动子与HSP70融合基因表达载体pαACP-HSP70。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术,从质粒pIRES2-EGFP-HSP70中扩增HSP70基因,将已构建的含αA晶状体蛋白基因特异性启动子活性片段(αACP)的质粒pαACP-IRES2-EGFP双酶切,回收载体片段,利用基因重组技术,将HSP70基因片段定向插入载体启动子αACP之后,构建特异性表达载体,命名为pαACP-HSP70,并通过PCR、酶切和DNA测序进行鉴定。结果构建的pαACP-HSP70质粒通过酶切图谱鉴定、PCR检测有1924 bp条带出现,通过测序显示所克隆的HSP70基因与基因库中的同种序列比较,核苷酸序列有100%的同源性。结论成功构建了晶状体上皮细胞特异性表达载体pαACP-HSP70。