层黏连蛋白α4链中αvβ3整合素结合肽的精细鉴定与功能分析

目的利用点突变、缺失突变及功能实验确定αvβ3整合素在已鉴定人层黏连蛋白α4链(human laminin alpha4,LNα4)G19肽段中的最小结合位点及关键氨基酸残基。方法采用同源序列比较确定G19肽中的保守氨基酸残基,点突变确定其中的关键氨基酸残基,缺失突变确定αvβ3整合素结合的最小肽段,并通过人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vein endothelial cells,HUVEC)管样结构形成实验及鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验验证鉴定肽的生物学功能。结果同源性比较分析发现,G19肽中共存在10个保守性氨基酸残基位点。点突变分析发现第4位的I、第10位的H及第16位的Y是αvβ3整合素结合的关键位点,缺失突变分析确定G1124-1137肽段(G14肽)是αvβ3整合素结合的最小肽段,合成的G14肽可以浓度依赖性地促进HUVEC管样结构的形成及CAM的血管生成。结论成功鉴定了αvβ3整合素在LNα4中的最小结合位点及关键氨基酸残基。所鉴定的肽段具有促HUVEC成管样结构及促CAM血管生成的生物学功能。

银屑病患者皮损中αVβ3整合素的表达及光化学疗法的影响

目的:了解银屑病患者皮损中αVβ3整合素的表达及光化学疗法对其的影响。方法:用免疫组化法检测正常对照组皮肤和银屑病患者光化学疗法治疗前后皮损中αVβ3整合素的表达。结果:与正常对照组相比,αVβ3整合素在银屑病患者皮损部位的表达明显增加(P<0.01),银屑病患者光化学疗法治疗前皮损αVβ3整合素表达高于治疗后(P<0.05)。结论:αVβ3整合素参与银屑病的血管新生,光化学疗法可能通过抗血管新生作用来治疗银屑病。

银屑病皮肤间充质干细胞可通过αvβ3整合素受体调节内皮细胞功能

目的探究银屑病皮损来源的真皮间充质干细胞(DMSCs)对内皮细胞功能的影响,探讨内皮细胞表面整合素受体αvβ3及其信号通路是否参与其中。方法通过DMSCs与脐静脉内皮细胞(HUVECs)在Transwell小室共培养的方式,检测共培养后HUVECs的增殖、黏附、迁移和体外成血管能力,同时通过实时定量聚合酶链反应(PCR)检测αvβ3和局部黏着斑激酶(FAK)的mRNA表达水平,通过蛋白质印迹法检测αvβ3、FAK和磷酸化FAK的表达水平。结果与健康对照组相比银屑病皮损来源DMSCs促进了HUVECs的增殖、黏附、迁移和体外成血管能力(0.43±0.03与0.59±0.03;190±13与250±15;40±7与105±6;1.32±0.22与4.60±1.00,均P<0.05),也上调了整合素αvβ3和FAK的mRNA及蛋白表达(均P<0.05),而且磷酸化FAK蛋白表达水平也显著升高(P<0.05)。结论银屑病皮损来源DMSCs能够通过分泌可溶性细胞因子改变局部微环境,影响内皮细胞功能,促进血管新生,参与银屑病的发病。在银屑病皮损DMSCs作用下与内皮功能相关整合素αvβ3及其下游FAK表达水平上调,表明银屑病皮损来源DMSCs可通过整合素αvβ3信号通路调节内皮细胞功能。

烟碱对白细胞介素-1β诱导的培养牛脑微血管内皮细胞表达α_vβ_3整合素的增强作用

目的观察烟碱对牛脑微血管内皮细胞（Bovine cerebral microvascular endothelial cells,ＢＣＭＥＣ）表达αvβ3整合素 的影响。方法离体培养新生牛脑微血管内皮细胞；血细胞计数仪测定ＢＣＭＥＣ粘附大鼠血单核细胞（ＭＮ）的数目；应用 ＥＬＩＳＡ法检测ＢＣＭＥＣ对αvβ3整合素的表达量。结果高浓度烟碱（１０－５mol/L)单独作用于ＢＣＭＥＣ２h后，使ＢＣＭＥＣ 对 ＭＮ的粘附率从（１２．９＋０．４）％增至（１５．７＋０．６）％，且 ＢＣＭＥＣ也可表达少量的 αvβ３整合素；而当烟碱与ＢＣＭＥＣ作用２ ｈ后，再经白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）诱导４ｈ，烟碱可浓度依赖性（１０－７～１０－５mol/L）地增强ＩＬ－１β的诱导作用，增加ＢＣＭＥＣ 对ＭＮ的粘附率以及Ｅ－选择素的表达量；抗αvβ3整合素抗体（αβＡＩＡb）能显著阻断ＩＬ－１β诱导ＢＣＭＥＣ后对ＭＮ的粘 附率。结论烟碱具有增强ＩＬ－１β诱导的脑微血管内皮细胞表达αvβ３整合素的作用。

α_vβ_3整合素信号转导与破骨细胞研究进展

αvβ3整合素是破骨细胞膜上一种重要的蛋白,影响破骨细胞的运动及骨吸收能力。αv3β抗体、核因子-κB受体激活剂配体和巨噬细胞集落刺激因子可通过αvβ3整合素调控破骨细胞的分化及功能。αvβ3激活后,与富含脯氨酸的酪氨酸激酶2、酪氨酸蛋白家族(c-Src)形成复合物,诱导信号蛋白Cb1磷酸化使细胞信号得以传递。αvβ3的结构、β亚基重要位点的变异影响其信号的传递。以αvβ3及其信号转导途径为靶点开发的药物,在类风湿性疾病、某些肿瘤和骨质疏松的临床治疗上有一定应用前景。

microSPECT/CT显像定量评价肿瘤^(99m)Tc-3P4-RGD_2摄取及整合素α_Vβ_3表达水平的实验研究

目的:探讨99mTc-HYNIC-PEG4-E[PEG4-c(RGDfk)]2(简称99mTc-3P4-RGD2)microSPECT/CT显像定量肿瘤放射性摄取及整合素αvβ3表达水平的可行性研究。方法:对不同99mTc样品进行microSPECT/CT显像,评价样品体积、活度对放射性计数的影响;对荷脑胶质瘤裸鼠行99mTc-3P4-RGD2microSPECT/CT显像,对比基于CT、SPECT及融合图像测定的肿瘤体积与肿瘤实际体积一致性,并评价肿瘤整合素αvβ3表达水平,由病理证实。结果:99mTc样品microSPECT/CT显像放射性计数与其放射性活度呈直线相关(R2=0.999 7),Bland-Altman一致性分析显示,基于microSPECT/CT测定的肿瘤体积与肿瘤实际体积差异(%)为-2.48±8.17,显著低于microCT(15.04±79.53,t=5.60,P=0.005)和microSPECT(17.04±36.27,t=7.17,P=0.002);microSPECT/CT显像肿瘤99mTc-3P-RGD2摄取与整合素αvβ3表达呈正相关。结论:microSPECT/CT显像可定量99mTc放射性活度和成活肿瘤组织体积,有效评估整合素αvβ3受体表达,为肿瘤整合素受体靶向治疗患者筛选及药物剂量个体化提供影像学数据。

以整合素α_vβ_3为靶点的RGD配体在抗肿瘤血管新生中的应用

整合素αvβ3是一种能特异性识别RGD序列的膜受体蛋白,其与含RGD(Arg-Gly-Asp)模体的蛋白质结合的特异性在肿瘤细胞的粘附、迁移、浸润及肿瘤血管新生中起重要作用.由于整合素αvβ3在多种肿瘤细胞表面高表达而在正常细胞中低表达或不表达,因此其成为肿瘤治疗的理想靶点.肿瘤新生血管为肿瘤的生长提供营养,因此近年来抑制肿瘤血管新生也成为肿瘤治疗的重要途径.有研究显示,几种RGD毒素蛋白不但以整合素αvβ3为靶点靶向结合到肿瘤部位从而具有直接抗肿瘤细胞增殖、黏附、迁移及浸润功能,而且它们还具有抗肿瘤血管新生的作用,因此RGD毒素蛋白可从上述两方面抑制肿瘤生长与转移.本文就整合素αvβ3为靶向的RGD配体结构特点及其在肿瘤治疗中的靶向治疗和抗血管新生应用及前景加以综述.

整合素α_vβ_3放射性配体^(99)Tc^m-TP1326的制备及其正常兔显像研究

目的制备99Tcm-TP1326,鉴定其理化性质,研究其在兔体内的示踪动力学及组织器官分布特点。方法化学合成制备GA(D)GG-Aba-RGD-4CK(TP1326),并以氯化亚锡为还原剂进行99Tcm标记,纸层析法测定标记率;采用体外稳定性实验、血清蛋白结合实验及油/水分配实验鉴定标记物的理化性质;测定标记物经健康大耳兔静脉注射后不同时相血液放射性浓度,利用药代动力学分析软件判断其最佳房室模型,并得出药代动力学参数;经健康兔耳缘静脉注射99Tcm-TP1326,SPECT动态显像,观察主要组织器官的放射性分布变化。结果 99 Tcm-TP1326的标记率为(95.86±0.83)%,比活度为(38.62±0.32)TBq/mmol。室温放置4 h后放化纯度为(91.76±2.75)%;柱层析未见蛋白结合放射峰;油/水分配系数为-(1.76±0.06)。99Tcm-TP1326在健康兔体内动力学符合权重为1/c的二室模型,t1/2α、t1/2β分别为(3.115±0.771)、(76.978±22.460)min。SPECT显像示血池影消退迅速,放射性主要经肾脏清除,肠道、胃区、颈部未见明显放射性浓聚,脑呈低放射性本底。结论 99Tcm-TP1326标记方法简便,标记率高,体内外稳定性好,动力学特性优良,血液清除快,主要通过泌尿系统排泄,是一种具有潜在应用价值的肿瘤αvβ3受体分子显像剂。

整合素α_vβ_3和骨桥蛋白在多囊卵巢综合征患者植入窗期子宫内膜的表达

目的探讨整合素α_vβ_3和骨桥蛋白(OPN)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者植入窗期子宫内膜的表达。方法选取15名典型PCOS患者(其中7例为自主排卵,8例为促排卵)为PCOS组,同期选择15例月经周期规律妇女为对照组。阴道超声监测排卵,排卵日测定子宫内膜分型及厚度;免疫组织化学技术测定植入窗期的子宫内膜整合素α_vβ_3和骨桥蛋白的表达;放射免疫法测定内膜活检当天的血清雌二醇(E_2)和孕酮(P)的浓度。结果与对照组比较,PCOS组植入窗期子宫内膜整合素α_vβ_3和OPN表达均显著下调(P<0.01),两者之间不伴有比例的失调;排卵日子宫内膜厚度两组无显著差异(P>0.05);子宫内膜分型有显著性差异(P<0.05);血清E_2水平显著高于对照组(P<0.01),E_2/P比值亦显著高于对照组(P<0.05),而P显著低于对照组(P<0.01)。结论 PCOS患者植入窗期子宫内膜整合素α_vβ_3和OPN表达均下调,子宫内膜容受性降低,影响了胚泡着床。

α_vβ_3整合素受体靶向性超顺磁性脂质体的建立及体外磁共振观察

目的合成以RGD短肽为亲和成分的靶向性超顺磁性长循环脂质体,并通过体外细胞学实验确定其受体靶向性,探讨其用于肿瘤受体成像的可能性。方法采用薄膜法分别合成表面连接和不连接RGD的靶向性和非靶向性长循环脂质体;以流式细胞分析及共聚焦激光扫描显微镜观察靶向对比剂对HUVEC细胞的特异性标记。结果①合成的超顺磁性脂质体粒径在150nm左右,具有较高的弛豫率;②靶向性对比剂对αvβ3整合素受体具有较高的特异性亲和力;可通过受体介导的内吞作用进入细胞内;③靶向对比剂与细胞结合后,可以明显降低细胞的信号。结论RGD—超顺磁性长循环脂质体具有较高的弛豫率,能与αvβ3整合素受体特异性结合,在靶点特异性浓聚,并能经MR扫描证实。

整合素α_vβ_3和VEGF在前列腺癌的表达及临床意义

目的探讨整合素αvβ3和血管内皮生长因子(VEGF)在前列腺癌(PCa)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)检测整合素αvβ3和VEGF在41例前列腺癌中的表达,20例正常前列腺组织作对照。结果前列腺癌组织中整合素αvβ3和VEGF的表达上调,与正常组织比较差异具有统计学意义(P<0.01)。整合素αvβ3和VEGF的表达均随着PCa的病理分级、临床分期增加其表达上调(P<0.05),与PCa的病理分化程度呈负相关(P<0.01)。在各术前血清PSA值组中,整合素αvβ3及VEGF表达无统计学差异(P>0.05)。整合素αvβ3与VEGF表达呈正相关(rs=0.220),相关有显著性(P<0.05)。结论整合素αvβ3和VEGF可能在前列腺癌的发生、发展及恶性进展过程中起重要作用。将二者结合分析,有助于判断PCa的恶性程度、转移潜能和预后。

靶向整合素α_vβ_3受体的新型RGDyC-PEG-PAMAM纳米探针的设计制备、^(131)I标记及其质量控制

本研究以具有优良生物学性能的聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM)为纳米载体,将具有肿瘤靶向性的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)与纳米载体相连,并通过放射性核素^(131)I进行标记,对标记物的体内外药效学性质进行评价,探讨将其应用于肿瘤特异显像和靶向治疗的可能性。从多肽化学修饰法角度设计精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-酪氨酸-半胱氨酸(RGDyC),利用点击化学法引入双功能基团PEG(NHS-PEG-MAL),采用"一锅两步"法制备RGDyC-PEG-PAMAM纳米复合物,通过核磁共振和紫外光谱进行表征确定产物,并检测纳米粒径分布和电位,用透射电镜(TEM)观察其形态大小及分布;进一步采用氯胺T法进行^(131)I标记,并测定标记率、标记物的稳定性及脂水分配系数。所设计的RGDyC-PEG-PAMAM纳米复合物制备产率为62.09%,^(131)I对其标记率为94.68%~98.87%,标记物在体外72h后放化纯大于80%,脂水分配系数lg P(正辛醇/水)为-1.59±0.09。所设计的RGDyC-PEG-PAMAM可采用氯胺T法成功完成^(131)I标记,制备与标记过程高效、简捷,标记物^(131)I-RGDyC-PEG-PAMAM具有良好稳定性和较高亲水性,成药性良好,为后期进一步考察体外肿瘤细胞摄取与生长抑制、评估人癌裸鼠异种移植瘤模型治疗及肿瘤显像等体内外药效学研究奠定了基础,^(131)I-RGDyC-PEG-PAMAM有可能作为一个新型SPECT探针应用于肿瘤特异显像与靶向治疗。

输卵管性和内异症性不孕患者黄体中期子宫内膜整合素α_vβ_3表达的差异

目的探讨输卵管性和内异症性不孕患者黄体中期子宫内膜整合素αvβ3表达的差异。方法收集行手术治疗的9例内异症性不孕患者和进行IVF/ICSI-ET的20例输卵管阻塞患者黄体中期子宫内膜,应用免疫组化方法检测整合素αvβ3的表达。结果子宫内膜腔上皮细胞中整合素αvβ3表达H-score平均分内异症组较输卵管组低,差异有显著性(P<0.05),而两组间腺上皮细胞中整合素αvβ3表达H-score平均分比较差异无显著性(P>0.05)。结论内异症不孕患者和输卵管阻塞不孕患者黄体中期子宫内膜整合素αvβ3表达的差异,可能提示内异症对子宫内膜容受性存在不利影响。

慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素α_vβ_3表达及与甾体激素关系的研究

【目的】研究慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素αvβ3的表达,并分析其体内甾体激素与整合素αvβ3表达的相关性。【方法】选取25例慢性盆腔炎性不孕症患者,同时选择15例具有正常生育能力的育龄妇女,分别设为实验组和对照组,采用流式细胞荧光标记测量技术对子宫内膜中整合素αvβ3的表达进行定量检测。在同期内取血清检测实验组及对照组体内雌孕激素水平,分析甾体激素与子宫内膜整合素αvβ3表达在植入窗口期(种植期)的相关性。【结果】(1)两组黄体中期血清雌二醇(E2)水平及雌二醇/孕酮(E2/P)比值比较均无显著性差异(P>0.05),而血清P水平比较有显著性差异(P<0.05)。(2)两组黄体中期(分泌中期)子宫内膜整合素αvβ3表达比较差异有显著性意义(P<0.05)。(3)雌激素与子宫内膜整合素αvβ3无相关性,而孕激素与整合素αvβ3显示正相关性,孕激素的表达水平越高,整合素αvβ3表达水平相应也越高。【结论】整合素αvβ3在正常育龄妇女子宫内膜种植窗期的表达高于慢性盆腔炎性不孕患者;整合素的表达水平与卵巢分泌的甾体激素孕激素的表达呈一致性,孕激素影响着整合素αvβ3表达的水平。

靶向整合素α_Vβ_3的分子影像探针

整合素αVβ3作为整合素家族中的重要成员,介导了细胞和细胞外基质、细胞和细胞之间的相互黏附,具有调控细胞增殖、分化、细胞形态和迁移等多种功能,在肿瘤血管生成的过程中发挥重要的作用。作为靶向肿瘤的受体,利用核素、核磁共振、超声波和光学等影像技术,结合靶向整合素αVβ3分子成像探针非侵入性的检测整合素αVβ3在肿瘤组织和肿瘤新生血管中的表达,具有潜在的临床应用价值,可用于临床肿瘤诊断和抗肿瘤药物的临床治疗后观察。本文主要针对现有靶向整合素αVβ3的分子探针及其影像技术作一简要综述。

整合素α_vβ_3对MDA-MB-231BO乳腺癌细胞AKT信号通路的调控

旨在探究整合素αvβ3的单克隆抗体LM609在BSP不同表达水平的乳腺癌细胞中对AKT(蛋白激酶B)信号通路的影响。利用免疫细胞化学法检测BSP不同表达水平的乳腺癌细胞中整合素αvβ3的表达量。BSP基因沉默乳腺癌MDA-MB-231BO细胞,Western blotting在蛋白水平检测磷酸化AKT的表达,MTT试验和细胞划痕试验分别检测细胞增殖、迁移能力的变化。结果显示,与231BO-Scrambled细胞相比,231BO-BSP27细胞中BSP蛋白水平明显降低,抑制率达到(59.43±1.71)%;LM609分别处理两株细胞后,与对照组231BO-Scrambled细胞相比,BSP基因沉默组21BO-BSP27细胞中AKT磷酸化水平下调明显,为(33.78±1.51)%(P<0.01);231BO-BSP27细胞和对照组231BO-Scrambled中细胞的增殖和迁移能力均有不同程度的下降(P<0.05)。LM609能够抑制胞内整合素αvβ3功能的表达,进而对AKT信号通路进行调控,并影响细胞增殖和迁移的发生。

骨唾液酸蛋白通过整合素α_vβ_3调控ILK信号通路

旨在探究骨唾液酸蛋白(BSP)是否通过整合素αvβ3对整合素连接激酶(ILK)信号通路进行调控。BSP基因沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞,流式细胞仪在细胞水平检测BSP不同水平的细胞株中整合素αvβ3的表达量。Western blotting检测磷酸化ILK水平的变化,MTT法检测细胞增殖能力。与对照组231BO-Scrambled细胞相比,BSP基因沉默组231BO-BSP27细胞中整合素αvβ3的表达水平明显下调(61.32±1.94)%(P<0.01)。整合素αvβ3鼠抗单克隆抗体(LM609)处理前的BSP基因沉默组231BO-BSP27细胞与21BO-Scrambled细胞相比,ILK磷酸化水平下调明显(39.38±1.38)%(P<0.01);LM609处理后的231BO-BSP27细胞与21BO-Scrambled细胞相比,ILK磷酸化水平下调明显(33.78±1.51)%(P<0.01)。向乳腺癌细胞231BO-scrambled和231BO-BSP27中添加LM609,MTT试验结果显示两株乳腺癌细胞的增殖能力均有降低(P<0.05)。BSP通过整合素αvβ3对乳腺癌MDA-MB-231细胞ILK信号通路进行调控,并影响细胞增殖。

整合素α_vβ_3在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨整合素vα3β在乳腺癌中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学法(S-P法)检测整合素vα3β在62例乳腺癌中的表达。结果:研究发现在乳腺癌组织中整合素vα3β表达上调,随着肿瘤的增大其表达明显上调,差异有显著性(P<0.01)。结论:整合素vα3β在乳腺癌的发生、发展及恶性进展过程中起重要作用。

人骨肉瘤中肾上腺髓质素和整合素α_vβ_3的表达及相关性研究

目的研究肾上腺髓质素(ADM)和整合素αvβ3在人骨肉瘤组织的不同临床分期、病理分级及组织学分型中的表达情况,并探讨二者之间的关系。方法应用免疫组化SABC法和图像分析技术的方法检测30例骨肉瘤组织中ADM和整合素αvβ3表达的阳性率、强度和平均光密度(ALD)。每张切片分别由两名病理医师在未知临床和病理资料的情况下独立观察切片,随机观察(至少5个具有代表性的高倍视野,计数100个细胞)判定肿瘤分期、分级及细胞染色程度。结果 ADM与整合素αvβ3表达的阳性率和表达强弱均随着骨肉瘤分期增加而上调(P<0.05),并在各期之间的差异有统计学意义(P<0.05)。ADM与整合素αvβ3的表达水平呈正相关。结论 ADM和整合素αvβ3在骨肉瘤中的表达强弱与骨肉瘤的恶性程度密切相关,且二者的表达变化呈正相关。

整合素α_v、β_3与多囊卵巢综合征的关系初探

文章介绍了整合素的结构及生理作用以及整合素αv、β3的研究概况,探讨了整合素αv、β3与多囊卵巢综合征(PCOS)发病之间的关系,研究表明,它影响子宫内膜容受性,进而影响孕卵着床,导致PC0S患者有孕发生。整合素αv、β3的存在标志着子宫内膜对胚胎的良好接受性。