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牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备
被引量:
2
1
作者
独军政
常惠芸
+7 位作者
高闪电
王光华
王景锋
丛国正
邵军军
林彤
才学鹏
谢庆阁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期975-977,共3页
目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,...
目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,与同样酶切处理的原核表达载体pPRoEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRo/αvLBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达αvLBD蛋白。通过SDS-PAGE鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。通过ELISA和Western blot鉴定血清效价和特异性。结果:成功构建了pPRo/αvLBD原核表达载体,实现了重组αvLBD蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其Mr约为40000,主要以包涵体形式存在于菌体中。制备的兔多克隆抗体效价达1∶25600以上。以Western blot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。结论:实现了牛口蹄疫病毒受体通用亚基αvLBD的高效表达和高效价多克隆抗体的制备,为深入研究整联蛋白αv在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础。
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关键词
牛
口蹄疫病毒受体
αv配体结合域
原核表达
多克隆抗体
下载PDF
职称材料
题名
牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备
被引量:
2
1
作者
独军政
常惠芸
高闪电
王光华
王景锋
丛国正
邵军军
林彤
才学鹏
谢庆阁
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期975-977,共3页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA10A204)
国家支撑计划资助项目(2006BAD06A10)
文摘
目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,与同样酶切处理的原核表达载体pPRoEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRo/αvLBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达αvLBD蛋白。通过SDS-PAGE鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。通过ELISA和Western blot鉴定血清效价和特异性。结果:成功构建了pPRo/αvLBD原核表达载体,实现了重组αvLBD蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其Mr约为40000,主要以包涵体形式存在于菌体中。制备的兔多克隆抗体效价达1∶25600以上。以Western blot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。结论:实现了牛口蹄疫病毒受体通用亚基αvLBD的高效表达和高效价多克隆抗体的制备,为深入研究整联蛋白αv在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础。
关键词
牛
口蹄疫病毒受体
αv配体结合域
原核表达
多克隆抗体
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备
独军政
常惠芸
高闪电
王光华
王景锋
丛国正
邵军军
林彤
才学鹏
谢庆阁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
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职称材料
已选择
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