酪蛋白酶解产生β-Casomorphin-7样物质的ELISA检测

用酶联免疫吸附分析法(ELISA) 对酪蛋白经胃蛋白酶作用 30,60,90,120和 150 min的酶解消化液中β-Casomorphin－7样物质的含量进行了测定。结果分别为29．5±4．08,47．6±4．17,75．4±4．57,118±7．12和(99．2±5．69)ug/L;平均回收率为97．9%。ELISA方法检测结果表明,酪蛋白2h酶解消化液中β－Casomorphin－7样物质含量最高。

β-Casomorphin-7的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立

β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7)是一个有代表性的乳源外啡肽,有调节动物消化道运动和采食、内分泌、免疫等多种生物学功能。本研究以β-Casomorphin-7与人血清白蛋白(HSA)经戊二醛交联的复合物作为包被抗原;一抗为鸡抗β-Casomorphin-7与牛血清白蛋白(BSA)交联复合物的抗血清;酶标二抗为兔抗鸡IgG经戊二醛与辣根过氧化物酶(HRP)交联的复合物。包被抗原和一抗的稀释度经方阵稀释实验确定。本实验所建立的竞争ELISA方法的孔间差异为3.3%,板间差异为8.6%,检测灵敏度20ng/ml,检测范围20～320ng/ml,在实验浓度范围内。β-Casomor-phin-7的抗血清与β-内啡肽、脑啡肽、强啡肽、精氨酸降压素和神经降压素等活性肽未显示免疫交叉反应。表明所建立的方法有较高的特异性,可用于酪啡肽的体内功能研究。

β-casomorphin-7对小鼠的免疫调节作用(英文)

目的:通过体外和体内方法研究β-casomorphin-7对小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的作用.方法:利用脾细胞增殖试验和腹腔巨噬细胞中NO浓度的变化来研究体外不同的β-casomorphin-7浓度对脾脏淋巴细胞的增殖和腹腔巨噬细胞中NO浓度变化的影响,以及腹腔注射β-casomorphin-7和饮用β-casomorphin-7溶液对上述两个指标的影响.结果:体外试验表明,β-casomorphin-7在不同浓度对脾脏淋巴细胞的增殖显示了刺激和抑制的双向作用,而对NO的产生显示了明显的抑制作用(P＜0.01).体内试验表明,β-casomorphin-7通过腹腔注射和饮用两种给药方式对脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的作用是一致的.β-casomorphin-7显著地增强了脾淋巴细胞的增殖反应(P＜0.01),且抑制了腹腔巨噬细胞NO的产生.结论:当前的试验表明,β-casomorphin-7具有免疫调节作用,且小鼠在2～3周龄时,可吸收入血发挥免疫调节作用.

大鼠胃肠道食糜中β-Casomorphin-7样物质的酶联免疫吸附分析

利用建立的一种酶联免疫吸附试验 (ELISA)对大鼠胃肠道食糜中的 β 酪啡呔 7(β Casomorphin 7)样物质进行了检测分析。动物试验采用30只成年大鼠 ,随机分为 5组。对照组Ⅰ ,仅喂葡萄糖盐水 ;对照组Ⅱ ,喂大豆和饮水 ;试验组Ⅰ ,仅喂牛奶 ;试验组Ⅱ ,喂不含乳的普通饲料和饮水 ;试验组Ⅲ ,喂混有乳的普通饲料和牛奶。各组均自由采食 ,4d后处死。采集胃和十二指肠食糜 ,对其中 β Casomorphin 7样物质进行定量分析。结果 :在试验组Ⅰ和Ⅲ大鼠的胃、十二指肠食糜中检测到显著量的 β Casomorphin 7样物质 ,平均含量分别为 (1 60 52± 1 0 1 9) ,(1 0 6± 6 85)ng/g和 (2 2 0 48± 1 1 91 ) ,(1 4 2 84±7 72 )ng/g。试验组Ⅱ大鼠的胃和十二指肠食糜中也检测到 β Casomorphin 7样物质 。

牛奶β-酪蛋白水解产物生物活性及A2乳制品的研究进展

乳制品中酪蛋白是许多生物活性肽的重要来源。牛奶的β酪蛋白按基因型可分为13种,最常见的类型是A1和A2酪蛋白,二者的蛋白质一级结构几乎完全相同,唯一的区别是67位上的氨基酸有所不同,导致A1酪蛋白被水解生成“β-酪啡肽-7”的多肽(β-casomorphin-7,BCM-7)和相关的短BCM(BCM-5、BCM-4和BCM-3),而A2酪蛋白水解不会产生此类多肽物质。基于对上述2种主要β-酪蛋白的研究以及其可能会对人体健康产生的影响,该文从生物机理和分子机制角度阐述了A2牛奶在敏感人群中更容易消化的最新研究成果,最后对A2酪蛋白的研究和相关乳制品商业化前景进行了展望。

β-酪啡肽-7对大鼠生长、相关激素及生长素受体mRNA表达的影响

目的: 探讨β-酪啡肽-7(β-CM-7)对大鼠生长、生长相关激素和生长因子以及生长素受体(GHR)mRNA表达的影响。方法: 将30只生长期雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组,分别被灌饲生理盐水和β-CM-7,并记录大鼠日采食量。饲养1个月后检测大鼠的增重情况,应用放射免疫法测定血清中生长相关激素和生长因子的含量,用相对定量RT-PCR法研究两组大鼠肝脏GHR mRNA表达水平的差异。结果: 实验组大鼠与对照组比,增重有提高的趋势,增重率提高8.67%。实验组大鼠的日采食量增加了13.08%(P<0.05)。与对照组相比,实验组大鼠血清中生长激素(GH)和胰岛素显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),三碘甲腺原氨酸(T3)和胰岛素样生长因子-I(IGF-I)有升高趋势,而甲状腺素(T4)有下降趋势。实验组大鼠肝脏的GHR mRNA表达水平显著提高(P<0.05),增加了19.83%。结论: β-CM-7能促进生长期大鼠的生长,增加采食量,影响生长相关激素和生长因子的分泌,并且上调肝脏GHR mRNA表达水平,从而增加生长激素的敏感性。

β-酪啡肽_7对早期断乳仔猪免疫器官及内分泌功能的影响

将 12头体重相近的三元杂交仔公猪分为两组 :对照组正常吃母乳到 2 8日龄断乳 ;实验组于 2 1日龄断乳后添喂β 酪啡肽7( β CM7) ,进行饲喂实验至 32日龄。结果表明 ,添喂 β CM7的仔猪 ,血清胃泌素水平比对照高 31 76 %(P <0 0 1) ,瘦素水平比对照组高 7 0 % (P <0 0 1) ,皮质醇低于对照组 2 6 19% (P >0 0 5 ) ,IL 2、T3 、T4和胰岛素水平均与对照组的接近。与对照组相比 ,胸腺、腹股沟淋巴结、脾脏的相对重分别增加 31 4 8% ,2 8 2 6 %和 2 7% ,差异均不显著 ;胸腺形态结构未见差别 ,脾脏的中央动脉周围淋巴鞘面积略小 ,回肠派伊尔氏结的总数增多 ,且总面积增加 8 1% 。

酪啡肽对仔猪离体胃窦粘膜分泌胃泌素的影响

以表面灌流系统探讨了 β 酪啡肽7(β CM7)对仔猪胃窦粘膜分泌胃泌素的影响。实验结果表明 ,β CM7能显著促进胃窦粘膜分泌胃泌素 (2 9 3% ,P <0 0 1 ) ,且此效应不可被纳络酮 (Nal)逆转 (P <0 0 1 )。酪蛋白的胃蛋白酶水解液也能促进胃窦粘膜分泌胃泌素 (46 6 % ,P <0 0 5 ) ,Nal亦不可逆转 (P <0 0 5 )此效应。

β-酪啡肽对鼠血浆胃泌素水平的影响

采用放射免疫法测定胃饲和腹腔注射 β 酪啡肽 (β CM)对新生大鼠和小鼠血清胃泌素水平的影响。实验分两系列。试验Ⅰ :新生大鼠分为 4组 ,每组 10只。禁乳 8h后 ,组Ⅰ胃饲生理盐水 ,每只 0 5mL ,组Ⅱ胃饲等量 β CM7(10 -5mol·L-1) ;组Ⅲ腹腔注射生理盐水 ,每只 0 2mL ,组Ⅳ注射等量 β CM7(10 -6mol·L-1)。结果 :组Ⅱ与组Ⅰ相比 ,胃泌素水平上升 30 0 2 % (P<0 0 5 ) ;组Ⅳ的胃泌素水平显著下降 ,是组Ⅲ的 72 0 %。试验Ⅱ :小鼠分为 6组 ,每组 10只。禁食 12h后 ,分别胃饲生理盐水 (组 1) ,β CM7(组 2 ) ,β CM3 (组 3) ,谷胱甘肽 (组 4 ) ,大豆粉饼及生理盐水(组 5 ) ,大豆粉饼及 β CM7(组 6 )。浓度均为 10 -5mol·L-1,饲胃量每只 0 5mL。结果 :组 2与组 1相比 ,胃泌素水平上升 17 4 4 % (P =0 0 89) ,组 4较组 1胃泌素升高 33 6 3% (P <0 0 0 5 ) ;组 5与组 6、组 3与组 1间均无显著差异 (P >0 1) ;而组 5胃泌素水平仅为组 1的 87 0 4 % (P <0 0 5 ) ,组 6为组 2的 73 6 3% (P <0 0 0 5 )。实验表明 ,β CM7在消化道腔面有促进胃泌素分泌的效应 。

β-酪啡肽对公山羊血清FSH、LH和T水平的影响

给公山羊瘤胃灌注β-酪啡肽 (β-CM) ,在灌注前后采取外周血样 ,用放射免疫分析法测定血清促卵泡素 ( FSH)、促黄体生成素 ( LH)和睾酮 ( T)水平 ,旨在研究β-酪啡肽对公山羊生殖内分泌的影响。结果表明 ,瘤胃灌注β-CM后 ,公山羊血清 LH和 T水平明显降低 ( P <0 .0 1或 P <0 .0 5) ,且此效应可被阿片受体拮抗剂纳络酮 ( naloxon)逆转 ,而β-CM灌注 ,对公山羊血清 FSH水平未见明显影响 ( P >0 .0 5)

饲喂β-酪啡肽对大鼠免疫功能影响的研究

β 酪啡肽 (β Casomorphinβ CM)是 β 酪蛋白经过酶解所释放的一类小肽 ,具有类似阿片肽的功能。试验通过饲喂 2种 β 酪啡肽 (β Casomor phin 7,β CM 7) ,和β Casomorphin 3 (β CM 3)来探索其对动物机体免疫活性的影响 ,并以谷胱甘肽 (GSH)作为肽参照组。试验选用SD雄性健康成年大鼠 ,分 3个肽组 (β Casomorphin 7,β Casomorphin 3,GSH)和 1个未给药对照组 ,每组 1 0只。 3种肽均以 1 2× 1 0 - 6 mol/L的浓度添加于饮水中 ,饲喂 3周后 ,分别进行试验检测。淋巴细胞转化试验 (LTT) (n =6)结果表明 :平均刺激指数 (SI)对照组为 1 99;β CM 7组为 2 56 ;β CM 3组为 3 2 3;GSH组为 2 46。3个肽组相对对照组SI有提高趋势 ,其中 β CM 3组相对对照组差异接近显著 (P =0 0 8)。红细胞免疫试验 (EIT ,n=6)测出各组红细胞C3b受体花环率各为 :对照组 4 9% ,β CM 7组 1 6 7% ,β CM 3组 1 5 9% ,GSH组 1 4 7%。 3个肽组相对于对照组均极显著升高 (P <0 0 1 )。腹腔巨噬细胞吞噬活性试验 (MTT ,n =6)测出各组平均OD570 分别为 :对照组 0 2 1 ;β CM 7组 0 2 2 ;β CM 3组 0 2 2 ;GSH组0 3。GSH组相对对照组差异显著 (P <0 0 5)。试验结果表明 β

β-酪啡肽-7对大鼠血糖及脂质过氧化的影响

目的:观察β-酪啡肽-7(β-casomorphin-7,β-CM-7)对糖尿病大鼠的降血糖作用并初步阐明其作用机制。方法:2月龄SD雄性大鼠40只,用链脲佐菌素(STZ)致大鼠糖尿病,造模成功后将大鼠分为4个组:空白对照组、糖尿病对照组、胰岛素治疗组(优泌林3.7×10-8mol/(只.d))、实验组(β-CM-7 7.5×10-8mol/(只.d))。实验周期30d。测定血清中血糖含量、脂质过氧化物丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、胰岛素和胰高血糖素的含量以及腿肌糖原、肝脏糖原的含量。结果:β-CM-7组与胰岛素治疗组大鼠血糖明显下降;同时血清中MDA水平降低,SOD活性升高,与糖尿病对照组相比,具有显著性差异(P<0.05);β-CM-7组胰岛素含量较糖尿病组有所增加,肌糖原含量较空白组显著升高(P<0.05)。结论:β-CM-7具有减轻链脲佐菌素性糖尿病大鼠氧自由基损伤、促进胰岛素分泌、加速肌糖原的合成、降低血糖的作用。

乳源β-酪啡肽7对大鼠葡萄糖吸收的影响及其作用机制

目的:探讨乳源活性肽β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7,β-CM7)应用于食品时对葡萄糖吸收的影响及其作用机制.方法:选用健康成年SD大鼠,分为对照组(0mol/Lβ-CM7),L低剂量组、M中剂量组、H高剂量组(终浓度分别为7.5×10-7,7.5×10-6,7.5×10-5mol/L).利用翻转离体小肠囊模型进行实验:(1)葡萄糖氧化酶法测定翻转后小肠内液葡萄糖含量;(2)比色法测定小肠黏膜Na+-K+-ATP酶活力;(3)荧光定量PCR法分析小肠黏膜组织中钠葡萄糖共转运载体(SGLT-1)和葡萄糖协助扩散转运载体(GLUT-2) mRNA的表达.结果:在离体环境下β-CM7在7.5×10-7-7.5×10-5mol/L浓度下对葡萄糖的吸收均有一定的抑制作用(1.09mol/L,1.24mol/L,1.12mol/L vs 1.74mol/L,P=0.01,0.04,0.02),能够降低Na+-K+-ATP酶活力(85.73,112.06,109.68 vs 114.93,P=0.004,0.73,0.54);荧光定量PCR结果发现:与对照组相比,β-CM7能够显著降低SGLT-1及GLUT-2 mRNA水平(0.46,0.58,0.77 vs 1.11,P=0.20,0.05,0.02;0.50,0.66,0.85 vs 1.14,P=0.30,0.14,0.03).结论:β-CM7可以通过降低Na+-K+-ATP酶活力及下调SGLT-1、GLUT-2 mRNA水平,减少大鼠小肠对葡萄糖的吸收.

β-酪啡肽-7保护链脲佐菌素引起的大鼠肾损伤

研究β-酪啡肽-7(β-casomorphin-7,β-CM-7)对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾损伤的保护作用.结果显示:(1)β-酪啡肽-7降低糖尿病大鼠的采食量、饮水量和空腹血糖值,提高糖尿病大鼠的体重,但是差异不显著(P>0.05).(2)β-酪啡肽-7显著降低糖尿病大鼠尿糖、尿蛋白、血清肌酐、血清尿素氮、肾脏指数和血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;Masson染色结果显示,β-酪啡肽-7治疗显著降低糖尿病大鼠肾脏的纤维化程度.(3)RT-RCR结果显示,β-酪啡肽-7显著降低糖尿病大鼠肾脏TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白基因的表达.Western印迹显示,β-酪啡肽-7显著降低糖尿病大鼠肾脏Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达.上述结果表明,β-酪啡肽-7能够减缓糖尿病大鼠肾脏功能和肾脏纤维化程度,其机制可能与降低TGF-β1含量、减少胶原蛋白在肾脏的沉积有关.

β-酪啡肽的生理功能及其研究进展

酪蛋白是乳中最重要的成分。酪蛋白是乳源活性肽的重要来源,乳源生物活性肽是酪蛋白在消化酶作用下释放的,能被机体直接吸收,具有多种生物学功能。其中β酪啡肽(βcasomorphin,βCM)是最重要的乳源生物活性肽之一。该文就β酪啡肽的生理功能及其作用进行综述,并介绍了国内外β酪啡肽研究的情况及最新进展。

β-酪啡肽对仔猪垂体前叶细胞、淋巴细胞增殖的影响

β-酪啡肽7是 β-酪蛋白在消化道中的不完全酶解产物 ,它可被新生动物吸收入血 ,影响机体的内分泌与免疫系统的功能 ,本实验表明 :0 .2 μmol/Lβ-酪啡肽 7可显著促进 5日龄的仔猪垂体前叶细胞增殖 (上升 60 .49% ,P<0 .0 5、n=5 ) ,对于 1日龄、2 8日龄仔猪垂体前叶细胞增殖无显著影响 (n=3 )。 0 .1 μmol/L的 β-酪啡肽7能显著促进 1日龄仔猪外周血淋巴细胞的增殖 (升高 42 .3 8% ,P<0 .0 1、n=3 )。1 μmol/L的 β-酪啡肽7能显著促进 5日龄仔猪外周血淋巴细胞的自然增殖 (升高 2 2 .84% ,P<0 .0 1、n=3 ) ,1 0μmol/L的β-酪啡肽 7能显著促进 5日龄仔猪淋巴细胞的增殖 (升高 2 7.0 2 % ,P<0 .0 5、n=3 )。β-酪啡肽7对 2 8日龄仔猪淋巴细胞增殖无显著性影响 (n=3 )

β-酪啡肽-7的多克隆抗体的制备

β-酪啡肽-7 经戊二醛与牛血清白蛋白(BSA)交联后的复合物免疫伊莎蛋鸡5只。6个月后，对鸡血清、所产蛋的卵黄和卵黄氯仿抽提上清液进行琼扩效价分析。结果表明，血清抗体的最高效价达到1∶8，后两者的效价为1∶4。

酪蛋白酶解产物β-酪啡肽-7的HPLC分析和阿片活性鉴定

利用建立的高效液相色谱(HPLC)定量分析法,在酪蛋白2 h酶解液中检测到134.27μg.mL-1的β-酪啡肽-7(β-CM-7);其酶解消化液经葡聚糖凝胶柱层析收集物3、4组中也检测到β-CM-7,含量分别为44.79和18.90μg.mL-1;而1和2组中未检测到。细胞生物学鉴定结果表明:酪蛋白酶解液、柱层析收集的3、4组均能抑制富含δ-阿片受体的神经杂交瘤细胞腺苷酸环化酶活性,降低细胞内cAM P水平,纳洛酮可逆转这种抑制作用,证明有阿片活性。1、2组和酪蛋白本身无阿片作用。HPLC测定结果与细胞生物学鉴定结果相符,证明所建立的HPLC方法可用于酪啡肽的定量分析。

乳源β-酪啡肽-7对自然衰老小鼠的抗衰老作用研究

探讨了乳源β-酪啡肽-7对自然衰老小鼠的抗衰老作用及其可能机制。选取10只2月龄C57小鼠作为青年对照组;40只16-18月龄C57小鼠随机分为自然衰老模型组β-酪啡肽-7处理组,其中β-酪啡肽-7处理组小鼠在饲喂与模型组相同日粮的基础上,每天灌胃高、中、低3种剂量的β-酪啡肽-7溶液。连续喂养60d后,眼眶采血吸取上清;采血后颈椎脱臼处死,取心脏、肝脏、肾脏、大脑等组织并称重,测定各组小鼠脏器系数以及血清和脏器匀浆液中SOD、MDA、MAO及GSH-Px含量。结果显示:(1)β-酪啡肽-7组对改善自然衰老小鼠脏器指数有促进作用;(2)β-酪啡肽-7能够提高自然衰老小鼠的SOD、GSH-Px活性,降低MDA、MAO在体内的堆积。结果表明添加乳源-酪啡肽-7可以有效改善自然衰老小鼠的脏器指数,缓解自然衰老小鼠的氧化应激反应,且随着灌胃β-酪啡肽-7剂量的增加,延缓衰老效果越显著。

β-酪啡肽对去势公山羊生殖内分泌的影响

给去势公山羊瘤胃灌注β-酪啡肽(β-CM),在灌注前后采取外周血样,用放射免疫分析法测定血清促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH),旨在研究β-酪啡肽对去势公山羊生殖内分泌的影响。结果表明,瘤胃灌注β-CM后,公山羊血清LH水平明显降低(P<0.01),且此效应可被阿片受体拮抗剂纳络酮(naloxone)逆转,而β-CM灌注,对公山羊血清FSH水平未见明显影响(P>0.05)。