BAPN诱导小鼠胸主动脉夹层合并急性肺损伤模型的建立

目的采用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile monofumarate,BAPN)1 g/(kg·d)饮水给药的方式,构建一种可行性高、稳定的胸主动脉夹层(thoracic aortic dissection,TAD)合并急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的小鼠模型,为研究TAD合并ALI提供合理的动物模型。方法选取45只SPF级3周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机分为CON组15只(正常饮食水)和BAPN组30只(与无菌水配置成1 g/(kg·d)的溶液饮水给药),持续4周。实验期间,观察两组小鼠一般情况、成模率,通过测量小鼠胸主动脉最大直径和主动脉组织苏木素-伊红(HE)染色,验证小鼠TAD模型并将BAPN组分为TAD组和Non-TAD组。进一步检测CON组、Non-TAD组和TAD组小鼠肺组织HE病理染色、湿干重比(dry/wet weight ratio,W/D)及肺泡灌洗液(broncho alveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白水平和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达情况验证小鼠TAD合并ALI模型。结果BAPN干预明显延缓小鼠体重和饮水量的增加。与CON组和Non-TAD组相比,TAD组小鼠胸主动脉最大直径明显增粗(P<0.05);主动脉HE染色显示主动脉中层明显增厚,主动脉壁结构破坏、紊乱;肺组织HE染色显示肺间质明显水肿及炎性渗出,伴肺泡腔扩大,肺泡壁上皮脱落及透明膜形成,肺损伤病理评分显著增加(P<0.05);肺组织W/D、BALF中总蛋白水平及IL-1β、IL-6、TNF-α表达也明显升高(P<0.05),而另外两组上述指标无明显差异。结论通过BAPN饮水给药的方式,可成功建立胸主动脉夹层合并急性肺损伤的小鼠模型。

β-氨基丙腈联合血管紧张素Ⅱ构建胸主动脉瘤小鼠模型的研究

目的 探讨通过β-氨基丙腈(beta-aminopropionitrile,BAPN)饮水联合Alzet微孔渗透泵皮下连续释放血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)构建胸主动脉瘤小鼠动物模型的方法。方法 60只3周龄雄性C57BL/6小鼠随机平均分为对照组(20只)、实验A组(20只)及实验B组(20只)。对照组、实验A组和实验B组分别采用普通饮水、0.5 g·kg^(-1)·d^(-1)BAPN饮水和1 g·kg^(-1)·d^(-1)BAPN饮水联合微孔渗透泵(Alzet)皮下连续释放Ang Ⅱ(1μg·kg-1·min-1)。监测各组小鼠饮水量及体质量。分别于第30天和第3天采用超声心动图测量小鼠胸主动脉血管内径并计算直径差,取胸主动脉血管组织行病理学检测,评估胸主动脉瘤小鼠动物模型的构建情况。结果 在建模过程中,实验B组中小鼠体质量增长缓慢甚至不增长;实验B组小鼠胸主动脉血管内径差值(d)为(0.519±0.054)mm,相比于对照组(0.135±0.021)mm和实验A组(0.201±0.043)mm,差异有统计学意义(P<0.05);实验A组和实验B组成瘤率分别为5%和40%。结论 本研究成功构建了胸主动脉瘤小鼠动物模型,操作简便、成本低及成功率高,为胸主动脉瘤机制及诊疗靶点的研究奠定了基础。

GDF11通过减轻炎症反应缓解主动脉瘤形成

目的探讨生长分化因子(GDF11)缓解主动脉瘤形成的保护作用及其对炎症反应的影响。方法雄性3周龄C57BL/6小鼠60只,体质量10~13 g,随机分成3组:正常对照组20只、动脉瘤组20只、动脉瘤与GDF11共处理组20只。利用β氨基丙腈(BAPN)饮水法构建小鼠动脉瘤模型,剂量为1 g·kg^(-1)·d^(-1),4周后检测主动脉血管直径,GDF11、MMP9蛋白表达和炎症因子表达水平。结果给予BAPN喂养后,小鼠主动脉血管直径扩大,GDF11蛋白表达下降,而MMP9蛋白表达和炎症因子表达水平升高。给予GDF11蛋白可显著缓解主动脉血管直径扩大,下调MMP9蛋白表达和炎症因子表达水平(P<0.01)。结论GDF11共处理可显著缓解主动脉血管扩张,减轻主动脉血管炎症反应。

高脂饮食联合血管紧张素-Ⅱ和β-氨基丙腈构建小鼠主动脉夹层模型

目的探索应用高脂饮食联合血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)和β-氨基丙腈(BAPN)构建小鼠主动脉夹层模型的方法。方法24只C57BL/6J小鼠(4周龄,雄性)分为对照组[腹腔注射0.9%氯化钠注射液10 ml/(kg·d)]、Ang-Ⅱ4 mg/(kg·d)组和Ang-Ⅱ4 mg/(kg·d)+BAPN 0.33 g/(kg·d)组,每组8只;每只小鼠均给予高脂饮食,同一时间点测量小鼠体质量并按体质量标准给药,实验过程中死亡小鼠立即解剖,取出主动脉行病理切片并在显微镜下观察。给药期间采用小动物超声观察主动脉形态,对有明显夹层形成的小鼠直接处死并解剖。结果给药后,高脂饮食联合Ang-Ⅱ+BAPN组小鼠活动量、食欲下降最为明显,且比高脂饮食联合Ang-Ⅱ组小鼠主动脉夹层破裂病死率和建模成功率高,对照组小鼠未见明显变化。在小动物超声下,高脂饮食联合Ang-Ⅱ+BAPN组对比其他两组小鼠可见腹主动脉血管假腔形成,血管膨大。将实验组小鼠给药过程中死亡的小鼠立即解剖,可见腹腔及血管周围大量的血凝块;小动物超声下见主动脉夹层或主动脉瘤形成的小鼠,解剖可见血管壁与周围组织粘连严重,而对照组小鼠血管未见明显异常。HE染色结果显示,高脂饮食联合Ang-Ⅱ+BAPN组小鼠有血管壁假腔形成,弹力蛋白和胶原蛋白排列紊乱。统计每组血管壁厚度,分析发现两个实验组均比对照组的血管增厚,差异有统计学意义(P<0.001)。Ang-Ⅱ+BAPN联合高脂饮食组小鼠的血管壁出现了严重的弹性蛋白分解。结论通过高脂饮食联合Ang-Ⅱ4 mg/(kg·d)+BAPN 0.33 g/(kg·d)可以建立高效的小鼠主动脉夹层模型。

血管紧张素Ⅱ和胡索酸-3-氨基丙腈联合诱导小鼠建立腹主动脉瘤模型的特点

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和胡索酸-3-氨基丙腈(BAPN)联合诱导小鼠建立腹主动脉瘤(AAA)模型的特点和可行性。方法实验于2017年1—6月在武汉大学人民医院中心实验室进行。将30只C57BL6小鼠采用随机数字表法分为空白对照组、模型A组和模型B组,每组10只。模型A组小鼠皮下植入微量渗透泵持续泵入AngⅡ(1μg·kg^(-1)·min^(-1))28 d,同时食用含0.25%BAPN饲料饲喂28 d;模型B组小鼠食用含0.25%BAPN饲料饲喂27 d,第28天皮下泵入AngⅡ24 h;空白对照组皮下持续泵入生理盐水,食用普通饲料。动脉瘤破裂死亡小鼠立即取材,第29天仍存活小鼠处死取材。取材后,测量小鼠腹主动脉直径,冰冻切片进行活性氧(ROS)染色,石蜡切片进行弹性纤维染色,免疫组化染色检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达。结果模型A组小鼠AAA发生率为70.0%,高于模型B组小鼠AAA发生率22.2%(P<0.01),模型B组腹主动脉直径与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),模型A组腹主动脉直径大于模型B组(P<0.05);ROS染色显示模型A、B组比对照组腹主动脉组织中ROS表达增多;弹性纤维染色显示模型A、B组与对照组比较弹性纤维有断裂及排列紊乱;免疫组化染色显示模型A、B组比对照组MMP-2表达增多。结论通过血管紧张素Ⅱ持续皮下泵入和BAPN联合可以诱导建立小鼠AAA模型。

β-氨基丙腈饮水联合血管紧张素Ⅱ埋泵建立小鼠主动脉夹层模型

目的应用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)饮水联合血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)皮下埋泵建立小鼠主动脉夹层模型。方法 40只3周龄雄性C57Bl/6J小鼠随机分为两组,均每日给予0.1 g/(kg·bw)BAPN饮水,BAPN饮水后第28天给予皮下埋泵,BAPN饮水+生理盐水埋泵组持续泵入生理盐水,BAPN饮水+Ang II埋泵组持续泵入Ang II,每分钟1000 ng/(kg·bw)。采用小鼠无创血压测量计尾套法检测小鼠血压和心率。实验中死亡小鼠立即解剖,分离主动脉。埋泵72 h后,未死亡小鼠注射过量戊巴比妥钠处死,留取主动脉。苏木素-伊红染色显微镜下观察主动脉壁假腔形成情况。结果 BAPN饮水+Ang II埋泵组小鼠总的夹层发生率为95%,死亡率为24%(夹层动脉瘤破裂死亡),BAPN饮水+生理盐水埋泵组夹层发生率为5%,死亡率为0;镜下主动脉病理切片显示夹层主动脉有假腔形成。结论成功建立高主动脉夹层发生率的小鼠模型。

DL-丝氨酸化学合成的研究

讨论了经由 α-氯代 - β-氨基丙腈盐酸两步合成 DL-丝氨酸的方法 ,并讨论了反应过程中各影响因素。最佳反应条件下 ,中间体氮丙啶 - 2 -羧酸锂的得率为 95.8% ,产物 DL-丝氨酸收率89.4% ,含量 92 .0 %

血管紧张素-Ⅱ联合β-氨基丙腈腹腔注射建立主动脉夹层小鼠模型

目的血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)联合β-氨基丙腈(BAPN)腹腔注射建立小鼠主动脉夹层模型。方法 80只C57BL/6J小鼠(3周龄,雄性)分为对照组和7个实验组,分别为:Ang-Ⅱ组、BAPN 0.1 g/kg组、BAPN 0.33 g/kg组、BAPN 0.67 g/kg组、Ang-Ⅱ+BAPN 0.1 g/kg组、Ang-Ⅱ+BAPN 0.33 g/kg组、Ang-Ⅱ+BAPN0.67 g/kg组。对照组每8 h给予腹腔注射0.9%氯化钠注射液0.1 ml,Ang-Ⅱ组每8 h腹腔注射4.0 mg/kg Ang-Ⅱ,3种不同剂量的BAPN组每日分别给予腹腔注射0.1、0.33、0.67 g/kg BAPN, 3个联合用药组分别在每8 h腹腔注射4.0 mg/kg Ang-Ⅱ的基础上,分别给予腹腔注射0.1、0.33、0.67 g/kg BAPN。每组均于相同时间点应用鼠尾测压器检测并记录小鼠血压,持续14 d,中途死亡小鼠直接解剖,取出主动脉。14 d后处死小鼠,取出主动脉行病理观察。结果未注射Ang-Ⅱ的3个BAPN组小鼠血压与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);注射Ang-Ⅱ的4个组血压与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组无主动脉夹层形成,HE染色显示血管壁结构完整;7个实验组HE染色显示部分小鼠血管壁弹力纤维破坏,假腔形成,炎性细胞浸润,提示主动脉夹层形成。BAPN 0.1 g/kg组、BAPN 0.33 g/kg组、BAPN 0.67 g/kg组,随着BAPN注入剂量的增加,主动脉夹层的发生率逐渐上升,分别为10%、30%、50%,部分小鼠因主动脉破裂死亡,3组分别为0、1、4只;Ang-Ⅱ组和Ang-Ⅱ+BAPN0.1 g/kg组主动脉夹层发生率较低(均为30%),死亡分别为1、0只;Ang-Ⅱ+BAPN 0.33 g/kg组和Ang-Ⅱ+BAPN0.67 g/kg组主动脉夹层发生率分别为70%和80%,Ang-Ⅱ+BAPN 0.33 g/kg组死亡2只,而Ang-Ⅱ+BAPN 0.67g/kg组8只形成主动脉夹层的小鼠均死亡。Ang-Ⅱ+BAPN 0.33 g/kg组主动脉夹层发生率高,死亡率不高,符合小鼠主动脉夹层模型的要求。结论 Ang-Ⅱ联合BAPN腹腔注射能成功诱导小鼠主动脉夹层模型。

2-甲基-4-氨基-5-甲酰胺甲基嘧啶的合成

以β-氨基丙腈为原料,合成2-甲基-4-氨基-5-甲酰胺甲基嘧啶(MD),并进行了结构鉴定。总收率74%,产品纯度97%以上。

β-氨基丙腈抑制赖氨酰氧化酶对小鼠免疫功能的影响

目的观察β-氨基丙腈（β—Aminopropionitrile，BAPN）抑制赖氨酰氧化酶（lysyloxidase，LOX）后小鼠免疫功能的变化。方法选用18～22g的正常ICR小鼠，以β-氨基丙腈100mg／ks连续灌胃10d。处死后检测小鼠胸腺重、脾重、巨噬细胞吞噬功能；采用绵羊红细胞作为抗原，检测小鼠抗体生成细胞功能；采用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞对ConA刺激的转化能力。结果以β-氨基丙腈抑制LOX活性，明显降低小鼠胸腺／体重比值；巨噬细胞吞噬率及吞噬指数均下降；小鼠抗体生成细胞数减少；ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力减弱。结论β-氨基丙腈抑制赖氨酰氧化酶可减弱小鼠免疫功能。

β-氨基丙腈诱导鼠夹层动脉瘤动物模型的建立

目的探索β-氨基丙腈(β-Aminopropionitrile,BAPN)对鼠大动脉壁的影响,并对比人类夹层动脉瘤发病特点,以期进一步探索符合人类疾病特征的夹层动脉瘤动物模型。方法在实验动物饮用水中混入BAPN,配成浓度为0.2%、0.4%、0.6%的BAPN溶液,4~5周龄SPF级SD大鼠和3周龄SPF级C57BL/6小鼠饲养7周。实验结束或动物死亡后将其解剖,分离其大动脉,观察大体变化。将大动脉分为升主动脉、降主动脉、腹主动脉肾动脉上段和腹主动脉肾动脉下段4部分,截取每段血管横断面进行HE染色,并测量其血管内径、中膜面积等各项指标。同时,留取行开胸手术的A型夹层动脉瘤患者大动脉进行HE染色,观察其病理改变,与发生夹层动脉瘤的鼠大动脉进行比较。结果1)BAPN可显著影响大鼠或小鼠采水量及体重增长。2)BAPN可致大鼠或小鼠大动脉扩张,中膜增厚,弹性蛋白减少、排列紊乱,其病理改变符合人类夹层动脉瘤病理改变特征。3)浓度为0.4%的BAPN溶液模型成功率最高。结论:C57BL/6小鼠夹层动脉瘤动物模型可作为一种简便、经济、有效的动物模型进行下一步研究;SD大鼠发生肠破裂、脊柱侧弯等系统病理改变的比例高于夹层动脉瘤发生率,其作为夹层动脉瘤动物模型尚需进一步探索。

β-氨基丙腈对SGC-7901细胞增殖、迁移和黏附功能的影响

目的研究β-氨基丙腈(BAPN)抑制赖氨酰氧化酶(LOX)后,对胃癌细胞SGC-7901体外增殖、迁移和黏附功能的影响。方法培养SGC-7901细胞,分别加入不同浓度的LOX抑制剂BAPN,通过MTT比色法检测对SGC-7901细胞增殖的影响,以同质黏附实验和异质黏附实验检测SGC-7901黏附能力的改变,用体外划痕实验检测SGC-7901迁移能力的变化。结果 0.1 mM、0.2 mM和0.3 mM的BAPN对SGC-7901的增殖无明显影响,0.4 mM和0.8 mM的BAPN抑制SGC-7901的增殖。0.1 mM BAPN对SGC-7901同质黏附、异质黏附和迁移能力无明显作用;0.2 mM和0.3 mM BAPN增强SGC-7901同质黏附,减弱其异质黏附,抑制其体外迁移。结论抑制赖氨酰氧化酶可通过抑制胃癌细胞的异质黏附和迁移能力,增强同质黏附,进而抑制其转移能力。

新型主动脉夹层免疫缺陷动物模型的建立

目的:构建缺乏免疫反应的新型主动脉夹层(AD)动物模型,并研究不同的造模药物剂量,为探讨人源性活性物质在AD发生发展中的作用奠定实验基础。方法:将52只裸鼠随机分为实验组(42只)和对照组(10只)。实验组42只随机分为A、B、C、D四组,使用不同剂量给予β-氨基丙腈(BAPN)饮水28d和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)皮下灌泵24h;对照组正常饮水28d。每7天测量一次体质量,观察体质量改变;第28天处死存活裸鼠,观察血管直观变化,使用HE和EVG染色观察形态学改变,并计算各组AD形成率及破裂率。结果:对照组无AD形成,实验组部分小鼠可见明显的主动脉扩张及壁内血肿,血管可见内膜撕裂、血细胞进入管壁,弹力纤维紊乱或断裂,证实形成AD。实验A、B、C、D组形成率分别为50%、90%、70%及80%,破裂率分别为41.67%、80%、20%及70%。结论:成功构建简单、方便的主动脉夹层免疫缺陷动物模型,并形成不同的形成、破裂率,以适应不同研究方案。

BAPN联合Ang-Ⅱ腹腔注射建立小鼠主动脉夹层模型

目的应用β-氨基丙腈(BAPN)联合血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)腹腔注射建立小鼠主动脉夹层模型。方法将40只6~8周龄雄性C57BL/6大鼠随机分为4组,BAPN组[BAPN 0.1 g/(kg·d)]、Ang-Ⅱ组[Ang-Ⅱ12 mg/(kg·d)]、BAPN+Ang-Ⅱ组[BAPN 0.1 g/(kg·d)+Ang-Ⅱ12 mg/(kg·d)]和对照组(生理盐水),均采用腹腔注射。实验中死亡小鼠立即解剖,分离主动脉。药物干预2周后,未死亡大鼠注射过量戊巴比妥钠处死,留取主动脉。苏木素-伊红(HE)染色后镜下观察主动脉壁假腔形成情况。结果BAPN组夹层发生率为20.0%,死亡率为0.0%;Ang-Ⅱ组夹层发生率为70.0%,死亡率为20.0%;BAPN+Ang-Ⅱ组夹层发生率为80.0%,死亡率为10.0%。镜下主动脉病理切片显示,夹层主动脉有假腔形成。结论给予C57BL/6小鼠Ang-Ⅱ及BAPN联合腹腔注射建立小鼠主动脉夹层模型是一种可模拟主动脉夹层发生病理变化的、可靠的、重复性好的新方法。

β-氨基丙腈联合血管紧张素Ⅱ改良法建立小鼠主动脉夹层模型

目的探讨一种构建小鼠主动脉夹层模型的改良方法。方法β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)联合血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,Ang-Ⅱ)建立小鼠主动脉夹层模型。100只6周龄雄性C57BL/6J小鼠随机取20只作为对照组,另80只用于造模,其中单纯BAPN组40只和BAPN+Ang-Ⅱ组40只。BAPN组小鼠给予0.1 g·kg^(-1)·d^(-1) BAPN饮水;BAPN+Ang-Ⅱ组小鼠除给予BAPN 0.1g·kg^(-1)·d^(-1)饮水外,皮下注射Ang-Ⅱ(根据时间调整注射剂量:1~7 d Ang-Ⅱ剂量为1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1),8~14 d Ang-Ⅱ为0.75 mg·kg^(-1)·d^(-1),15~16 d Ang-Ⅱ为0.375 mg·kg^(-1)·d^(-1)),BAPN组注射等体积生理盐水。药物干预16 d后取材。记录小鼠体质量及饮水量,实验进程中小鼠如有死亡立即解剖,分析死因。实验17 d,将未死亡的小鼠颈部脱臼处死,留取组织备用;HE染色判断主动脉夹层形成情况。结果BAPN+Ang-Ⅱ组及BAPN组分别与对照组相比,动物饮水量均减少、体质量增加趋势减慢(P<0.05)。对照组夹层发生率及死亡率均为0;BAPN组夹层发生率为7.5%,死亡率为2.5%,BAPN+Ang-Ⅱ组夹层发生率为80%,死亡率为30%。BAPN+Ang-Ⅱ组小鼠均死于调整Ang-Ⅱ剂量后1~3 d,83.3%小鼠死于注射药物后数分钟。结论给于C57BL/6J小鼠持续BANP饮水联合Ang-Ⅱ皮下注射成功构建主动脉夹层模型,具有周期短、模拟效果确切、死亡时间有一定规律、经济、稳定可重复等优点。

β-氨基丙腈抑制机械刮宫后大鼠子宫内膜纤维化的研究

目的研究β-氨基丙腈在抑制大鼠子宫内膜损伤后纤维化中的作用及最佳使用剂量。方法将54只8周龄Wistar大鼠随机分为正常组(6只)、对照组(12只)和实验组(36只);对照组大鼠刮宫后自然愈合,实验组大鼠刮宫后立即开始每天注射β-氨基丙腈并根据注射剂量分为100mg/kg/d、200mg/kg/d、300mg/kg/d三个剂量组;对照组和实验组的各剂量组分别于刮宫后72h和7d各处死6只大鼠。获取的大鼠子宫标本进行形态学、病理学、组织化学及胶原检测。结果实验组大鼠子宫大体形态学接近正常组;HE染色和Masson染色观察结果显示,与相同时间点对照组相比,实验组三个剂量组子宫内膜增厚且腺体数量增多,内膜基质纤维化程度低,但7d时300mg/kg/d剂量组内膜腺体数量减少,腺腔狭小。子宫搔刮损伤后72h和7d时,不可溶胶原纤维含量在对照组中均显著高于正常组(P<0.01),实验组均显著低于对照组(P<0.01),且200mg/kg/d剂量组低于100mg/kg/d剂量组(P<0.05),但与300mg/kg/d剂量组无显著差异(P>0.05);可溶性胶原含量在对照组和300mg/kg剂量组中均高于正常组(P<0.05),其他各组间无统计学差异(P>0.05)。结论β-氨基丙腈可以有效抑制Wistar大鼠子宫内膜纤维化,200mg/kg/d给药量对机械刮宫后大鼠子宫内膜纤维化的抑制效果最佳,该研究为子宫内膜纤维化的发生机制和治疗方法研究奠定基础。

AMPK信号通路相关蛋白在β-氨基丙腈诱导鼠夹层动脉瘤动物模型中的表达分析

目的通过建立β-氨基丙腈诱导鼠夹层动脉瘤动物模型,探讨了腺苷酸活化的蛋白激酶(AMPK)信号通路在夹层动脉瘤发生中的作用及机制。方法48只无特定病原体级SD雄性大鼠按随机数字表法分为对照组与模型组,各24只。模型组建立β-氨基丙腈诱导鼠夹层动脉瘤动物,对照组不建立模型,同等条件下给予0.9%氯化钠溶液处理。记录2组第0周、2周与4周所有大鼠的体重情况,直至动脉瘤破裂死亡或实验结束。记录模型组的动脉瘤发生情况。实验第4周记录2组大鼠升主动脉和主动脉相关参数。采用免疫印迹法检测2组大鼠肾组织中AMPK、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap-1)的表达。结果模型组在第2周与第4周的动脉瘤发生率为33.%和62.5%。2组大鼠第0周的体重比较,差异无统计学意义(P>0.05),模型组第2周与第4周的体重分别为(83.09±8.29)、(125.98±12.88)g,均低于对照组[(92.87±10.88)、(166.09±14.01)g],差异有统计学意义(P<0.05)。模型组第4周的升主动脉中膜外轮廓内径、最大中膜厚度、中膜面积为(0.94±0.02)mm、(0.20±0.03)mm 2、(0.27±0.03)mm,显著高于对照组[(0.85±0.03)mm、(0.10±0.02)mm 2、(0.19±0.02)mm],差异有统计学意义(P<0.05);主动脉的最大拉伸长度、极限应力、极限应变、弹性模量为(9.13±0.22)mm、(9.00±0.13)N、(31.93±5.24)Mpa、(35.98±2.10)Mpa,均显著少于对照组[(12.76±1.11)mm、(14.67±1.04)N、(104.87±15.78)Mpa、(83.89±3.77)Mpa],差异有统计学意义(P<0.05)。模型组第4周的主动脉AMPK与Keap-1蛋白相对表达水平为5.20±0.33、3.28±0.44,显著高于对照组(1.03±0.24、1.89±0.22),差异有统计学意义(P<0.05)。结论β-氨基丙腈可诱导鼠夹层动脉瘤动物模型的建立,伴随有AMPK/KEAP-1信号途径的激活,导致大鼠体重降低与主动脉形态结构异常。

β-氨基丙腈联合血管紧张素Ⅱ诱导大鼠主动脉夹层模型的建立

目的探讨β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)联合血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,Ang-Ⅱ诱导建立SD大鼠主动脉夹层(aortic dissection,AD)模型的最佳给药组合及其并发症。方法选取3周龄雄性SD大鼠42只,使用完全随机法将其分为7组,即A组(0.25%BAPN组)、B组(0.40%BAPN组)、C组(0.80%BAPN组)、D组[1 g/(kg·d)BAPN组]、E组[1 g/(kg·d)BAPN+1μg/(kg·min)生理盐水组]、F组[1 g/(kg·d)BAPN+1μg/(kg·min)Ang-Ⅱ组]、G组(对照组),每组6只。干预周期为4周(E、F组为4周+5 d),实验过程中如有大鼠死亡则立即解剖,干预结束后,存活大鼠通过给予戊巴比妥钠处死,分离、留取全程主动脉。通过苏木精-伊红染色从病理形态学特征上观察主动脉变化。结果BAPN干预4周后各干预组生存率差异无统计学意义(P>0.05);植入微渗泵5 d后,E组大鼠生存率高于F组(P=0.008),AD发生率低于F组(P=0.001);BAPN可影响大鼠的饮食量和饮水量;BAPN干预4周后G组大鼠体重大于各干预组(P<0.05);BAPN联合Ang-Ⅱ可使大鼠主动脉中膜增厚、弹性纤维断裂、排列紊乱,伴炎症细胞浸润,符合AD病理形态学改变;BAPN还可对精神状态和胃肠道造成影响。结论通过1g/(kg·d)BAPN联合1μg/(kg·min)Ang-Ⅱ的给药组合可稳定地建立大鼠AD模型,这将对深入研究AD发病机制和治疗靶点提供一种稳定的载体,但该过程中出现的并发症是一种不稳定因素,如何平衡AD模型建立过程中BAPN对其他组织器官的影响还有待进一步研究。

hsa_circ_0091894/FLNA轴在β-氨基丙腈致小鼠主动脉损伤中的作用及机制研究

目的 探究hsa_circ_0091894/细丝蛋白A(filamin A, FLNA)轴在β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile, BAPN)致小鼠主动脉损伤中的作用及机制。方法 将小鼠随机分为对照组、BAPN组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-hsa_circ_0091894组,对小鼠饲喂BAPN,尾静脉注射hsa_circ_0091894过表达的慢病毒载体。采用苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠主动脉组织形态,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测主动脉组织hsa_circ_0091894、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平,采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测主动脉组织FLNA、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和α-1抗胰蛋白酶(α1-AT)蛋白表达水平,采用免疫荧光染色检测主动脉组织FLNA蛋白表达,采用原位末端标记法(TUNEL)染色检测主动脉组织细胞凋亡水平。结果 对照组、BAPN组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-hsa_circ_0091894组主动脉组织hsa_circ_0091894水平依次为1.00±0.00、0.29±0.05、0.34±0.07和0.83±0.11,FLNA蛋白水平依次为0.71±0.12、0.27±0.05、0.23±0.04和0.52±0.09。与对照组比较,BAPN组小鼠主动脉组织TUNEL阳性率,Bax/Bcl-2比值,cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,TNF-α、IFN-γ和IL-6表达水平明显增加(F=138.073,F=294.376,F=56.247,F=80.415,F=71.782,F=57.438,F=84.94,F=51.028,P<0.05);hsa_circ_0091894表达水平,FLNA和α1-AT蛋白表达水平明显降低(F=231.2,F=68.605,F=69.386,P<0.05)。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-hsa_circ_0091894组小鼠主动脉组织TUNEL阳性率,Bax/Bcl-2比值,cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,TNF-α、IFN-γ和IL-6表达水平明显降低;hsa_circ_0091894表达水平、FLNA和α1-AT蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。结论 hsa_circ_0091894可减轻主动脉损伤,其机制可能与hsa_circ_0091894促进FLNA表达、降低细胞凋亡、炎症反应和基质金属蛋白酶水平有关。

β-氨基丙腈饮水建立小鼠主动脉夹层模型

目的应用β-氨基丙腈（BAPN）饮水建立小鼠主动脉夹层模型。 方法C57B1/6J小鼠（3周龄，雄性）40只按照随机区组设计法分为4组，即对照组、BAPN 0.2 g·kg-1·d-1组、BAPN 0.4 g·kg-1·d-1组和BAPN 0.8 g·kg-1·d-1组，每组10只小鼠。对照组给予普通饮水，3种不同剂量的BAPN组分别给予0.2、0.4和0.8 g·kg-1·d-1的BAPN饮水4周。每周应用小鼠无创血压测量计尾套法检测并记录小鼠血压和心率。实验过程中死亡小鼠直接解剖，摘取主动脉。4周后，存活小鼠给予过量戊巴比妥钠处死，解剖摘取主动脉进行大体解剖及光镜观察。 结果对照组、BAPN 0.2 g·kg-1·d-1组、BAPN 0.4 g·kg-1·d-1组和BAPN 0.8 g·kg-1·d-1组小鼠主动脉夹层发生率分别为0、30%（3/10）、50%（5/10）和90%（9/10），夹层破裂死亡率分别为0、20%（2/10）、40%（4/10）和70%（7/10），随着饮水中BAPN浓度的增加，小鼠主动脉夹层发生率和夹层破裂死亡率升高。其中，BAPN 0.8 g·kg-1·d-1组小鼠的主动脉夹层发生率和夹层破裂死亡率均显著高于对照组（P均〈0.05）。BAPN 0.8 g·kg-1·d-1组10只小鼠中，7只死于夹层动脉瘤破裂，其中5只发生在胸主动脉，2只发生在腹主动脉。对照组、BAPN 0.2 g·kg-1·d-1组、BAPN 0.4 g·kg-1·d-1组和BAPN 0.8 g·kg-1·d-1组小鼠胸主动脉最大直径分别为（1.38±0.19）、（2.43±1.56）、（2.45±1.28）和（2.87±0.57）mm，腹主动脉最大直径分别为（1.23±0.13）、（1.30±0.26）、（1.30±0.31）和（1.95±0.81）mm，随着饮水中BAPN浓度的增加，小鼠胸主动脉和腹主动脉最大直径均增加。其中，BAPN 0.8 g·kg-1·d-1组小鼠胸主动脉直径和腹主动脉直径均显著大于对照组（P均〈0.05）。小鼠主动脉组织切片苏木素-伊红染色结果可见BAPN 0.8 g·kg-1·d-1组小鼠胸主动脉夹层形成，假腔内充满红细胞，而对照组血管壁结构完整，无假腔行成。维多利亚蓝-天狼星红染色可见BAPN 0.8 g·kg-1·d-1组小鼠胸主动脉血管壁结构破坏，弹力板断裂，而对照组弹力板结构完整，无断裂。 结论通过给予C57B1/6J小鼠BAPN饮水可建立稳定的主动脉夹层模型，其可用于主动脉夹层治疗药物和发病机制的研究。