卵巢上皮性癌中inhibin及其受体β-glycan的表达

目的探讨α-inhibin及其受体β-glycan在恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达,评估两种多肽信号对卵巢癌生长的调控作用,探讨卵巢癌的发病机制。方法应用EliVision方法检测30例正常卵巢组织、30例卵巢囊腺瘤和80例卵巢囊腺癌中α-in-hibin及其受体β-glycan的表达。结果α-inhibin在正常卵巢、卵巢囊腺瘤和卵巢囊腺癌中的总阳性表达率分别为93.3%、60.0%、36.3%,差异均有显著性(P<0.01);β-glycan在正常卵巢、卵巢囊腺瘤、卵巢囊腺癌的阳性表达率呈逐渐下降的趋势分别为100%、80.0%、75.0%,卵巢囊腺瘤、囊腺癌与正常卵巢组比较,差异有显著性(P<0.05),但卵巢囊腺瘤与囊腺癌比较,差异无显著性(P>0.05)。结论α-inhibin蛋白在卵巢囊腺癌中表达明显下降,而β-glycan在卵巢肿瘤中的表达仍然很高,提示β-glycan对增强α-inhibin抑制卵巢囊腺癌的形成可能起着一定的作用。

昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶研究进展

糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶是N-乙酰己糖胺代谢过程中一个重要的酶,其可将位于非还原端以β糖苷键连接的N-乙酰己糖胺从寡糖及糖复合物中水解下来。昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰已糖胺酶参与昆虫多个生理过程,包括表皮几丁质水解、蛋白质N糖基化修饰、糖复合物水解及精卵识别,因此可能成为生态农药设计的潜在靶标,受到国内外学者的普遍关注。根据昆虫20家族β-N-乙酰己糖胺酶的进化关系和生理功能,可以将其分为4个亚家族,分别为Hex1、Hex2、Hex3和Hex4。Hex1主要在昆虫蜕皮时期的表皮中表达,RNA干扰该基因能够导致昆虫在发育过程中不能正常蜕皮而死亡。通过酶学性质研究发现,Hex1能够专一性水解以β1-4糖苷键连接的几丁质寡糖底物,而不能水解以其他形式连接的底物,是专一性的参与几丁质水解的β-N-乙酰己糖胺酶。目前获得的唯一一个昆虫β-N-乙酰己糖胺酶的晶体结构来自于亚洲玉米螟的OfHex1,其参与底物结合的"+1"位点存在一个特殊的三明治结构,使得Hex1对几丁质寡糖具有高度的选择性和水解活性。Hex2在双翅目昆虫中并不存在,与人类的β-N-乙酰己糖胺酶具有高度的相似性,RNA干扰该基因的表达能够导致幼虫化蛹时异常,成虫翅、附肢、触角等异常。通过酶学性质研究表明,Hex2能够水解释放几丁质寡糖,糖复合物等底物中的β-N-乙酰己糖胺,具有广泛的底物谱。Hex2的功能可能与人类Hex酶的功能类似,参与糖复合物的水解。Hex3是目前研究较少的一类β-N-乙酰己糖胺酶,RNA干扰该基因的表达能够导致幼虫蜕皮过程异常。Hex3存在于昆虫蜕皮液中,与Hex1存在相互作用,可能形成二聚体。通过酶学性质研究表明,Hex3能够水解几丁质寡糖底物,但活性较弱,说明其可能参与几丁质的水解。此外,Hex3、Hex1和Hex4被发现存在于双翅目昆虫精子的表面,可能参与精卵识别过程。Hex4又被称为FDL,是因为该基因的缺失能够导致果蝇左右大脑发生融合(fused lobe)。它是另外一种具有严格底物选择性的β-N-乙酰已糖胺酶,能够专一性地水解糖复合物GnGn中α1-3分支上以β1-2糖苷键连接的G1cNAcβ1-2Man,通过细胞定位研究表明Hex4主要存在于高尔基体当中。以上表明Hex4的主要功能是参与细胞内的糖基化修饰过程。尽管目前对于昆虫β-N-乙酰己糖胺酶的研究取得了很大的进展。对Hex1的功能、酶学性质和晶体结构研究得较为透彻,对于设计环境友好的杀虫剂具有较强的指导意义。但其他3种β-N-乙酰己糖胺酶在生理条件下如何发挥功能,以及4种β-N-乙酰己糖胺酶活性差异的结构基础并不是十分清楚。作者从进化关系、晶体结构、酶学性质和生理功能等方面对昆虫糖基水解酶20家族β-N-乙酰己糖胺酶的研究进展进行综述。

侵袭性真菌感染诊断的三种方法研究

目的:评估血浆(1-3)-β-D-葡聚糖检测(G实验)、真菌培养法及直接涂片法在侵袭性真菌感染诊断中的方法比较。方法:通过112例怀疑侵袭性真菌感染住院患者在其发热当天抽静脉血做G实验检测,同时留取血液、呼吸道、泌尿道或肠道标本做真菌培养及涂片法检真菌。结果:回顾性分析以血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则(草案)作为临床诊断标准,并以此为标准比较G实验﹑真菌培养及直接涂片法结果,分别计算三种方法及联合检测的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值。G实验、真菌培养法、直接涂片法及三者联合检测的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为86.44%、83.02%、85.00%和84.61%;83.05%、84.91%、85.96%和81.82%;61.02%、94.12%、87.80%和67.61%;91.53%%、81.13%、84.38%和89.58%。结论:G实验﹑真菌培养法及直接涂片法相比较各有优缺点,G实验的灵敏度和阴性预测值高,直接涂片法的特异度高。如果联合检测既可具有G实验的优点,又具有直接涂片法及真菌培养法的优点,减少假阴性,为临床提供直接的诊断依据,对早期诊断侵袭性真菌感染更具临床意义。

β-伴大豆球蛋白的N-糖基化位点及其N-糖链的质谱分析

以β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)为研究对象,利用Trypsin和Pepsin酶对其进行水解,以Con A亲和层析柱富集纯化糖肽,并用糖苷酶PNGase F和Endo H分别酶解糖肽,再采用电喷雾质谱(ESI-MS)和串联质谱(MS/MS)对所得肽段的氨基酸序列及糖链的结构进行了分析,最后通过数据库检索对分析结果进行验证.结果表明,β-conglycinin具有5个N-糖基化位点,分别为α亚基的199和455位天冬酰胺(Asn),α'亚基的215和489位Asn及β亚基的326位Asn,且每个糖基化位点均被H5N2,H6N2,H7N2和H8N2这4种高甘露糖型N-糖链所修饰.本研究为各种糖蛋白的糖基化位点及其对应的糖链结构的鉴定分析提供了方法参考,并为深入理解大豆糖蛋白抗原表位的特异性及致敏机理提供了依据.

半乳糖凝集素糖结合的新模式：一个糖结合域的双重配体结合(英文)

半乳糖凝集素家族通过糖识别结构域(CRD)可以专一性识别和结合含β-半乳糖的多糖配体来发挥其生物学功能.到目前发现的CRD对β-半乳糖的识别模式是非常保守的,在结构已知的半乳糖凝集素结构中,一个CRD只能结合一个多糖配体分子.最近,通过对人源半乳糖凝聚素-3 CRD与对硝基TF二糖(TFN)复合物的晶体结构解析首次发现,一个CRD可以同时结合2个TFN分子.与这2个TFN分子有双向结合的残基突变体E165A结构分析显示,一个残基的突变引起的结构上的微小变化会使结合位点2丧失结合糖底物的能力,而位点1的配体结合却不受影响.这表明,结合位点1对糖底物保守的识别和结合是基本的、主要的,而结合位点2对于糖有条件的结合,是额外的、次要的.序列比对和立体化学分析显示,参与新位点2结合的关键残基在其他半乳糖凝集素分子中都是保守的,而它们参与糖配体结合并不常见,表明它们作用的发挥是有条件的.可能在复杂寡聚结构的情况下,如有多重分支结构,双重结合位点将有利于对这类配体分子的辨识和结合,已有一系列研究报道,具有分支结构的寡糖与半乳糖分子的亲和势明显高于单价糖配体,与上述分析相一致.对这类双重位点糖结合的可能生物学意义进行了讨论.

抑制素α和β聚糖在反复植入失败患者子宫内膜中的表达研究

目的探讨抑制素α和β聚糖在反复植入失败(RIF)患者子宫内膜中的表达情况。方法选取2018年5月至2019年12月在秦皇岛市妇幼保健院进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵质内单精子注射(ICSI)助孕治疗的30例不孕患者作为研究对象。其中由于男方因素或者输卵管因素首次进行助孕治疗后妊娠并分娩的15例患者纳入对照组,因同样因素助孕至少进行3次移植均未妊娠的15例患者纳入RIF组。采用化学发光法检测性激素水平,观察控制性促排卵指标,采用Westernblotting检测子宫内膜中抑制素α和β聚糖蛋白的表达情况。结果RIF组抑制素α和β聚糖蛋白相对表达量显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。抑制素α预测RIF的敏感度为80.00%,特异度为93.30%,曲线下的面积(AUC)为0.904;β聚糖预测RIF的敏感度为46.70%,特异度为86.70%,AUC为0.713。结论抑制素α和β聚糖在RIF患者的子宫内膜中高表达,抑制素α对RIF有很好的预测作用。