基于IKKβ/NF-κB通路探讨温胆汤对睡眠障碍小鼠的神经保护作用

目的 探讨温胆汤对睡眠障碍小鼠神经损伤的影响及其机制。方法 小鼠采用改良版水平转盘睡眠剥夺法构建失眠模型,造模成功后随机分为模型组、艾司唑仑片组(0.15 mg/kg)和温胆汤低、高剂量组(12.5、50 g/kg),每组6只,另取6只作为对照组。给药干预7 d后,HE染色观察大脑皮层组织、海马CA1区组织、下丘脑组织变化;尼氏染色观察神经元损伤情况;ELISA法检测脑组织和血清中神经丝轻链(NEFL)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、S100钙结合蛋白B(S100B)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;免疫组化法检测脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;Western blot法检测脑组织中GFAP、磷酸化IκB激酶β(p-IKKβ)、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)蛋白表达。结果 与模型组比较,温胆汤高剂量组小鼠神经元细胞数量增加,结构完整,排列整齐,神经元细胞核皱缩变形数量减少,尼氏小体增多,血清和脑组织NEFL、NSE、S100B、TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低(P<0.01),脑组织GFAP表达降低(P<0.01),脑组织p-IKKβ和p-NF-κB磷酸化水平均降低(P<0.01)。结论 温胆汤能够减少睡眠障碍小鼠的神经损伤,减少促炎介质释放,其机制可能与抑制IKKβ/NF-κB通路的激活有关。

大黄蛰虫丸调节IL-1β/NF-κB/NLRP3信号通路对动脉粥样硬化大鼠主动脉炎性损伤的影响

目的 探讨大黄蛰虫丸调节IL-1β/NF-κB/NLRP3信号通路对动脉粥样硬化(AS)大鼠主动脉炎性损伤的影响。方法 将40只大鼠分为正常对照组(NS)、模型组、地奥心血康干预组(阳性组)及大黄蛰虫丸干预组(大黄蛰虫丸组),每组各10只。除正常组外,余下3组小鼠均构建AS模型。应用油红染色对主动脉病理切片情况进行观察,采用EILSA法检测血清脂质水平[甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、血清炎症指标(IL-6、IL-1β、TNF-α水平);应用流式细胞术对外周血Th17/Treg细胞水平进行检测,并通过RT-qPCR法和Western blot分别检测IL-1β/NF-κB/NLRP3信号通路mRNA和蛋白表达水平,并计算AI指数。结果 除NC组大鼠以外,其他各组大鼠动脉组织中均出现内膜增厚、斑块沉积和不连续、大量炎症细胞浸润等现象;其中模型组动脉组织损伤现象最为显著,阳性组和大黄蛰虫丸组较模型组明显改善,动脉组织结构情况与NC组相近。模型组血清TC[(9.82±1.46)mmol/L]、TG[(9.82±1.46)mmol/L]、LDL-C[(2.93±0.22)mmol/L]、IL-6[(97.65±9.11)ng/L]、TNF-α[(93.21±11.17)ng/L]水平及外周血Th17[(3.56±0.34)%]、Treg细胞[(4.41±0.38)%]水平高于NC组[分别为(3.71±0.57)mmol/L、(6.47±0.92)mmol/L、(0.94±0.15)mmol/L、(16.52±2.76)ng/L、(5.45±0.84)ng/L、(1.83±0.16)%、(7.72±0.73)%](均P<0.05),HDL-C水平[(2.92±0.31)mmol/L]低于NC组[(0.95±0.08)mmol/L](P<0.05);与模型组相比,大黄蜇虫丸组和阳性组血清TC[分别为(3.92±0.72)mmol/L、(3.71±0.65)mmol/L]、TG[分别为(6.71±0.83)mmol/L、(6.83±0.72)mmol/L]、LDL-C[分别为(1.15±0.11)mmol/L、(1.11±0.13)mmol/L]、IL-6[分别为(19.83±2.55)ng/L、(18.51±3.72)ng/L]、TNF-α[分别为(17.08±1.72)ng/L、(15.92±1.56)ng/L]水平及外周血Th17[分别为(2.11±0.25)%、(2.06±0.22)%]、Treg细胞[分别为(7.45±0.76)%、(7.31±0.72)%]水平偏低,HDL-C偏高[分别为(2.18±0.72)mmol/L、(2.23±0.61)mmol/L],趋近于NC组(均P<0.05)。与NC组AI指数(0.35±0.08)比较,模型组、阳性组和大黄蛰虫丸组(分别为9.71±2.04、1.21±0.15、0.83±0.17)均明显升高(均P<0.05),其中阳性组和大黄蛰虫丸组AI指数低于模型组(均P<0.05)。模型组大鼠的IL-6、TNF-α水平和外周血IL-1β、NF-κB、NLRP3 mRNA和信号通路蛋白表达水平均较NC组、阳性组和大黄蛰虫组明显偏高(均P<0.05)。结论 大黄蛰虫丸对动脉粥样硬化大鼠主动脉的炎性损伤可能具有明显的改善作用,可能是通过抑制IL-1β/NF-κB/NLRP3信号通路来实现治疗效果。

有氧运动通过抑制肝脏IKKβ/NF-κB信号通路改善胰岛素抵抗小鼠炎症反应

目的:探讨连续和间歇有氧运动对胰岛素抵抗小鼠炎症反应的改善作用及IKKβ/NF-κB炎症通路的调控机制。方法:以高脂高果糖饲料喂养小鼠,建立胰岛素抵抗模型。将雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:正常对照组(NC)、高脂高果糖喂养对照组(HC)、高脂高果糖喂养连续有氧运动组(HE)和高脂高果糖喂养间歇有氧运动组(HI),每组10只。HE组和HI组小鼠根据运动方案分别进行连续和间歇有氧运动训练,每周5天,共8周。实验结束后,禁食10 h后处死小鼠,采样。采用葡萄糖试剂盒检测血清FBG含量;ELISA法检测血清FINS、TNF-α、FFA、IL-6、IL-10、CRP和APN含量;Western blotting法检测肝脏IKKβ与NF-κB蛋白及其磷酸化表达。结果:经连续和间歇有氧运动干预后,1)胰岛素抵抗小鼠的体质量、FBG含量及FINS含量显著降低(P<0.05),葡萄糖耐量受损情况(AUC值,P<0.05)得到显著改善,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR值,P<0.05)显著降低,胰岛素敏感性(QUICKI值,P<0.05)显著增加;2)胰岛素抵抗小鼠血清中促炎因子的含量(TNF-α、FFA、IL-6、CRP,P<0.05)显著降低,血清抗炎因子的含量(IL-10、APN,P<0.05)显著增加;3)胰岛素抵抗小鼠肝脏IKKβ和NF-κB的蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05);4)对于胰岛素抵抗小鼠炎症反应的改善作用,间歇有氧运动优于连续有氧运动。结论:连续和间歇有氧运动均能显著改善由高脂高果糖饮食诱导的胰岛素抵抗及炎症反应,且间歇有氧运动干预效果更佳,其作用机制可能是通过抑制IKKβ/NF-κB炎症通路,减少促炎因子及增加抗炎因子的分泌,从而改善胰岛素抵抗小鼠的炎症反应。

基于IKKβ/NF-κB信号通路探讨白桦脂醇对ApoE-/-小鼠的血管保护作用及机制

目的:建立高脂血症小鼠模型,评价白桦脂醇对动脉的保护作用,并从脂质代谢紊乱、血管内皮功能失衡及炎症反应等方面探讨其作用机制。方法:将36只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀钙片组、白桦脂醇组,每组12只,以高脂饲料喂养12 w构建小鼠高脂血症模型。另取12只C57BL/6雄性小鼠为正常对照组,普通饲料喂养。阿托伐他汀钙片组给予阿托伐他汀钙片5 mg/kg灌胃给药,白桦脂醇组以20 mg/kg剂量灌胃给药,正常对照组和模型组灌胃相应体积生理盐水,持续给药12 w。第12周末处死小鼠,取小鼠主动脉进行HE染色,光学显微镜下观察血管组织病理学变化;检测小鼠血脂水平,并检测主动脉组织中ET-1、NO、TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及eNOS、iNOS、IKKβ、p-IKKβ、NF-κBp65蛋白表达。结果:白桦脂醇能有效调节ApoE-/-小鼠的脂质代谢紊乱,调节血管内皮功能失衡,抑制IKKβ/NF-κB信号通路,从而降低炎症因子的表达,抑制炎症反应的发生。结论:白桦脂醇能改善ApoE高脂血症模型小鼠动脉管壁病理学改变,有效保护动脉,其作用机制可能与改善脂质代谢紊乱、调节血管内皮功能失衡及抑制IKKβ/NF-κB信号通路进而减少炎症反应的级联放大有关。

基于IKKβ/NF-κ B信号通路探讨丹紫康膝冲剂对大鼠膝骨关节炎的影响

目的探讨基于IKKβ/NF-κ B信号通路的丹紫康膝冲剂对大鼠膝骨关节炎的影响。方法选体质量为200～220 g雄性SD大鼠60只,采用随机排列表法分3组:丹紫康膝组(A组)、双氯芬酸钠组(B组)和生理盐水组(C组),每组20只。造模成功后,对A、B组予以丹紫康膝冲剂、双氯芬酸钠肠溶片,C组予以等量的生理盐水,3次/日,给药4周后断头法处死动物,取右膝关节腔,用手术刀剥取股骨内髁及胫骨平台关节软骨,取标本3份用于切取后,用免疫组化法检测IKKβ和Ⅱ型胶原蛋的含量,光镜下观察关节软骨的病理改变。结果给药前3组间关节周径比较(P>0.05),差异无统计学意义,给药后3组间比较(P<0.05),差异有统计学意义。给药前3组间IKKβ、Ⅱ型胶原蛋白含量比较(P>0.05),差异无统计学意义,给药后三组间比较(P<0.05),差异有统计学意义。结论丹紫康膝冲剂能够提高大鼠OA模型II型胶原蛋白含量,其作用机制与IKKβ/NF-κ B信号传导通路有关。

基于Postn介导的TGF-β/NF-κB通路探讨绿原酸改善心肌肥大的作用及机制研究

目的探究绿原酸介导Postn/TGF-β/NF-κB通路改善心肌肥大的作用机制。方法采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9c2心肌细胞,构建心肌肥大模型。随机将细胞分为对照组、模型组、Postn-siRNA组、绿原酸组和Postn-siRNA+绿原酸组。测定各组细胞表面积及活性,各组心肌细胞Postn/TGF-β/NF-κB通路相关蛋白和mRNA表达情况,流式细胞术测定各组凋亡率。结果与对照组比较,模型组细胞表面积和凋亡率明显增大,细胞活性明显减少(P<0.05);与模型组比较,Postn-siRNA组和绿原酸组细胞表面积和凋亡率明显减小,细胞活性明显增加(P<0.05);与Postn-siRNA组和绿原酸组相比,Postn-siRNA+绿原酸组细胞表面积和凋亡率明显减小,细胞活性明显增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组Postn、α3、α5、β3、β5、NF-κB、TGF-β1蛋白及mRNA表达明显上调,ANP、BNP和β-MHC蛋白表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,Postn-siRNA组和绿原酸组细胞上述蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05),与Postn-siRNA组和绿原酸组相比,Postn-siRNA+绿原酸组细胞上述蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论绿原酸介导Postn/TGF-β/NF-κB通路调控细胞活性和凋亡,进而抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。

前列消汤干预NLRP3炎性小体调控慢性非细菌性前列腺炎Caspase-1/IL-1β/NF-κB p65轴机制研究

目的探讨前列消汤通过干预NLRP3炎性小体调控慢性非细菌性前列腺炎Caspase-1/IL-1β/NF-κB p65轴机制研究。方法将120只雄性SPF级C57BL/6小鼠按随机数表法分为空白组、模型组、阳性对照组(MCC950)、前列消汤高/中/低剂量组;除空白组外,其它组采用复合因素造模法制备EAP小鼠模型,以湿热证候积分、前列腺湿重指数、HE染色评估模型;免疫荧光检测各组小鼠前列腺组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平;Western Blot检测各组小鼠前列腺组织NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、NF-κB p65、NF-κB p65磷酸化蛋白表达水平。结果模型组前列腺湿热证候积分(P<0.01)、前列腺湿重指数较空白组升高(P<0.05);与空白组比较,模型组腺体及间质见大量炎症细胞浸润、腺腔结构紊乱、纤维化增生,各药物组能不同程度改善模型小鼠前列腺的炎性浸润程度,以MCC950组及前列消中、高剂量组最为显著(P<0.01);免疫荧光显示:与空白组比较,模型组小鼠前列腺NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达明显增强(P<0.01),与模型组比较,MCC950组、前列消汤高/中/低剂量组均能不同程度减弱模型小鼠前列腺NLRP3、Caspase-1、IL-1β(P<0.05),MCC950组与前列消中/高剂量组比较,差异不具有统计学意义;Western Blot显示:与空白组比较,模型组小鼠前列腺NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、NF-κB p65、NF-κB p65磷酸化蛋白表达明显升高(P<0.01),与模型组比较,MCC950组能不同程度下调模型小鼠前列腺NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、NF-κB p65、NF-κB p65磷酸化蛋白表达(P<0.01),前列消汤各剂量组下调以中/高剂量组较为显著(P<0.01)。结论前列消汤可通过干预NLRP3炎症小体介导的Caspase-1/IL-1β/NF-κB p65炎症轴发挥抑制慢性非细菌性前列腺炎炎症反应的作用。

扶芳藤提取物联合奥沙利铂对结肠癌IKKβ/NF-κB信号通路的影响

目的探讨扶芳藤提取物联合奥沙利铂对结肠癌肿瘤生长及炎症因子表达的影响。方法选取BALB/c裸鼠皮下注射结肠癌CT26细胞建立结肠癌荷瘤模型。将32只裸鼠随机分为荷瘤模型组、奥沙利铂干预组、扶芳藤干预组、联合干预组,每组8只,连续干预3周,测量肿瘤体积、肿瘤质量并计算抑瘤率。采用ELISA法检测血清中IL-1、IL-6、TNF-α的水平,Western blot法检测肿瘤组织中IKKβ/NF-κB信号通路蛋白的表达。结果干预结束时,与荷瘤模型组相比,扶芳藤干预组的肿瘤体积和肿瘤质量无明显差异(P>0.05),但血清IL-1、IL-6、TNF-α水平和肿瘤组织中IKKβ、NF-κB相对表达量显著降低(P<0.05)。与奥沙利铂干预组相比,联合干预组的肿瘤体积和肿瘤质量显著降低(P<0.05),肿瘤抑制率显著增加(69.26%),血清IL-1、IL-6、TNF-α水平及IKKβ、NF-κB相对表达量显著降低(P<0.05)。结论扶芳藤单药治疗对结肠癌肿瘤生长无明显抑制,但其联合奥沙利铂对结肠癌肿瘤生长有显著抑制作用,这可能与扶芳藤提取物对肿瘤IKKβ/NF-κB信号通路的调控有关。

基于IKKβ/NF-κB通路研究芪甲柔肝方抗肝纤维化作用机制

目的:研究芪甲柔肝方改善肝纤维化可能机制。方法:将68只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组(10只)和造模组(58只)。造模组采用皮下注射CCl4花生油+10%乙醇代水饮的方式建立肝纤维化模型。造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、芪甲柔肝组、鳖甲煎丸组,各组分别予相应药液灌胃,每日1次,连续6周。HE染色和Masson染色观察大鼠肝组织病理学及胶原沉积情况;全自动血清生化仪检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)的表达水平;酶联免疫吸附法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达情况;免疫组化法检测肝组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、核转录因子p65(NF-κB p65)、IκB激酶β(IKKβ)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠AST、ALT、ALP和TNF-α水平显著升高(P<0.05),病理见模型组肝细胞排列紊乱,大量纤维纵隔、假小叶生成,α-SMA、NF-κB p65和IKKβ蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,芪甲柔肝组和鳖甲煎丸组大鼠AST、ALT、ALP和TNF-α水平显著降低(P<0.05),α-SMA、NF-κB p65和IKKβ蛋白表达显著降低(P<0.05)。上述病理均有改善。结论:芪甲柔肝方具有改善肝损伤、抗炎及抗纤维化的作用,这可能与抑制IKKβ/NF-κB信号通路激活有关。

疏肝温胆汤对代谢综合征大鼠TLR4/IKKβ/NF-κB通路的影响

目的观察疏肝温胆汤对代谢综合征(MS)大鼠TLR4/IKKβ/NF-κB通路、炎症因子、血糖、血脂的影响,探讨其改善糖脂代谢的作用机制。方法采用高脂高糖高盐饲料喂养方法诱导MS模型,将成模大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、疏肝温胆汤组。另取正常大鼠为对照组。二甲双胍组和疏肝温胆汤组大鼠分别给予盐酸二甲双胍片和疏肝温胆汤灌胃,模型组和对照组大鼠给予生理盐水灌胃,时间为8周。检测大鼠体质量、体长、腹围、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(PG2h)、胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),并计算葡萄糖曲线下面积(OGTT-AUC)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、Lee's指数、肥胖指数;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定肝脏游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的含量;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)和聚合酶链式反应(PCR)检测肝脏Toll样受体4(TLR4)、IκB磷酸激酶β(IKKβ)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白和mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量、体长、腹围、Lee's指数、肥胖指数、FBG、PG2h、FINS、OGTT-AUC、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、FFA均升高,HDL-C降低;肝脏TNF-α、IL-1、IL-6含量,TLR4、IKKβ、NF-κB蛋白和mRNA表达均升高,GLUT4含量降低;病理见肝细胞脂肪变性,炎症浸润。与模型组比较,二甲双胍组和疏肝温胆汤组大鼠体质量、体长、腹围、Lee's指数、肥胖指数、FBG、PG2h、FINS、OGTT-AUC、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、FFA均降低,HDL-C升高;肝脏TNF-α、IL-1、IL-6含量,TLR4、IKKβ、NF-κB蛋白和mRNA表达均降低,GLUT4含量升高;病理见肝细胞脂肪变性和炎症浸润减轻。结论疏肝温胆汤可以改善MS大鼠胰岛素抵抗,改善糖脂代谢,减轻炎症,其机制可能与抑制TLR4/IKKβ/NF-κB的表达相关。

蒺藜超微粉对血管紧张素Ⅱ诱导的下丘脑神经元细胞损伤IKK-β/NF-κB信号通路的影响

目的探讨蒺藜治疗高血压病的可能作用机制。方法体外原代培养Wistar乳鼠下丘脑神经元细胞,并以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导细胞损伤即高血压细胞模型。药效学观察时细胞分为5组,模型组(2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜低剂量组(3μg/ml蒺藜预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜高剂量组(30μg/ml蒺藜预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、缬沙坦组(10-5mol/L缬沙坦预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、正常组(无任何干预),分别于AngⅡ作用24、48、72 h时检测各组细胞绝对数量、神经元轴突长度、胞体面积、存活率、凋亡率,并于72 h时检测细胞因子IKK-α、IKK-β、NF-κB p65、IκBα、JAK2、STAT3、AT1、GnRH、PKC、PI3K的mRNA表达;药理学观察时细胞分为6组,模型组(2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜组(30μg/ml蒺藜预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、缬沙坦组(10-5mol/L缬沙坦预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、拮抗剂组(20μmol/L TPCA-1预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、蒺藜+拮抗剂组(30μg/ml蒺藜+20μmol/L TPCA-1预孵育2 h后加入2×10-6mol/L AngⅡ)、正常组(无任何干预),根据药效学观察结果确定AngⅡ作用时间及相关细胞因子,并检测各组细胞相关因子mRNA及蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组从AngⅡ干预24 h开始的各时间点细胞绝对数量、胞体面积、存活率、凋亡率均显著升高,神经元轴突长度显著降低;与模型组比较,蒺藜高剂量组、缬沙坦组各时间点细胞绝对数量、胞体面积、存活率、凋亡率均显著下降,神经元轴突长度增加(P<0.05)。与正常组比较,模型组IKK-β、NF-κB p65、JAK2、STAT3、AT1、GnRH、PKC、PI3K表达显著上调,IKK-α、IKBα表达显著下调(P<0.05)。与模型组比较,蒺藜高剂量组IKK-β、NF-κB p65、JAK2、AT1、GnRH、PKC表达下降,IKK-α、IκBα表达升高;蒺藜低剂量组IKK-β、NF-κB p65、AT1、PKC表达下降,IKK-α、IκBα表达升高;缬沙坦组IKK-β、NF-κB p65、AT1、GnRH、PKC表达下降,IKK-α、IκBα表达上调(P<0.05)。根据以上结果确定药理学观察时AngⅡ干预时间为24 h,相关细胞因子为IκBα、IKK-β、NF-κB p65、NF-κB p50。与正常组比较,模型组下丘脑神经元细胞IKK-β、NF-κB p50、NF-κB p65mRNA和蛋白表达上调,IκBα表达下调;与模型组比较,缬沙坦组和蒺藜组NF-κB p50、NF-κB p65、IKK-β的表达下调,IκBα表达上调;与缬沙坦组比较,蒺藜组NF-κB p65、IKK-β表达下调,IκBα表达上调(P<0.05)。结论蒺藜可有效维持血压调节中枢功能,其降压机制可能与调节下丘脑IKK-β/NF-κB信号通路活性有关。

妊娠期糖尿病患者血清细胞外囊泡来源的miR-122激活IKKβ/NF-κB信号通路导致妊娠大鼠胰岛素抵抗的机制分析

目的分析妊娠期糖尿病(GDM)患者血清细胞外囊泡(Evs)来源的microRNA-122(miR-122)激活核因子-κB激酶抑制剂(IKKβ)/核因子-κB(NF-κB)信号通路导致妊娠大鼠胰岛素抵抗的机制。方法选取18只妊娠大鼠,分为正常组、对照组及Evs注射组,每组6只。对照组尾静脉注射无菌滤过PBS 1 ml,Evs注射组给予总量为1 ml无菌滤过PBS稀释的Evs,正常组不干预。检测空腹血糖和空腹胰岛素水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。在第20天终止妊娠,测量母鼠和胎鼠的发育指标。比较各组大鼠C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)RNA水平。体外使用Evs和RNA拮抗剂(Evs+拮抗剂组)对大鼠肝脏细胞进行干预,检测CRP、TNF-α、IL-6蛋白表达水平及IKKβ/NF-κB通路激活情况。筛查血清Evs中可能差异表达的microRNA,分析其与IKKβ/NF-κB通路激活和妊娠大鼠胰岛素抵抗的关系。结果注射Evs后,妊娠大鼠空腹血糖水平和HOMA-IR明显上升,母鼠和胎鼠质量增加,肝脏组织CRP、TNF-α及IL-6 RNA表达上升。体外给予Evs、RNA拮抗剂及IKKβ/NF-κB通路抑制剂后,各组CRP、TNF-α及IL-6蛋白水平,空腹血糖,HOMAIR水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GDM患者外周血Evs中含有较多的miR-122,能够刺激大鼠肝脏细胞,激活IKKβ/NF-κB通路,释放炎症细胞因子,导致妊娠大鼠产生IR,外周血中Evs来源的miR-122有望为GDM的临床诊疗提供新思路。

系统性红斑狼疮患者血清B7-H4、ICOSL水平变化及与IKKβ/NF-κB通路的关系

目的 探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)患者血清可溶性共刺激因子B7同源体-4(B7 nomolog 4,B7-H4)、外周血淋巴细胞表面诱导共刺激分子配体(inducible costimulator ligand, ICOSL)的表达水平与核因子KappaB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路中IκB激酶(IκB-kinase, IKK)β间的关系。方法 将2020年4月至2021年12月50例SLE患者纳入研究组,选取同期来某院一般体检的50例健康人作为对照组,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清B7-H4及诱导性共刺激分子配体(inducible costimulator ligand, ICOSL)表达水平,反转录聚合酶链反应(reverse tran-scription PCR,RT-PCR)法检测NF-κB通路中IKKβ mRNA表达水平。组间比较采用t检验,两两变量的相关性采用Pearson分析,绘制受试者操作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线分析联合B7-H4、ICOSL、IKKβ检测对SLE患者的诊断价值。结果 研究组血清可溶性B7-H4、ICOSL表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=-4.281、-31.439,P<0.05);研究组血清IKKβ mRNA表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=-5.256,P<0.05);Pearson相关系数显示B7-H4、ICOSL与IKKβ mRNA均存在显著正相关关系(r=0.782、0.766,P<0.05);ROC曲线显示联合检测诊断SLE曲线下面积为0.855,显著高于任意单一检测(Z=3.412,P<0.001),特异度为83.20%,敏感度为89.40%,有较高诊断效能。结论 SLE患者体内存在B7-H4、ICOSL和IKKβ mRNA高表达,3者呈正相关关系,实时检测B7-H4、ICOSL水平能准确评估疾病发展,对改善患者预后及抑制该病进展有重要意义。

激活α7 nAChR通过抑制慢性炎症反应减轻饮食诱导的大鼠肥胖型高血压

目的:探讨激活α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)是否通过抑制IκB激酶β/核因子κB(IKKβ/NF-κB)介导的慢性炎症而阻止饮食诱导的肥胖大鼠高血压。方法:高脂(HF)饮食16周诱导肥胖高血压大鼠模型,分为模型对照组(HF con组,n=10)、α7 nAChR激动剂PUN-282987组(PNU组,n=10)和α7 nAChR抑制剂α-银环蛇毒素(α-BGT)+激动剂PUN-282987组(α-BGT+PNU组,n=12),另设空白对照组(NF con组,n=8)。PNU组持续6周腹腔注射α7 nAChR激动剂PNU-282987,α-BGT+PNU组持续6周腹腔注射α7 nAChR抑制剂α-BGT和激动剂PNU-282987。检测血浆和肾脏去甲肾上腺素(NE)含量以反映交感神经活性;检测下丘脑中α7 nAChR、IKKβ、NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平以反映IKKβ/NF-κB促炎信号通路活性;利用Western blot或RT-qPCR法检测下丘脑磷酸化信号转导及转录激活因子3(p-STAT3)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(pPI3K)、瘦素受体b(LepRb)、细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)以反映瘦素信号敏感性。结果:与HF con组比较,PNU组大鼠体重、脂肪总重和血压均显著降低(P<0.05或P<0.01),且肾脏中NE水平显著降低(P<0.01),表明交感神经活性减低。与HF con组比较,PNU组大鼠下丘脑中p-IKKβ、NF-κB、IL-1β和TNF-α蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。同时,与HF con组比较,PNU组下丘脑中p-STAT3蛋白水平和LepRb mRNA水平显著升高(P<0.05或P<0.01),而p-PI3K蛋白水平及SOCS3和PTP1B mRNA水平显著降低(P<0.05或P<0.01),表明PNU组瘦素敏感性增加。然而,当同时给予α-BGT可降低PNU-282987的上述作用。结论:使用激动剂激活α7 nAChR可抑制下丘脑中的慢性炎症,减轻瘦素抵抗,从而缓解大鼠肥胖型高血压。

抗纤Ⅰ号和硒药物血清对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察抗纤Ⅰ号(AF)和抗纤Ⅰ号加硒(AS)药物血清诱导大鼠肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡的作用,并探讨其作用的分子机制。方法:采用整体动物体内给药,分离制备含药血清,采用MTT法检测药物血清对HSCs增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Annexin-V/PI联合标记法测定细胞凋亡率;RT-PCR测定HSCs转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达;电泳迁移率改变分析(EMSA)检测核转录因子κB(NF-κB)与DNA的结合活性。结果:AF和AS含药血清呈剂量依赖性抑制HSCs增殖,并可诱导HSCs凋亡,凋亡率(%)分别为18.07±2.67,17.55±1.91;两种含药血清可显著降低HSCs TGF-β1mRNA表达,抑制HSCs NF-κB的结合活性。结论:抗纤Ⅰ号和硒药物血清可以通过抑制HSCs的增殖、诱导HSCs凋亡,而使细胞外基质合成减少,肝纤维化减轻,其可能的分子机制是抑制NF-κB的活性,进而降低TGF-β1的表达。

血糖波动大鼠核因子кB的变化及其对胰岛β细胞凋亡的作用

目的 观察血糖波动对在体大鼠胰岛β细胞凋亡的影响以及核因子（NF）-кB在其中的作用.方法 通过高脂饲料及注射小剂量链脲佐菌素（STZ）20mg/kg的方法制造糖尿病（DM）大鼠模型,小剂量高糖（25%的葡萄糖溶液10mg/g体重）每日3次腹腔注射制造持续高糖（SHG）组模型,在SHG组基础上高糖注射后0.5h皮下注射诺和锐1U/100g,造成每日血糖波动3次的血糖波动（IHG）大鼠模型.根据血糖、血糖波动分正常（N）组、DM组、SHG组、IHG组4组.实验14d结束并检测胰腺组织氧化应激指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）,酶标记免疫吸附测定（ELISA）方法检测炎症指标肿瘤坏死因子（TNF）-α、环氧酶（COX）-2以及凋亡基因Bax、Bcl-2,NF-кB等.原位末端转移酶标记技术（TUNEL）法观察胰岛细胞凋亡指数.结果 DM组、SHG组、IHG组较N组MDA 、TNF-α、COX-2、Bax含量升高,SOD、Bcl-2含量减少,NF-кB含量升高,胰岛细胞凋亡指数增多.与DM组比较,SHG组和IHG组MDA、Bax、NF-кB含量升高以及胰岛细胞凋亡指数升高.与SHG组比较,IHG组NF-кB含量最高、Bcl-2/Bax值最低,胰岛细胞凋亡指数最高.偏相关分析提示,Bcl-2/Bax与NF-κB之间具有相关性（r=-0.239,P＜0.05）.结论 血糖波动明显增加β胰岛细胞凋亡,可能与血糖波动增加氧化应激、炎症反应,激活并放大了NF-кB活性,NF-кB通过调节炎症及下游凋亡基因而促进胰岛细胞凋亡.

黄连素改善妊娠期糖尿病大鼠胰岛素抵抗及其机制研究

目的观察黄连素对高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导的妊娠期糖尿病(GDM)大鼠的作用及其可能机制。方法采用高脂饲料喂养雌性SD大鼠5周,交配受孕后第1天腹腔注射STZ(25 mg/kg)建立GDM大鼠模型,妊娠第1~19天黄连素溶液[200 mg/(kg·d)]灌胃干预。监测各组大鼠孕期空腹血糖和胰岛素抵抗指数的变化。于妊娠第20天剖宫取胎,测量各组胎鼠和胎盘重量,通过实时荧光定量PCR法和ELISA法检测各组肝脏组织CRP、TNF-α基因和蛋白水平,通过Western blotting法检测肝脏细胞IKKβ和NF-κB蛋白的表达。结果与正常妊娠组相比,模型组孕鼠空腹血糖和胰岛素抵抗指数明显升高(均P<0.05),胎鼠和胎盘的重量明显增加(均P<0.05),肝脏组织CRP、TNF-α基因和蛋白表达增多(均P<0.05),肝细胞IKKβ蛋白和核NF-κB蛋白的表达增多(均P<0.05)。经黄连素干预后GDM孕鼠肝脏细胞浆IKKβ蛋白和核NF-κB蛋白表达减少(均P<0.05),CRP、TNF-α基因和蛋白表达减少(均P<0.05),胰岛素抵抗指数和空腹血糖降低(均P<0.05)。结论黄连素可以通过IKK/NF-κB信号通路,抑制NF-κB核转位,降低GDM模型大鼠肝脏组织中的炎症反应,从而改善胰岛素抵抗,降低血糖水平。

miRNA-15b-5p对糖尿病足大鼠溃疡愈合的影响及可能机制

目的探索miRNA-15b-5p对糖尿病足大鼠溃疡愈合的影响及可能机制。方法将54只SD大鼠随机分为对照组、miRNA-15b-5p agomir组、糖尿病组和miRNA-15b-5p antagomir组。RT-qPCR检测对照组和糖尿病组大鼠创面皮肤组织miRNA-15b-5p表达;对比各组大鼠创面形成后第1、4、7、10、14天创面愈合率;TUNEL检测各组大鼠溃疡创面组织细胞凋亡情况;ELISA检测各组大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-18水平和ICAM-1、E-selectin水平;Western blot法检测各组大鼠创面皮肤组织中IKKβ、IKKα、p-IKKβ、p-IKKα、NF-κB的表达水平。结果miRNA-15b-5p在糖尿病大鼠创面组织中表达上调,miRNA-15b-5p过表达后,创面愈合速率减慢,细胞凋亡率升高,炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-18和黏附分子ICAM-1、E-selectin表达升高,大鼠创面组织中p-IKKβ、p-IKKα、NF-κB蛋白表达水平升高。抑制miRNA-15b-5p表达后,加快创面愈合速率,抑制细胞凋亡,减少炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-18和黏附分子ICAM-1、E-selectin表达,抑制大鼠创面组织中p-IKKβ、p-IKKα、NF-κB蛋白相对表达水平。结论抑制miRNA-15b-5p有助于减轻炎症反应,促进糖尿病足大鼠溃疡愈合,其作用机制可能与调控IKKβ/NF-κB信号通路有关。

γ-氨基丁酸B型受体对结肠癌HCT116细胞周期的影响

目的利用人结肠癌细胞株HCT116细胞为研究模型,探究γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)/糖原合成激酶3β(GSK-3β)/核转录因子(NF-κB)信号通路对结肠肿瘤细胞HCT116周期的影响,明确GABABR调控结肠癌细胞增殖的机制。方法使用人结肠癌细胞株HCT116细胞为模型,构建针对GABABR的sh RNA,流式细胞仪检测不同刺激条件下HCT116细胞周期分布,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)法检测细胞的增殖能力变化。结果 GABABR可调控HCT116细胞的增殖。GABABR激动剂巴氯芬将HCT116细胞滞留在G1期,GSK-3β激动剂wort能逆转巴氯芬对结肠癌的该作用;GSK-3β抑制剂SB216763处理后,HCT116细胞增殖得到抑制,而NF-κB激动剂PMA可以阻断此作用;NF-κB激动剂PDTC能够回救敲低GABABR所引起的HCT116细胞增殖抑制,Akt抑制剂MK-2206 2HCl能逆转巴氯芬、SB216763对HCT116细胞增殖的抑制作用。结论 GABABR/GSK-3β/NF-κB信号通路可以调控结肠癌细胞增殖,通过抑制GSK-3β的活性,抑制NF-κB信号通路的激活,将HCT116细胞滞留在G1期。GABABR/GSK-3β/NF-κB信号通路可以作为临床预防和治疗结肠癌的潜在药物靶点之一。

加味茵芍散对非酒精性脂肪性肝病大鼠干预作用及机制探讨

目的:探讨加味茵芍散对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的防治作用及其机制。方法:采用高脂乳剂灌胃建立大鼠NAFLD模型,分别给予多烯磷脂酰胆碱及加味茵芍散中药灌胃干预,计算和检测各组大鼠肝指数、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、NF-κB、TNF-αm RNA的表达水平并观察肝组织病理学改变。结果:与模型组比较,中药各剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-C、FFA、FPG、AST、ALT、FINS、HOMA-IR水平、肝指数及肝脏MDA水平显著降低(P<0.05),血清HDL-C及肝脏SOD、T-GSH结果显著升高(P<0.05),肝脏病理切片显示加味茵芍散可明显减轻肝细胞脂肪变性及炎性反应细胞浸润等病理症状。Real-time PCR结果示,给予高剂量加味茵芍散的大鼠肝脏组织内NF-κB、TNF-α在m RNA水平上均低于模型组和胆碱组大鼠(P<0.05)。结论:加味茵芍散能够有效减轻NAFLD大鼠肝脏脂肪变性,对NAFLD具有较好的防治功效。其作用机制可能与抑制或下调NF-κB、TNF-αm RNA表达,从而阻断IKKβ/NF-κB细胞通路的激活有关。