不同碳、氮源组合对小麦全蚀病菌产生胞外β-1,3-葡聚糖酶的影响

利用改进的MS液体培养基,通过改变碳、氮源组合,分别在振荡培养小麦全蚀病菌7,14,21 d时(26℃,150 r/min),用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定培养滤液中的β-1,3-葡聚糖酶活性。结果表明,培养基中分别以小麦茎秆、叶片,玉米茎秆、叶片和根系为碳源与不同氮源组合,培养滤液中β-1,3-葡聚糖酶活性有明显差异,其中以小麦叶片为碳源时酶活性最高,以玉米根系为碳源时酶活性较低,但两者之间酶活性无明显差异。培养基中加入有机氮时酶活性均明显高于加入无机氮,但两种有机氮培养基中的酶活性变化趋势完全不同。以牛肉膏为氮源时,在小麦全蚀病菌培养7 d时培养滤液中的酶活性最高,且酶活性随病菌培养时间的延长而逐渐下降;以蛋白胨为氮源时酶活性则呈上升趋势,在病菌培养21 d时最高。以上结果表明,供试各组合中以牛肉膏为氮源、小麦叶片为碳源的组合为最佳组合,7 d时有相对较高的酶活性。

烟草品种Xanthi NN碱性β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆与生物信息学分析

烟草碱性β-1,3-葡聚糖酶具有较强的抗真菌病害等作用。本研究根据烟草Samsun与抗真菌作用有关的碱性β-1,3-葡聚糖酶基因序列设计引物,以烟草(Nicotiana tabacum)品种Xanthi NN基因组DNA为模板,进行PCR扩增,后将扩增产物与pUC57-T载体重组,再以该重组体转化大肠杆菌DH5α,在对阳性克隆进行鉴定后测序,并对其编码酶蛋白进行了一级、二级、三级结构及蛋白质同源性比较等生物信息学分析。研究结果表明,该基因全长1 868 bp,包含2个外显子和1个内含子;除终止密码子外,共编码359个氨基酸(GenBank登录号:EU867448)。该酶分子量为28.4 kDa,pI为9.72,是一个碱性蛋白;具有多个螺旋、转角、延伸链和无规卷曲等二级结构,其中α-螺旋占35.65%,β-转角占5.57%,延伸链占19.22%,无规卷曲占39.55%;三级结构同源建模预测显示,它与香蕉(Musa supientum)β-1,3-葡聚糖酶(PDB number 2cygA)具有60%的一致性;推测该酶蛋白与颠茄(Atropa belladonna)、马铃薯(Solanum tuberosum)等茄科植物的β-1,3-葡聚糖酶编码序列同源性分别达到89%和81%。本研究结果为进一步开展烟草抗真菌的β-1,3-葡聚糖酶的基因工程研究奠定了重要基础。

β-1,4-葡聚糖内切酶基因在大肠杆菌中分泌表达

采用重叠延伸PCR合成技术将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)分泌蛋白基因序列usp45(81 bp)和瑞氏木霉(Trichoderma reesei)β-1,4-葡聚糖内切酶成熟蛋白序列egl3(657 bp)连接成融合基因usp45-egl3,构建了分泌型重组质粒pMG36e-usp45-egl3及重组大肠杆菌E.coli DH5α/pMG36e-usp45-egl3。分析重组大肠杆菌的表达效果及表达产物降解纤维素的能力。结果表明,重组大肠杆菌DH5α/pMG36e-usp45-egl3经14 h培养能分泌酶活为226 mU/mL的β-1,4-葡聚糖内切酶,并有效地降解了羧甲基纤维素钠。其中分泌的β-1,4-葡聚糖内切酶降解羧甲基纤维素钠生成还原糖的速率为2.35 mg/(h·mL)。

酵母β-1,3-葡聚糖研究进展

对酵母β-1,3-葡聚糖的提取工艺和衍生化方法的研究动态进行了综述,并对各种方法的优越性进行了比较,简述了β-1,3-葡聚糖在食品、化妆品、医学、动物养殖及饲料工业中的用途,提出了β-1,3-葡聚糖研究发展的方向。

毛竹β-1,4-糖苷酶基因cDNA克隆与表达分析

根据水稻β-1,4-糖苷酶(korrigan)基因的保守区序列设计引物,以毛竹cDNA为模板,采用PCR方法,成功扩增出1个含有完整阅读框架的cDNA序列,长度为2191bp,共编码617个氨基酸,将其命名为PeKOR基因。其氨基酸序列分析的结果表明,PeKOR与其他β-1,4-糖苷酶有较高的同源性,同水稻序列相似性高达91%,且其序列具有典型的Glycosyl hydrolase9super family结构域,推测此PeKOR为毛竹β-1,4-糖苷酶基因。在竹笋中采用半定量方法研究该基因的表达情况,结果表明该基因在高温条件下表达量较低温条件下明显升高。

GPC-3、HIF-1α和β-catenin在人肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的研究磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)、低氧诱导因子-1(HIF-1α)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白在人肝细胞癌(HCC)组织中的表达及临床意义。方法免疫组织化学方法检测GPC-3、HIF-1α和β-catenin 3种蛋白在96例HCC和28例正常肝组织石蜡标本的表达,分析3种蛋白表达的相关性,并结合HCC患者随访资料行临床病理参数与预后关系分析。结果GPC-3、HIF-1α和β-catenin在HCC中的表达分别为85.4%(82/96)、86.5%(83/96)和83.3%(80/96),在正常肝组织表达分别为0%(0/28)、17.9%(5/28)和3.6%(1/28),3种蛋白在HCC和正常肝组织表达差异均具有统计学意义(P<0.05),Spearman相关检验显示3种蛋白之间表达均有显著正相关性(P=0.000)。单因素分析显示GPC-3表达、肿瘤结节数目和癌栓与患者预后较差相关,Cox多因素回归分析显示肿瘤结节数目和癌栓是影响HCC术后独立预后因素。结论GPC-3、HIF-1α和β-catenin 3种蛋白在HCC中异常表达,并呈正相关。GPC-3可作为HCC预后评估的参考指标,肿瘤结节数目和癌栓是影响HCC患者预后的独立影响因素。

芪蚣抗纤方(QF)拆方中软坚散结药对免疫损伤性肝纤维化大鼠TGFβ-1定性定量表达的影响

目的:观察芪蚣抗纤方(QF)拆方中软坚散结药(蜈蚣、山慈姑)对免疫损伤性肝纤维化大鼠TGFβ-1定性定量表达的影响。方法:猪血清攻击法诱导免疫损伤性肝纤维化大鼠模型,随机分为模型组、软坚散结药大剂量干预组、软坚散结药小剂量干预组,另设正常对照组,整个实验过程共8周。免疫组化法检测肝组织TGF-β1相关表达;酶标仪ABC-ELISA法测血清TGF-β1含量。结果:免疫组化显示:正常组大鼠肝脏仅TGFβ1微弱表达,模型组较正常组TGFβ1阳性信号明显增强(P<0.01),软坚散结药干预后大鼠肝脏TGFβ1表达比模型组明显下调,(小剂量P<0.01,大剂量P<0.05),大、小剂量组与模型组相比有差异。血清TGF-β1含量:与模型组相比,软坚散结药大、小剂量干预后动物血清中的TGFβl显著降低(P<0.01)。结论:芪蚣抗纤方(QF)中软坚散结药大、小剂量对免疫损伤性大鼠肝纤维化形成和逆转均有影响,对促肝纤维化细胞因子TGFβ-1均有很好调节作用,对临床上应用软坚散结药治疗肝纤维化有一定的指导意义。

百草枯中毒小鼠肺组织转化生长因子β和缺氧诱导因子1α的表达

目的探讨百草枯中毒小鼠肺组织转化生长因子β(TGF-β)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达变化。方法将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=10)和百草枯组(n=20)。百草枯组腹腔注射百草枯20 mg/kg,对照组腹腔注射等体积生理盐水。在染毒后第7天处死10只百草枯组小鼠,第28天处死其余小鼠。通过苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色进行肺组织病理学观察;免疫组织化学法检测肺组织TGF-β和HIF-1α蛋白的表达。采用Pearson相关分析法分析TGF-β蛋白与HIF-1α蛋白表达的相关性。结果 HE染色和Masson染色结果均显示:在染毒后第7天,百草枯组可见肺纤维化表现;染毒后第28天,肺纤维化程度加重。染毒后第7天百草枯组小鼠肺组织TGF-β蛋白的表达明显高于对照组,染毒后第28天TGF-β蛋白的表达高于染毒后第7天,差异均有统计学意义(P<0.05)。染毒后第7天和第28天,百草枯组小鼠肺组织HIF-1α蛋白的表达均明显高于对照组(P<0.05);染毒后第28天的HIF-1α蛋白的表达高于第7天,但差异无统计学意义(P>0.05)。在染毒后第7天和第28天,百草枯组TGF-β蛋白与HIF-1α蛋白的表达均无相关性(r=0.295,P=0.630;r=0.218,P=0.725)。结论百草枯中毒可上调小鼠肺组织的TGF-β和HIF-1α蛋白,TGF-β和HIF-1α可能通过不同途径参与了肺纤维化的形成。

干扰素β-1α与干扰素β-1b治疗复发缓解型多发性硬化的成本效果分析

目的探讨干扰素(IFN)β-1α与IFNβ-1b治疗复发缓解型多发性硬化(RRMS)的有效性及经济性。方法根据RRMS患者的残疾进展进程,利用扩展残疾状态量表评分(EDSS)评分,划分疾病进展过程中的不同状态。通过查阅文献获取各状态间的转移概率、各状态的健康效用值,应用药品价格估算各状态所花的费用。运用Markov模型分析法分析IFNβ-1α与IFNβ-1b治疗RRMS的成本效果。结果 IFNβ-1α组的累计成本及健康效果为169059.436$和7.913质量调整生命年(QALYs),成本效果比为21364.771$/QALY;IFNβ-1b组的累计成本及健康效果为212572.623$和7.912 QALYs,成本效果比为26867.116$/QALY。IFNβ-1α组的成本效果比低于IFNβ-1b组。结论 IFNβ-1α的成本效果比优于IFNβ-1b。因此选择IFNβ-1α作为延缓RRMS疾病进程的治疗药物,可获得更大的经济学效益。

雷公藤内酯醇对大鼠大脑皮质内注射Aβ后IL-1α和IL-1β表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(TP)对大鼠大脑皮质内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后白细胞介素-1α(IL-1α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法 30只SD雄性大鼠等分成对照组、Aβ组、用药组。应用免疫组织化学、RT-PCR方法检测各组大鼠大脑皮质IL-1α和IL-1β的表达。结果免疫组织化学染色显示,用药组IL-1α和IL-1β阳性细胞数较Aβ组明显减少(P<0.05)、平均光密度较Aβ组明显减弱(P<0.01)。RT-PCR显示,用药组IL-1α和IL-1βmRNA水平较Aβ组明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 TP对Aβ所致的大鼠大脑皮质IL-1α和IL-1β的过度表达有抑制作用。

PGC-1α基因缺失对β-淀粉样蛋白诱导小鼠神经毒性的影响

目的观察PGC-1α基因缺失对β-淀粉样蛋白诱导的小鼠神经毒性的影响。方法健康雄性PGC-1α基因敲除小鼠和C57BL16小鼠各12只,常规饲养3 d后按照随机化原则将两种基因型组小鼠分为对照组和Aβ注射组,每组6只。在脑立体定位仪指导下把凝聚态Aβ1-40注射到不同基因组(正常基因和PGC-1α基因敲除)小鼠的双侧侧脑室中,然后采用Morris水迷宫评估小鼠的学习记忆能力,检测各组研究对象脑皮质和海马组织内ChAT和AchE以及氧化应激相关指标。结果Aβ1-40注射双侧侧脑室后,两种不同基因组小鼠的学习记忆能力与同种基因型小鼠对照组相比均明显降低(P<0.05),脑皮质和海马组织内ChAT活性均明显降低(P<0.05),AchE活性均明显升高(P<0.05),SOD及GSH的活性均明显降低(P<0.05),而MDA的活性均明显升高(P<0.05);与正常基因小鼠相比,PGC-1α基因敲除组小鼠侧脑室注射Aβ1-40后较正常基因组小鼠的学习记忆水平明显下降(P<0.05),同时脑皮质和海马组织内ChAT活性明显降低(P<0.05),AchE活性明显升高(P<0.05),SOD及GSH的活性均明显降低(P<0.05),而MDA的活性明显升高(P<0.05)。结论PGC-1α基因敲除可增强Aβ诱导的神经毒性作用。

通心络对Aβ_(1-42)损伤人脑微血管内皮细胞HIF-1α、VEGF表达的干预作用

目的通心络对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的人脑微血管内皮细胞中VEGF的分泌及VEGF和HIF-1α蛋白表达的干预作用。方法采用人脑微血管内皮细胞,给予不同剂量的通心络预处理,并用20μmol·L-1的Aβ1-42干预24h诱导细胞损伤,经处理后检测细胞形态的变化、VEGF分泌及VEGF和HIF-1α蛋白的表达。结果Aβ1-42可诱导人脑微血管内皮细胞损伤,VEGF分泌减少及VEGF蛋白表达降低,HIF-1α蛋白表达增强,通心络可升高Aβ1-42诱导的VEGF分泌、增强其蛋白的表达,增强HIF-1α蛋白表达,保护内皮细胞。结论通心络可通过HIF-1α途径增强VEGF蛋白的表达,增加上清液中VEGF蛋白的分泌,从而对Aβ1-42损伤的脑微血管内皮细胞起到保护作用。

PRK术后泪液中EGF、TGF-β_1、IL-1α含量的变化

目的 :探讨表皮生长因子 (EGF)、转化型生长因子 β1(TGF β1)、白细胞介素 1α(IL 1α)三种与角膜关系密切的细胞因子于PRK手术前后在泪液中的含量 ,并寻求其术后短期内的变化规律。方法 :于PRK术前及术后 1d ,2d ,10d及 1个月在患者下睑结膜囊内抽取泪液标本。采用双抗体夹心ABCELISA法进行检测。结果 :在PRK术前至术后 1个月的随访期间 ,EGF和IL 1α无明显变化 (P >0 .0 5 )。术后第1天泪液中TGF β1含量较术前降低 (P <0 .0 5 )。结论 :PRK手术前后EGF和IL 1α无明显变化 ,可能是该种细胞因子对维持细胞稳态起作用 ,或是通过其他细胞因子发挥作用。而TGF β1在术后 1d含量较术前下降 ,致使其对EGF的抑制作用相对减低 ,给细胞增殖移行提供机会 ,尽快恢复其屏障功能 ,之后TGF β1又恢复至术前水平 ,与其他因子形成新的动态平衡 ,共同调节术后角膜创面的修复愈合。

β-1a干扰素治疗多发性硬化症的临床观察

目的探讨β-1a干扰素治疗多发性硬化症的临床疗效与安全性。方法54例入选病例随机分为β-1a干扰素治疗组或安慰剂组,治疗组每次皮下注射β-1a干扰素20mg,每周3次,维持2年。用药患者在最初6个月中每月作1次神经系统检查,之后每3个月查1次。所有病人每年做2次MRI检查,并对所获数据进行统计学分析。结果β-1a干扰素治疗的病人第1年和第2年的复发率比安慰剂组有明显降低(治疗组平均每人1.62次,安慰剂组2.78次);复发危险性减低27%;首次复发时间推迟3个月(20mg组),并且无复发的病人比例大大提高(P<0.05)。治疗组病人注射部位的局部反应很常见,但大多轻微。结论在降低复发率、减轻残障程度和改善MRI病灶等方面,用皮下β-1a干扰素治疗多发性硬化疗效确切,不良反应小。

经体表创伤后肾脏组织中缺氧诱导因子-1α表达的调控

目的:研究创伤后肾脏组织中HIF1α表达的调控.探讨其在肾脏损伤机制中的作用.方法:从40cm高度自由落体打击大鼠脊肋角制作创伤模型,运用免疫组化方法进行HIF1α,TGFβ1染色.运用原位杂交方法检测HIF1αmRNA.结果:HIF1α,TGFβ1损伤后1,24h阳性细胞数较多,6,12h阳性细胞数较少.HIF1αmRNA各组表达均阳性但组间无差异.结论:HIF1α可能参与了肾脏损伤后缺氧的继发损害过程,并通过多个环节调控.对其进行深入研究可能为找到有效地治疗肾脏损伤的方法提供新的思路.

产前多普勒超声参数与缺氧诱导因子-1α关系及诊断胎儿窘迫价值

目的:分析产前多普勒超声参数与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平关系及对胎儿窘迫的诊断价值。方法:收集2019年11月-2020年11月本院就诊的疑似胎儿窘迫孕妇105例临床资料,以新生儿Apger评分分为胎儿窘迫组60例和非胎儿窘迫的对照组45例,对比两组多普勒超声参数脐动脉收缩与舒张压比值(S/D)、阻力指数(RI)、搏动指数(PI),分析各参数与促红细胞生成素(EPO)、β-人绒毛促性腺激素(β-HCG)的相关性及对胎儿窘迫的诊断价值。结果:S/D、RI、PI参数窘迫组高于对照组,且重度胎儿窘迫孕妇高于轻度胎儿窘迫孕妇;血清HIF-1α、EPO、β-HCG水平重度胎儿窘迫孕妇高于轻度胎儿窘迫孕妇(均P<0.05)。S/D、RI、PI、HIF-1α、EPO、β-HCG与胎儿窘迫程度相关,S/D、RI、PI与HIF-1α、EPO、β-HCG指标呈正相关(均P<0.05)。与S/D、RI、PI单项诊断相比,3项联合诊断胎儿窘迫最高(P<0.05),曲线下面积0.851,敏感度84.7%。结论:多普勒超声诊断胎儿窘迫价值较高,且参数S/D、RI、PI与血清HIF-1α、EPO、β-HCG相关,可为临床诊断提供帮助。

通络驻景丸对糖尿病大鼠视网膜HIF-1α及PDGF-Β表达的影响

目的:探讨通络驻景丸对糖尿病大鼠视网膜中HIF-1α及PDGF-Β表达的影响。方法:除空白组外,SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,造模成功的大鼠随机分为:模型组,通络驻景丸低、中、高剂量组。模型组和空白组给予蒸馏水作对照,通络驻景丸低、中、高剂量组给予不同剂量通络驻景丸药液治疗(分别是1.65、3.33、6.66g生药/kg)。末次给药结束后,取大鼠全血测糖化血红蛋白水平;取大鼠视网膜,用RT-PCR检测各组大鼠视网膜中HIF-1αmRNA及PDGF-ΒmRNA的表达;ELIAS检测HIF-1α及PDGF-Β蛋白表达。结果:模型组大鼠视网膜HIF-1αmRNA、PDGF-ΒmRNA水平比空白组显著升高,通络驻景丸给药组HIF-1αmRNA、PDGF-ΒmRNA表达水平比模型组均有降低,且通络驻景丸高剂量组降幅最大。模型组大鼠HIF-1α、PDGF-Β蛋白水平比空白组显著升高,通络驻景丸给药组HIF-1α、PDGF-Β表达水平比模型组均有降低,且通络驻景丸高剂量组降幅最大。结论:研究显示通络驻景丸可能通过降低HIF-1α及PDGF-Β表达,在糖尿病大鼠视网膜疾病的发生发展过程中起一定作用。

延伸因子-1α-A和β-肌动蛋白启动子在青鳉转基因胚胎中的表达(简报)

转基因技术是二十世纪八十年代初发展起来的一项生物领域高新技术.近年来,外源基因经显微注射导人哺乳类、两栖类、昆虫类以及鱼类的受精卵或胚胎,从而使人们对在整个动物的系统发育期间外源基因表达的研究更加深入.

毕赤酵母产β-1,3-1,4-葡聚糖酶发酵优化及酶学性质研究

对毕赤酵母表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶条件进行优化,在摇瓶水平上研究了温度、pH、甲醇流加量、诱导时间,油酸等因素对重组葡聚糖酶的影响;得优化条件为:最适温度30℃、pH6.0,最佳甲醇诱导浓度为0.5%,最佳诱导时间为84h,酶活力达27.4U/mL,比初始酶活力提高了1.9倍。酶反应的最适pH为6.0,最适温度为50℃。在pH3.5～8.0的范围内和温度55℃以下保存时具有较好的稳定性;其中,CaCl2对重组酶的激活效果显著,使酶活力提高达92%。

AMPK/SIRT1-PPARγ-PGC1α-BACE1信号通路及其相关因子在阿尔茨海默病病理改变中的作用

阿尔茨海默病(AD)是老年人常见的中枢神经系统退行性疾病,主要病理表现为β淀粉样蛋白(Aβ)积聚形成神经炎性斑、过度磷酸化的微管Tau蛋白形成神经元纤维缠结、神经元缺失和胶质增生,其中Aβ的生成和清除研究较多。大脑能量代谢异常可导致上述AD样病理变化,而AMP活化的蛋白激酶(AMPK)活化后可改善大脑能量代谢,通过抑制β位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达及活性,进而调节淀粉样前体蛋白的裂解,以减少Aβ的生成,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)也具有类似的作用。此外,AMPK与沉默信息调节因子1的激活及相互作用对PPAR-γ、PGC-1α的信号转导及生理功能起重要作用。