优化新生脉散方调控β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 基于β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路探讨优化新生脉散方对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、卡托普利组和中药低、高剂量组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃4周。超声心动图测定大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS),测定心、肺质量并计算心、肺脏器系数,组织病理学观察心肌纤维化程度,ELISA测定血清N端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)及心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)含量,免疫组化检测心肌组织β1肾上腺素受体(β1-AR)、cAMP阳性表达,Western blot检测心肌组织β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低(P<0.01),心、肺脏器系数明显升高(P<0.01);心肌细胞数目减少、胶原容积分数升高、Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比增加(P<0.01),血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量明显升高,心肌组织cAMP含量明显降低(P<0.01),心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达明显降低(P<0.01),β1-AR、腺苷酸环化酶(AC)1、cAMP、p-蛋白激酶A(PKA)、p-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达明显降低,p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,给药组不同程度增加大鼠LVEF、LVFS,降低心、肺脏器系数;增加心肌细胞数目、减少胶原容积分数和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比,下调血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量,上调cAMP含量,增加心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达,上调β1-AR、AC1、cAMP、p-PKA、p-CREB蛋白表达,抑制p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA蛋白表达,其中中药高剂量组和卡托普利组作用更明显(P<0.01,P<0.05)。结论 优化新生脉散方能减轻心力衰竭大鼠心肌纤维化程度,改善心肌肥厚和重构,增加左心室收缩力,其机制可能与激活β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

补阳还五汤通过cAMP/PKA/PPARγ通路调控脂质代谢抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

目的探究补阳还五汤通过cAMP/PKA/PPARγ通路调控脂质代谢抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机理。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、丁苯酞组及补阳还五汤低、中、高剂量组。采用短暂性大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型,补阳还五汤低、中、高剂量组予不同剂量补阳还五汤灌胃(6.413、12.825、25.65 g·kg^(-1)),丁苯酞(NBP)组予丁苯酞灌胃(54 mg·kg^(-1)),假手术组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续14 d。对大鼠进行神经行为学评分,HE染色观察大脑病理变化,试剂盒检测缺血侧磷酸胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、甘油二酯(DAG)、游离脂肪酸(FFA)含量,RT-qPCR和WesternBlot法检测环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)中mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分明显升高(P<0.01);缺血侧皮质出现病理形态损伤;PC、PE含量降低,DAG、FFA含量升高(P<0.01);cAMP的mRNA升高(P<0.05)。与模型组比较,补阳还五汤低剂量组神经功能缺损评分降低(P<0.05),补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组神经功能缺损评分明显降低(P<0.01);各给药组细胞排列相对规整,细胞间隙减小,正常细胞增多;补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组PC、PE明显升高,DAG、FFA明显降低(P<0.01);补阳还五汤低剂量组PC升高,FFA、DAG明显降低(P<0.05,P<0.01);补阳还五汤低剂量组PPARγ的mRNA表达升高(P<0.05),补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组cAMP、PKA、PPARγ的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与调控cAMP/PKA/PPARγ信号通路关键因子的表达,调节脂质代谢有关。

抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位的影响

目的通过抗纤益心方干预扩张型心肌病大鼠,探讨该药在扩张型心肌病心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位方面的作用。方法扩张型心肌病大鼠通过饮用呋喃唑酮复制,连续10周后通过心脏彩超确定模型复制成功,随机分为抗纤益心方低剂量组、抗纤益心方中剂量组、抗纤益心方高剂量组、卡托普利组和模型组,另设正常组。药物干预4周后观察各组大鼠心肌细胞超微结构;心肌细胞ATP、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力;心肌细胞CaMKⅡ、PKA、UCP2 mRNA表达。用去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞肥大模型,药物干预24 h后检测心肌细胞线粒体膜电位水平。结果与正常组相比,各模型组大鼠心肌细胞线粒体受损,心肌细胞ATP、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活力明显降低,UCP2 mRNA、CaMKⅡmRNA均明显升高,PKA mRNA明显降低,心肌线粒体膜电位水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。各药物干预组对心肌细胞线粒体有不同程度的保护作用,对所测指标有不同程度的改善,尤其以抗纤益心方高剂量组更为明显(P<0.05或P<0.01)。结论抗纤益心方可以减轻DCM模型大鼠心肌细胞线粒体损伤,改善心肌细胞能量代谢及舒缩功能,改善心肌细胞PKA/CaMKⅡ信号通路及线粒体膜电位水平是其机制之一。

柴胡皂苷A调节cAMP/PKA/CREB信号通路对失眠大鼠的改善作用及机制研究

目的基于cAMP/PKA/CREB通路探讨柴胡皂苷A对失眠大鼠的改善作用及机制。方法将75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、柴胡皂苷A低剂量组(0.625 mg·kg^(-1))、柴胡皂苷A高剂量组(2.500 mg·kg^(-1))、艾司唑仑组(0.1 mg·kg^(-1)),每组15只。采用腹腔注射苯丙氨酸(PCPA,0.1 mg·kg^(-1))复制失眠大鼠模型。观察大鼠一般情况及昼夜节律;采用戊巴比妥钠翻正实验测定大鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间;观测大鼠睡眠时相,记录慢波睡眠第1期(SWS1)、慢波睡眠第2期(SWS2)、快速眼球运动睡眠期(REMS)时长以及总睡眠时长(TST);qRT-PCR法测定下丘脑节律基因Clock、Bmal1 mRNA及钟控基因Rev-erbα、RorαmRNA的表达水平;免疫荧光法测定海马组织NeuN表达水平;ELISA法测定脑组织中的cAMP水平;Western Blot法测定脑组织中Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα及cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠昼伏夜出的节律紊乱,极度兴奋,易激惹,睡眠减少;睡眠潜伏期明显延长(P<0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显缩短(P<0.05);神经元排列紊乱,NeuN阳性神经元IOD值明显降低(P<0.05);脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、RorαmRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,给药组大鼠的攻击性明显减弱,昼伏夜出有节律性,活动减少,睡眠增多;睡眠潜伏期明显缩短(P<0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显延长(P<0.05);神经元排列紊乱情况有所恢复,NeuN阳性神经元IOD值明显升高(P<0.05);脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、RorαmRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论柴胡皂苷A可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路改善失眠大鼠的昼夜节律。

麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病大鼠炎性损伤的影响

目的:探究麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病(IBD)大鼠炎性损伤的影响。方法:将大鼠分为对照组、模型组、麦冬皂苷D低剂量组、麦冬皂苷D高剂量组和麦冬皂苷D高剂量+H-89(cAMP抑制剂)组。检测大鼠质量和大鼠结肠长度;酶联免疫吸附法检测血清IL-17、IL-6、IL-10、TNF-α、cAMP水平;流式细胞术检测大鼠外周血中Th17、Treg细胞比例;HE染色检测结肠组织病理损伤;Western blot检测大鼠结肠组织中Bax、Bcl-2以及cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果:治疗结束后,与对照组相比,模型组大鼠结肠组织显著损伤,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著降低,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,麦冬皂苷D低、高剂量组大鼠结肠组织显著减轻,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著升高,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);H-89可部分逆转麦冬皂苷D对炎症性肠病大鼠的治疗作用(P<0.05)。结论:麦冬皂苷D可降低IBD大鼠炎症反应和结肠组织损伤,可能是通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路实现的。

中医药从“阴阳失调”理论调控cAMP/PKA信号通路治疗注意缺陷多动障碍的研究进展

注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)难控制、易反复,严重损害儿童运动、情绪及学习生活。ADHD发病机制不明,涉及神经递质传递、神经炎症及氧化应激等,病机本质责之于“阴阳失调”。环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路的激活可诱导一系列蛋白底物磷酸化而参与运动及学习记忆的形成,并能促进神经递质合成,抑制促炎因子和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的释放而改善ADHD的核心症状,且该通路失调所导致的能量代谢障碍、神经冲动传递异常与中医“阴阳失调”理论不谋而合。中医药通过干预cAMP/PKA信号通路恢复阴阳平衡对儿童ADHD的防治发挥了重要作用,并有效解决了精神类药品在儿童中使用受限的问题。基于ADHD中医药研究的日益增多,本文阐述了cAMP/PKA信号通路的结构、传导及其与ADHD机制、中医病机及辨证分型的关系,归纳了中药复方、单体及单味中药干预cAMP/PKA信号通路治疗ADHD的研究现状,旨在为ADHD的中药药理学研究提供依据,丰富ADHD“阴阳失调”的中医理论内涵,为ADHD的防治提供新见解、新方向。

莫诺苷调节cAMP/PKA信号通路对帕金森病大鼠神经炎症的影响

目的探讨莫诺苷调节环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路对帕金森病大鼠神经炎症的影响。方法将30只大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组和莫诺苷组,每组各10只。大鼠颈背部皮下注射鱼藤酮构建帕金森病大鼠模型。莫诺苷组灌胃莫诺苷180 mg·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组灌胃等剂量0.9%氯化钠溶液,各组均每日1次,连续灌胃14 d。采用苏木精-伊红染色观察海马神经元组织学变化;各组大鼠腹腔注射0.5 mg/kg盐酸去水吗啡,诱发大鼠向左侧选择,记录大鼠旋转持续时间和旋转频率;以酶联免疫吸附试验测定脑组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、cAMP和PKA水平;采用实时荧光定量PCR法测定cAMP/PKA mRNA表达;采用蛋白质印迹法测定cAMP/PKA蛋白表达。结果模型组和莫诺苷组大鼠旋转频率和持续时间均高(长)于正常组,莫诺苷组大鼠旋转频率和持续时间均低(短)于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均高于正常组,莫诺苷组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA水平均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA水平均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA mRNA相对表达量均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA mRNA相对表达量均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA蛋白灰度值均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA蛋白灰度值均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论莫诺苷可减轻帕金森病大鼠神经炎症,其机制可能与激活cAMP/PKA信号通路有关。

心力衰竭与β-AR-PKA通路的关系及中医药研究进展

心力衰竭（HF）是大多数心血管疾病的最终归宿，是各种心脏结构或功能疾病损伤心室充盈或射血的结果．主要表现为呼吸困难和乏力的一种复杂的临床综合征，具有愈后差、病死率高的特点，也是心脏疾病患者最主要的死亡原因。近年来，大量动物实验研究表明在心脏功能的调节和心衰发生发展的过程中，β—AR都发挥了重要的作用。生理情况下，β—AR对心肌收缩和舒张活动起至关重要的作用，病理情况下，β—AR的长期激动可导致心肌细胞肥大、凋亡及心肌细胞坏死等，从而诱发心肌重塑性活动，与慢性心力衰竭的发病过程密切相关。随着研究的不断深入，在心衰大鼠β-AR—PKA通路的关系及中医药治疗研究方面积累了丰富的经验，现综述如下。

黄芪甲苷通过影响NogoA/NgR和cAMP/PKA通路改善APP/PS1转基因小鼠认知功能

目的:观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ, AST Ⅳ)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)模型小鼠认知功能障碍和病理改变的影响,并探讨可能的调控机制。方法:将APP/PS1转基因(APPswe/PSEN1d E9)小鼠随机分为AD+AST Ⅳ组和AD组,并以C57BL/6野生型(wild-type, WT)小鼠作为对照组(WT组),灌胃治疗两个月(n=8)。应用Morris水迷宫和Y迷宫实验评价小鼠空间认知功能(n=8),尼氏染色检测神经元数量与形态,免疫荧光染色观察神经元核抗原(neuronal nuclear antigen, NeuN)和β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein, Aβ)水平(n=4),Western blot法检测全脑组织中神经突生长抑制因子A(neurite outgrowth inhibitor A, NogoA)、Nogo-66受体(Nogo-66 receptor, NgR)、p75神经营养因子受体(p75 neurotrophin receptor, p75NTR)、含富亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1(leucine rich repeat and immunoglobin-like domain-containing protein-1, LINGO-1)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)和蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)的表达(n=4)。结果:AST Ⅳ能够显著缓解APP/PS1小鼠的认知功能障碍,提高其学习、记忆和探索功能。与WT组相比,APP/PS1小鼠大脑皮质区和海马区Aβ沉积增加(P<0.01),尼氏小体丢失严重(P<0.05或P<0.01),神经元数量减少(P<0.05);而AST Ⅳ可以显著减少Aβ沉积(P<0.05),减少尼氏小体丢失(P<0.05),增加神经元数量(P<0.05)。与WT组相比,APP/PS1小鼠脑组织NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达显著增加(P<0.05或P<0.01),cAMP和PKA表达显著减少(P<0.05或P<0.01);而AST Ⅳ可以显著抑制NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达(P<0.05或P<0.01),增加cAMP和PKA表达(P<0.05)。结论:AST Ⅳ通过抑制NogoA及NgR/p75NTR/LINGO-1受体复合物的表达,并上调cAMP/PKA通路,减少APP/PS1小鼠脑组织中Aβ沉积,减轻神经元损伤,从而改善认知功能和缓解学习障碍。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元的影响

目的探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡及环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法随机选取10只SD大鼠作为假手术组,取50只SD大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎法建立血管性痴呆模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、多奈哌齐组及醒脑益髓汤低、中、高剂量组,每组10只。假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,多奈哌齐组给予0.45 mg/mL的多奈哌齐溶液灌胃,醒脑益髓汤低、中、高剂量组分别给予0.98 g/mL、1.96 g/mL、3.92 g/mL的醒脑益髓汤灌胃,均1次/d,连续30 d。定位航行实验和空间探索实验观察大鼠行为学改变,TUNEL法检测海马CA1神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中cAMP及脑源性神经营养因子(BDNF)含量,Western blot法检测海马组织中PKA和CREB表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显减少(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显延长(P<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显缩短(P<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显增加,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,多奈哌齐组及醒脑益髓汤各组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显增加(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显缩短(P均<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显延长(P均<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显减少,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);醒脑益髓汤中剂量组各指标改善更明显,与醒脑益髓汤高、低剂量组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论醒脑益髓汤可以改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调控cAMP/PKA/CREB信号通路关键因子的表达,减少神经元凋亡有关。

清解止抽口服液对抽动障碍大鼠AC/cAMP/PKA信号通路的影响

目的:探讨清解止抽口服液对抽动障碍(TD)大鼠AC/cAMP/PKA信号通路的影响。方法:40只SD大鼠随机抽取30只腹腔注射亚氨基二丙腈(iminodipropionitrile,IDPN)7 d造模成TD大鼠,将30只TD大鼠随机分为B、C、D组,未造模处理的SD大鼠为A组。随后进行药物治疗,其中A组和B组灌胃灭菌蒸馏水,C组灌胃氟哌啶(haloperidol),D组灌胃清解止抽口服液,持续14 d。记录大鼠造模7 d和灌胃7、14 d的体质量、刻板行为评分、运动行为评分。治疗14 d后取大鼠纹状体检测DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量。结果:灌胃14 d,C、D组运动行为、刻板行为评分均低于B组(P<0.05)。B、C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量均低于A组(P<0.05)。C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量均高于B组(P<0.05)。C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:清解止抽口服液能够明显改善TD模型大鼠的运动行为和刻板行为,调节AC/cAMP/PKA信号通路代谢。

基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨加味葛根芩连汤对糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响

目的观察加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响,基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨其治疗糖尿病胰腺损伤的作用机制。方法将50只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中、低剂量组,每组10只。另取10只m/m小鼠作为空白组。加味葛根芩连汤高、中、低剂量组分别予加味葛根芩连汤31.9、19.1、6.4 g/kg灌胃,二甲双胍组予二甲双胍0.2 g/kg灌胃,空白组和模型组予蒸馏水灌胃,连续12周。给药结束后检测小鼠空腹血糖(FBG),进行口服葡萄糖耐量试验,检测小鼠糖化血红蛋白(HbA1c)含量,TUNEL法检测胰腺组织细胞凋亡情况,RT-qPCR检测胰腺组织G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)、蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、前蛋白转化酶1/3(PC1/3)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)mRNA表达,免疫组化法检测胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达,免疫荧光染色检测胰腺组织TGR5/GLP-1、神经源性分化因子1(NeuroD1)/GLP-1共表达。结果与空白组比较,模型组小鼠FBG、HbA1c含量显著升高(P<0.01),口服葡萄糖耐量显著降低;胰腺组织细胞凋亡率显著升高(P<0.01),TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著降低(P<0.01),TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著降低(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠FBG、HbA1c含量显著降低(P<0.01,P<0.05),口服葡萄糖耐量升高(P<0.01);各给药组小鼠胰腺组织细胞凋亡率显著降低(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠胰腺组织TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著升高(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著升高(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高剂量组胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论加味葛根芩连汤可能通过激活TGR5调节PKA/CREB/GLP-1信号通路,恢复db/db小鼠胰岛功能,改善胰腺损伤。

特立帕肽通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控高糖微环境下的成骨细胞分化

目的探讨特立帕肽对高糖微环境下小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)分化的影响及作用机制。方法将MC3T3-E1细胞分为正常糖组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)、NG+特立帕肽组(5.5 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)、高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖)、HG+特立帕肽组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)和HG+特立帕肽+PKA抑制剂组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽+20μmol/L H-89)。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA实验检测各组cAMP水平;试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;鬼笔环肽染色后观察细胞骨架;Real-time PCR检测细胞中PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达水平。结果各组细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。与NG组相比,NG+特立帕肽组细胞cAMP水平升高(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05);与NG组相比,HG组的上述检测结果则呈减弱趋势。与HG组相比,HG+特立帕肽组细胞cAMP水平上升(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05)。与HG+特立帕肽组相比,HG+特立帕肽+H-89组细胞cAMP水平下降(P<0.05),ALP活性减弱(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力减弱(P<0.05),细胞骨架清晰程度下降,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达下调(P<0.05)。结论特立帕肽可通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路有效改善高糖微环境对MC3T3-E1细胞分化的抑制作用。

咪达唑仑调节cAMP/PKA/CREB通路对乳腺癌细胞的影响

目的 探讨咪达唑仑对乳腺癌MDA-MD-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其对环磷酸腺苷(cyclicadenosine monophosphate,c AMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)信号通路的调节作用。方法 体外培养MDA-MD-231细胞并分为对照组、咪达唑仑L组、咪达唑仑M组、咪达唑仑H组和咪达唑仑H+Sp-cAMPS组,咪达唑仑L组、咪达唑仑M组、咪达唑仑H组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L咪达唑仑处理细胞,咪达唑仑H+Sp-cAMPS组加入20μmol/L咪达唑仑+10μmol/L Sp-cAMPS处理细胞。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测细胞的增殖能力;细胞划痕试验检测迁移能力;Transwell试验测定细胞的侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测c AMP的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)技术验证磷酸化(p-)PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达。结果 与对照组比较,咪达唑仑L组、咪达唑仑M组、咪达唑仑H组细胞呈现凋亡现象,凋亡率显著提高,细胞的增殖、迁移和侵袭能力及c AMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平显著下降(P<0.05);与咪达唑仑H组比较,咪达唑仑H+Sp-cAMPS组细胞生长状态良好,凋亡率显著降低,细胞的增殖、迁移和侵袭能力及cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平显著提高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制cAMP/PKA/CREB信号通路的激活抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

β3AR通路活化诱导FGF21表达促进白色脂肪组织棕色化

目的通过活化β3AR-PKA通路,探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)对白色脂肪组织(WAT)棕色化的影响。方法C57BL/6小鼠分别采用标准小鼠饲料(16只)及45%千卡脂肪高脂饲料(16只)喂养。12周后,标准饲料喂养小鼠随机分为2组:对照组(NC组)注射0.9%氯化钠溶液,注射CL316,243组(CL组)注射CL316,243(1 mg/kg);高脂饲料喂养小鼠随机分为2组:高脂饮食组(HFD组)注射0.9%氯化钠溶液,高脂饮食注射CL316,243组(HFD+CL组)注射CL316,243(1 mg/kg)。14周后,Western blot检测WAT蛋白激酶A(PKA)及棕色化相关蛋白(FGF21、PGC-1α及UCP1)表达;观察肝脏及脂肪组织病理学变化。培养3T3-L1前脂肪细胞,诱导成熟后分为3组:NC组,DMEM培养液;CL组,培养液+10μmol/L CL316,243;SU+CL组,培养液+50μmol/L SU5402+10μmol/L CL316,243。48 h后,检测蛋白激酶A(PKA)及棕色化相关蛋白表达,免疫荧光检测线粒体表达。结果与NC组比较,CL组PKA水平及棕色化相关蛋白升高;与CL组比较,HFD+CL组PKA水平及棕色化相关蛋白降低;而HFD+CL组相关蛋白表达高于HFD组。体外实验,与NC组比较,CL组及CL+SU组PKA水平显著升高;CL+SU组较CL组棕色化相关蛋白表达降低;免疫荧光结果显示,与NC组比较,CL组线粒体表达增多;而SU+CL组线粒体表达较CL组减少。结论活化β3AR-PKA通路可增加WAT中FGF21分泌,进而上调PGC-1α及UCP1表达,促进WAT棕色化。

天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响

目的:探索天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠80只,剔除后随机分为空白组、模型组、天心解郁组、西药组、疏肝组、温肾组和疏肝健脾组7组,每组10只。除空白组外,其余组别按照慢性利血平诱导抑郁模型的方法造模28 d,造模前30 min给药,分别灌胃给药饮用水、天心解郁水煎液、氟西汀溶液、路优泰溶液、巴戟天寡糖胶囊溶液、舒肝解郁胶囊溶液,给药28 d后对各组大鼠的体质量、行为学指标、血清学细胞因子、脑组织相关靶点进行检测。结果:造模28 d后,与模型组相比,天心解郁组旷场实验水平运动得分、垂直运动得分和总路程的增加(P<0.05),强迫游泳不动时间的缩短(P<0.001),且较温肾组、疏肝组、疏肝健脾组更明显。与模型组相比,天心解郁组和温肾组可以增加大鼠血清内的CAMP含量(P<0.001,P<0.01),其余组别则无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,天心解郁组可以增加皮层内的PKA表达,促进海马内CREB、BDNF、ADRB2蛋白表达。与模型组相比,温肾组可以增加皮层内的PKA水平,其余组别无明显影响。结论:天心解郁方可能通过影响大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路,发挥抗抑郁作用,较单纯疏肝、温肾或疏肝健脾的方法,疗效更好,治疗靶点更多元化。

cAMP/PKA⁃pCREB信号通路在早期康复训练改善脑卒中患者神经功能中的作用

目的研究环腺苷酸(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)⁃磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)信号通路在早期康复训练改善脑卒中患者神经功能中的作用。方法将缺血性脑卒中患者分为进行早期康复训练的观察组、常规康复训练的对照组,干预前及干预后1周时采用简易智能精神状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、Fugl⁃Meyer运动功能量表(FMA)、Berg平衡量表(BBS)评价神经功能,检测血清cAMP、PKA、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃1β(IL⁃1β)、白介素⁃6(IL⁃6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化力(TAOC)、B淋巴细胞瘤⁃2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶⁃3(Caspase⁃3)含量及外周血pCREB表达水平。结果两组干预后的MMSE、MoCA、FMA、BBS评分均高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=5.099、3.778、2.658、3.502,P<0.05),血清cAMP、PKA及外周血pCREB表达水平均高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=3.858、3.958、8.815,P<0.05),血清TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6含量均低于组内干预前且观察组低于对照组,差异有统计学意义(t=10.338、9.395、5.936,P<0.05),血清MDA含量低于组内干预前且观察组低于对照组、SOD及TAOC含量高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=5.272、3.714、4.753,P<0.05),血清Bax及Caspase⁃3均低于组内干预前且观察组低于对照组,Bcl⁃2含量高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=18.669、11.346、9.903,P<0.05)。结论早期康复训练改善脑卒中患者神经功能的作用与激活cAMP/PKA⁃pCREB信号通路并抑制炎症反应、氧化应激、细胞凋亡有关。

从cAMP/PKA/CREB信号通路探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆模型大鼠海马神经元的影响

目的:从cAMP/PKA/CREB信号通路探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马神经元凋亡的影响。方法:将60只大鼠随机分为假手术组和造模组,其中假手术组10只,造模组50只。假手术组仅分离动脉,不结扎;造模组采用双侧颈总动脉永久结扎法(2VO)建立血管性痴呆大鼠模型,随机分为5组,分别为:生理盐水组、多奈哌齐组、醒脑益髓汤低、中、高剂量组,给予生理盐水、多奈哌齐及不同剂量中药灌胃30天后,通过定位航行实验和空间探索实验观察大鼠行为学改变,用TUNEL法检测海马CA1神经元凋亡,用Elisa法检测神经元环磷酸腺苷(cAMP)及激酶A(PKA)含量,用Western Blot检测环磷酸腺效应元件结合蛋白(CREB)和下游脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果:与假手术组大鼠比较,造模组大鼠出现在平台所在象限的次数及游泳时间均增加(P<0.01),海马CA1神经元凋亡细胞明显增加,cAMP、PKA、CREB及BDNF的蛋白表达水平明显下调(P<0.01);与模型组比较,多奈哌齐组和醒脑益髓汤低、中、高剂量组大鼠的学习记忆能力明显提高,海马CA1神经元凋亡细胞减少,cAMP、PKA、CREB及BDNF蛋白水平上调(P<0.01),其中以醒脑益髓汤中剂量组效果最佳(P<0.01)。结论:醒脑益髓汤可以改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,其机制可能与其可以调控cAMP/PKA/CREB信号通路关键因子的表达,减轻神经元凋亡有关。

RND3对雨蛙素诱导的大鼠AR42J细胞损伤的影响

目的:观察干预RND3对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J损伤的影响,并探究RND3在急性胰腺炎(AP)中的调控机制。方法:分别构建RND3沉默和过表达的雨蛙素诱导的AR42J细胞AP模型,共6组(NC对照组、雨蛙素处理组、si-con阴性对照组、pcDNA阴性对照组、si-RND3沉默组和pcDNA-RND3过表达组)。qRT-PCR和Western blot分别在雨蛙素给药后的0 h、4 h、8 h、12 h和24 h检测AR42J细胞中RND3 mRNA、蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞的存活情况和LDH漏出量,流式细胞术检测AR42J细胞的凋亡率,qRT-PCR检测相关炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18)的mRNA表达水平,Western blot检测AR42J细胞中凋亡相关蛋白(GSDMD、NLRP3、Cleaved caspase-1和caspase-1)表达。结果:雨蛙素诱导的AR42J细胞能抑制RND3 mRNA和蛋白表达,且随着雨蛙素处理时间延长,其对RND3的抑制作用越显著;相比NC对照组,siRND3组、雨蛙素处理组大鼠AR42J细胞中的相关炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18表达上调(P<0.05),同时,凋亡相关蛋白GSDMD、NLRP3、Cleaved caspase-1和caspase-1表达升高(P<0.05);相反,pcDNA-RND3过表达组细胞炎症和凋亡水平显著降低(P<0.05)。结论:RND3可减轻大鼠胰腺腺泡细胞AR42J的炎症反应和细胞凋亡,其作用机制与NLRP3/caspase-1/GSDMD通路的活性有关。

香砂六君子丸对脾虚痰浊大鼠小肠组织cAMP/PKA信号通路的影响

目的:通过观察香砂六君子丸对脾虚痰浊证大鼠小肠c AMP/PKA信号通路的影响,探讨香砂六君子丸治疗脾虚痰浊证大鼠可能机制。方法:24只SD大鼠,随机分为空白对照组、脾虚痰浊组、香砂六君子丸治疗组(以下简称治疗组),每组8只。采用高脂饲料喂养大鼠复制脾虚痰浊证动物模型,14 d后,治疗组采用香砂六君子丸灌胃治疗,空白对照组和脾虚痰浊模型组予等量生理盐水灌胃。灌胃60 d后采用ELISA法检测血浆中c AMP浓度,RT-PCR和Western blot检测大鼠小肠GP、PHK和PKA mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,脾虚痰浊组小肠c AMP活性显著降低,与脾虚痰浊组相比,治疗组小肠c AMP活性显著升高;与空白对照组相比,脾虚痰浊组GP、PHK、PKA mRNA和蛋白含量显著下降,与脾虚痰浊组相比,治疗组GP、PHK、PKA mRNA和蛋白含量显著上升。结论:香砂六君子丸可能通过调控c AMP/PKA信号通路影响脾虚痰浊证大鼠。