压力负荷增加大鼠模型心肌α-MHC和β-MHC mRNA的表达

目的:肌球蛋白重链(α-MHC)基因与心肌肥厚的关系在分子遗传学水平的研究多有报道。文中观察压力负荷增加大鼠心肌α-MHC和-βMHC mRNA表达的变化,探讨腹主动脉缩窄法致压力负荷增加大鼠模型心肌肥厚的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组和模型组,利用腹主动脉缩窄法制备压力负荷增加大鼠模型,造模8周后观察左心室质量指数、左心室心肌细胞超微结构的改变;采用RT-PCR的方法检测心肌组织中-αMHC、-βMHC基因表达。结果:模型组左心室心肌质量指数较假手术组显著升高(P<0.05),电镜切片显示线粒体变性,肌浆网扩张;肌原纤维变性,模型组左心室心肌组织-αMHC mRNA表达较假手术组下降(P<0.05),左心室心肌组织β-MHC mRNA表达较假手术组升高(P<0.05)。结论:压力负荷增加大鼠在造模8周形成左心室肥厚的病理生理改变,且这种改变可能通过心肌α-MHC向β-MHC转化来实现。

益心泰方对慢性心力衰竭兔心肌组织β-MHC mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨益心泰方对慢性心力衰竭(chronic heart failure, CHF)兔模型心肌组织β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC) mRNA及其蛋白表达的影响。方法采用缩窄腹主动脉法+丙基硫氧嘧啶灌胃建立CHF兔模型。将成模家兔随机分成模型组、益心泰低剂量组、益心泰中剂量组、益心泰高剂量组及氯沙坦钾组,另设假手术组。每组分别予以相应药物灌胃,模型组及假手术组予以生理盐水灌胃,每日1次,连续灌胃4周。采用ELISA法检测心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide, BNP)水平;超声心动图仪检测心功能指标;采用Western blot法测检测心肌组织β-MHC蛋白含量;RT-PCR法测定β-MHC mRNA表达,并运用透射电镜观察心肌病理组织结构。结果与假手术组比较,模型组ANP、BNP水平明显升高(P<0.01);左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、E峰与A峰的比值(E/A)显著降低(P<0.01);β-MHC蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.01);在电镜下观察,模型组心肌出现水肿、坏死等损伤表现。与模型组比较,各给药组ANP、BNP水平均显著下降(P<0.05);各给药组LVEF、LVFS、E/A均显著升高(P<0.05);各给药组β-MHC蛋白及β-MHC mRNA水平均显著降低(P<0.05);在电镜下观察,各给药组心肌细胞损伤程度均得到改善。与益心泰低剂量组比较,益心泰中、高剂量组及氯沙坦钾组的上述检测指标均优于低剂量组(P<0.05)。结论益心泰方可有效抑制心肌组织β-MHC蛋白及mRNA表达,降低ANP及BNP,改善心功能,从而发挥防治CHF的作用。

牵张激活心肌细胞NF-κB及其调控β-MHC基因表达的研究

目的 探讨牵张刺激引起心肌细胞 β- MHC基因重新表达的机制。方法 在硅橡胶模上培养心肌细胞并施加牵张刺激 ,用免疫组织化学方法观测 NF- κB的激活情况 ,并用图像分析法检测 NF- κB在激活与未激活状态下 β- MHC蛋白的含量。结果 1心肌细胞受到应变为 2 0 %的牵张刺激 5小时后 ,NF- κB被显著激活 ,从胞浆移位入胞核。 2牵张组心肌细胞与对照组、NAC(N-乙酰半胱氨酸 )组和牵张 + NAC组心肌细胞相比 ,β- MHC含量明显增加 ,其它 3组 β- MHC含量无明显差异。结论 NF- κB信号传导系统参与了牵张诱导的 β- MHC基因表达的调控。

补中益气法对甲减大鼠心肌α-MHC和β-MHCmRNA表达的影响

目的:研究补中益气法对甲状腺功能减退(甲减)大鼠心肌肌球蛋白重链α和β(myosin heavy chain alpha and beta,α-MHC和β-MHC)mRNA表达的影响。方法:将甲减Wistar大鼠随机分为模型对照组、L-T4组、补中益气汤组。实时定量RT-PCR法测心肌α-MHC和β-MHC mRNA。结果:给处理因素8周,L-T4组、补中益气汤组的α-MHCmRNA的表达分别为正常组的1.77倍、2.32倍,补中益气汤组较L-T4组上升明显(P<0.05);L-T4组、补中益气汤组β-MHCmRNA的表达分别为正常组的2.61倍、1.17倍,补中益气汤组下调明显(P<0.05)。结论:补中益气法在甲减心肌损伤的修复中起重要作用,其机制与其提高心肌α-MHC mRNA的表达、降低β-MHCmRNA的表达有关。

卡托普利对压力负荷增加大鼠心肌α-MHC和β-MHC mRNA表达的影响

目的观察卡托普利对压力负荷增加大鼠心肌α-MHC和β-MHC mRNA表达的影响,探讨卡托普利逆转心肌肥厚的作用机制。方法 36只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、卡托普利组。采用RT-PCR的方法检测大鼠心肌组织中α-MHC、β-MHC基因表达。结果模型组大鼠左室心肌组织α-MHC mRNA表达较假手术组下降(P<0.05),卡托普利组左室心肌组织α-MHC mRNA表达较模型组显著升高(P<0.05)。模型组大鼠左室心肌组织β-MHC mRNA表达较假手术组升高(P<0.05),卡托普利组左室心肌组织β-MHC mRNA表达较模型组下降(P<0.05)。结论卡托普利增加α-MHC基因表达,降低β-MHC基因表达,可能与其逆转心肌肥厚作用相关。

扶正软坚散结法对甲减大鼠心肌α-MHC和β-MHCmRNA表达的影响

目的:研究扶正软坚散结法对甲状腺功能减退大鼠心肌肌球蛋白重链α和β(简称α-MHC和β-MHC)mRNA表达的影响。方法:将甲减Wistar大鼠随机分为模型对照组、L-T4组、芪贝复元饮组。正常对照组:普通饮食,双蒸水;模型对照组:低碘饮食,双蒸水。双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法(ELISA法)测大鼠血清促甲状腺激素(TSH),放射免疫分析法(RIA法)测大鼠血清总T3(TT3)、总T4(TT4)。砷铈分光光度法测定尿碘。光镜下观察心肌细胞形态。实时定量RT-PCR法测心肌组织α-MHC和β-MHC mRNA的表达。结果:56天(8周)时,与模型组比较,予处理因素的L-T4组和芪贝复元饮组大鼠血清TT3值均升高(P<0.01),但两组之间比较无差异;血清TT4值均升高(P<0.001),二组之间比较无差异;TSH值明显降低(P<0.01),两组之间比较有差异(P<0.05),芪贝复元饮组优于L-T4组。L-T4组、芪贝复元饮组的α-MHCmRNA的表达分别为正常组的1.77倍、2.03倍,与模型组比均有上升,芪贝复元饮组较L-T4组上升明显;L-T4组、芪贝复元饮组β-MHCmRNA的表达分别为正常组的2.61倍、1.22倍,与模型组比均有下调,均未降低至正常水平,芪贝复元饮组下调明显。结论:扶正软坚散结法在甲减心肌损伤的修复中起着重要的作用,与提高心肌α-MHCmRNA的表达,降低β-MHCmRNA的表达有重要的关系。

高糖引起H9C2心肌细胞增殖并高表达GATA4及β-MHC

目的:探讨不同高糖浓度培养H9C2细胞导致心肌细胞增殖改变及可能机制。方法:体外培养H9C2大鼠心肌细胞分为6组,A-C组分别为:5 mmol/L、25 mmol/L、50 mmol/L葡萄糖培养基,各培养48 h;D-F组分别为:5 mmol/L、25 mmol/L、50 mmol/L葡萄糖培养基,各培养72 h。MTT法检测H9C2细胞增殖;q PCR法及Western blot法检测β-重链肌球蛋白(β-MHC)、GATA4的mRNA及蛋白表达。结果:OD值分别在培养48 h的A、B、C组及72 h的D、E、F组呈阶梯上升,C、F组达到各自时段的最高点;同一葡萄糖浓度培养基培养48 h.和72 h后发现培养时长为72 h的OD值高于48 h。A、B、C组GATA4、β-MHC的mRNA及蛋白表达逐步升高,C组达最高;D、E、F组GATA4、β-MHC的mRNA及蛋白表达逐步升高,F组达最高。结论:高糖引起H9C2心肌细胞增殖并高表达GATA4、β-MHC。

淫羊藿苷对MSCs表达α-MHC和β-MHC的诱导条件研究

目的寻找淫羊藿苷(ICA)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的最佳诱导时间和浓度。方法把MSCs随机分为6组,即正常对照组、4个浓度的ICA组(10-6,10-7,10-8,10-9mol/L)、5-氮胞苷(5-Aza)组,每组又分为4个诱导时间组,即24 h+1 d、24 h+1周、48 h+1 d、48 h+1周。利用RT-PCR方法检测各组的α-心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β-心肌肌球蛋白重链(β-MHC)表达量。结果与其他时间组相比,ICA(10-7mol/L)在培养24 h+1周时,α-MHC和β-MHC表达最高。结论 ICA(10-7mol/L)与MSCs共同培养24 h+1周时,能更好地促进α-MHC和β-MHC的表达。

PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用

目的 探讨PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中的作用.方法 选取8～10周龄的雄性C57BL/6小鼠20只,体重23～28 g,随机分为2组,每组各10只,分别施以主动脉缩窄术（TAC组）和假手术（Sham组）.术后4周应用超声心动图评价小鼠的心脏功能,应用心脏重量与体重之比（HW/BW）定量评价心肌肥厚程度.Real-time PCR检测心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC （Myh7）的mRNA水平,同时检测PCBP2 mRNA水平.Western blot方法检测Nppa、β-MHC及PCBP2的蛋白水平.比较分析两组之间的差异.结果 与Sham组相比,TAC组小鼠的心肌肥厚程度明显增加[TAC组（8.23±1.88）mg/g比Sham组（4.89±0.68）mg/g],左心室射血分数[TAC组（41.38±2.22）％比Sham组（59.15±3.58）％]及短轴收缩率[TAC组（33.61±0.92）％比Sham组（43.87±1.37）％]明显降低（P＜0.05）.TAC组的心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC的mRNA水平及蛋白水平均明显高于Sham组（P＜0.05）.然而,TAC组PCBP2mRNA水平及蛋白水平却明显低于Sham组（P＜0.05）,与心肌标志物Nppa、β-MHC的变化趋势相反.结论 PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中起着负性调节作用,上调PCBP2表达可能会抑制心肌肥厚的发展.

小鼠不同心肌肥厚模型标志性基因表达变化的比较

目的探索小鼠不同心肌肥厚模型间肥厚性标志基因心房利尿钠肽(ANP)、脑利尿钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)基因表达的差异。方法取C57BL/6小鼠,采用肾上腹主动脉缩窄(AAC)、动静脉瘘(AVF)和异丙肾上腺素(ISO)分别建立小鼠心肌肥厚模型。造模结束,称取各小鼠体重(BW)、心脏重量(HW)和左室重量(LVW),计算心脏重量指数(HW/BW)和左心室指数(LVW/BW);HE染色观察心肌病理组织形态学变化;免疫组织化学染色观察心肌组织ANP、BNP和β-MHC蛋白表达;采用Real-time PCR检测心肌ANP、BNP和β-MHC mRNA表达。结果与对照组比较,3种模型的HW/BW和LVW/BW升高,光镜下观察各模型小鼠心肌呈现不同程度的肥厚性变化,ANP、BNP和β-MHC在蛋白和mRNA表达水平均不同程度增加;与AAC组比较,AVF和ISO组心肌组织ANP、BNP和β-MHC在蛋白和mRNA表达水平均降低。结论 3种心肌肥厚模型造模成功,AAC模型心肌组织在同时表达肥厚性标志基因ANP、BNP和β-MHC时优于AVF和ISO。

KN-93对肥大心肌细胞β-肌球蛋白重链及心钠素表达的影响

目的探讨钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN-93对大鼠心肌细胞肥大β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA和心钠素(ANF)mRNA表达的影响。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何处理)、神经肽Y(NPY)组(100 nmol/L NPY)、KN-93组(100 nmol/L NPY+10μmol/L KN-93),分别作用心肌细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜记录心肌细胞核钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡδ蛋白表达及荧光定量PCR检测心肌细胞β-MHC mRNA和ANF mRNA的表达。结果 NPY刺激心肌细胞24 h后核钙离子浓度、CaMKⅡδ蛋白表达及β-MHC mRNA和ANF mRNA表达明显增加。KN-93可抑制上述效应。结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可抑制NPY诱导β-MHC mRNA、ANF mRNA表达。

小鼠β_2m基因打靶载体的构建及序列分析

目的 采用分子生物学技术 ,构建小鼠 β2 m基因打靶载体 ,为下一步进行胚胎干细胞基因敲除、建立β2 m基因缺陷型干细胞奠定基础。方法 通过设计和合成引物 ,经PCR从小鼠 β2 m pSV2ΔHXgpt基因组克隆分别扩增小鼠 β2 m的 4 2kb和 0 8kb片段作为同源臂 ,将其分别插入载体pPNT的neo基因两侧 ,构建小鼠 β2 m基因替换型打靶载体pPNT β2 m。结果 经过PCR、限制性酶酶切鉴定 ,以及DNA序列分析 ,证实此两条同源臂为包含小鼠 β2 m前三个外显子在内的基因片段 ,证明载体构建成功。结论 PCR法构建基因打靶载体是新颖。

家族性肥厚型心肌病β型肌凝蛋白重链基因突变研究

1990年Tanigawa等连续报道了β-MHC的错义突变与FHC有关,这些突变集中在β-MHC的10个外显子,即外显子5,9,13,14,15,16,19,20,21,23.本文设计了9对PCR引物,限制性扩增β-MHC基因突变集中发生的9个外显子,用两轮扩增提高扩增产量,两步扩增法提高扩增产物的特异性.产物在中性聚丙烯酰胺上电泳进行SSCP分析.对6个肥厚型心肌病家系进行了β-MHC突变分析,结果显示,6个肥厚型心肌病家系中无一个家系找到β-MHC突变,表明突变的机率比国外报道的明显的低.

布氏田鼠和青海田鼠自然种群鼠疫抗性差异

目的以MHC class Ⅱ gene β基因为分子标记研究布氏田鼠和青海田鼠自然种群鼠疫抗性差异的遗传基础。方法对布氏田鼠和青海田鼠进行鼠疫菌攻毒试验,并对死亡和存活的两种田鼠MHC class Ⅱ gene β基因酶切后的等位基因频率和基因型频率进行比较分析。结果布氏田鼠种群鼠疫抗性个体Rsa Ⅰ E和Rsa Ⅰ F等位基因较高的频率具有重要统计学意义(抗性个体:0.3095、0.2738;易感个体:0.0571、0.0286);青海田鼠种群鼠疫抗性个体Rsa Ⅰ F等位基因较高的频率具有重要统计学意义(抗性个体:0.3704;易感个体:0.0682)。对布氏田鼠和青海田鼠MHC class Ⅱ gene β基因纯合型序列分析显示,青海田鼠和布氏田鼠MHC class Ⅱ gene β基因有68个多态(变异)位点,占26.1%;其中布氏田鼠39个,青海田鼠27个,二者存在12碱基的差异。序列分析显示,布氏田鼠MHC class Ⅱ gene β基因在第27、53、63、70、91、126、127、128、129、160、213、214、215位碱基上存在多态性;而青海田鼠在第27、53、63、126、127、128、129、160、213、214、215位碱基上存在多态性。Rsa Ⅰ酶切揭示,青海田鼠的MHCclass Ⅱ gene β基因缺少等位基因E,多态性低于布氏田鼠,这可能是两自然种群鼠疫抗性差异的分子机制。结论 MHC class Ⅱ gene β基因多态性可能与布氏田鼠和青海田鼠鼠疫抗性存在相关性;MHC class Ⅱ gene β基因和其他未确定的鼠疫抗性标记可为研究宿主进化和疾病动力学提供有用的生物学信息。

小鼠β_2m正反义核酸表达载体转染NIH3T3细胞后的表达

目的 :探讨小鼠 β2 m正、反义核酸表达载体pcDNA3- β2 mSN和pcDNA3- β2 mAN对NIH3T3细胞表达β2 m的影响 ,为降低MHCⅠ类分子表达的研究提供新方法和实验依据。方法 :本研究应用分子生物学技术 ,构建小鼠 β2 m正、反义核酸表达载体pcDNA3- β2 mSN和pcDNA3- β2 mAN ,用脂质体转染NIH3T3细胞。经过RT -PCR及Westernblot检测 ,观察正、反义核酸对细胞 β2 mmRNA和蛋白表达的影响。结果 :小鼠 β2 m正、反义核酸表达载体成功导入NIH3T3细胞中 ,且有效表达 ,转染正义核酸的细胞 β2 mmRNA和蛋白表达水平升高 ,而转染反义核酸则 β2 mmRNA和蛋白表达水平降低。结论 :小鼠 β2 m反义核酸表达载体pcDNA3- β2 mAN可以降低NIH3T3细胞 β2 m基因的表达 ,本研究结果为降低MHCⅠ类分子的表达。

补肾复方对压力负荷增加大鼠心肌α-MHC和β-MHC基因表达的影响

目的:观察补肾复方对压力负荷增加大鼠心肌α-MHC和β-MHC基因表达的影响,探讨补肾复方逆转心肌肥厚的作用机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、卡托普利组、补肾复方大剂量组、补肾复方小剂量组。造模4周后,再药物干预4周。采用RT-PCR的方法检测大鼠左室心肌组织中α-MHC、β-MHC基因表达。结果:模型组大鼠左室心肌组织α-MHC mRNA表达较假手术组下降(P<0.05),与模型组比较,卡托普利组、补肾复方大剂量组、小剂量组左室心肌组织α-MHC mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。模型组大鼠左室心肌组织β-MHC mRNA表达较假手术组升高(P<0.05),与模型组比较,卡托普利组、补肾复方大剂量组、小剂量组左室心肌组织β-MHC mRNA表达下降(P<0.05)。结论:补肾复方可增加α-MHC基因表达,降低β-MHC基因表达,具有逆转心肌肥厚的作用。

小鼠β_2m反义核酸重组荧光蛋白表达载体的构建及表达研究

本研究应用分子生物学技术 ,构建小鼠 β2 m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP β2 mAN ,经过酶切、PCR鉴定 ,以及序列分析证实克隆的正确性。然后用脂质体转染NIH3T3细胞 ,经过RT PCR及Westernblot检测 ,观察重组质粒对细胞β2 mmRNA和蛋白表达的影响 ,同时在荧光显微镜下直接观察细胞转染的结果。结果证明pEGFP β2 mAN已成功导入NIH3T3细胞中 ,且有效表达 ,在荧光显微镜下可见梭形绿色荧光细胞 ;与同步转染的小鼠 β2 m正、反义核酸表达载体pcDNA3 β2 mSN、pcDNA3 β2 mAN的转染结果一起进行分析 ,转染pcDNA3 β2 mSN细胞的 β2 mmRNA和蛋白表达水平升高 ,而转染pcD NA3 β2 mAN和pEGFP β2 mAN的细胞 β2 mmRNA和蛋白表达水平降低。小鼠 β2 m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP β2 mAN的转染结果显示 :它不但可以降低NIH3T3细胞 β2 m基因的表达 ,而且为观察脂质体转染效果提供了直观。

微小RNA-499对脓毒症心功能障碍大鼠肌球蛋白重链的影响

目的:探讨微小RNA-499(miR-499)调节α型和β型肌球蛋白重链(α-MHC、β-MHC)在脓毒症心功能障碍(SMD)中的作用及机制。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠,体质量约200~250 g,随机分组为假手术组(sham组)、SMD模型组[脂多糖(LPS)组)]和miR-499激动剂组(LPS+anomir组),使用腹腔注射LPS(10 mg/kg)诱发脓毒症心功能不全建立模型,干预组在大鼠造模前连续3 d通过尾静脉给予注射miR-499激动剂(anomir:30 mg/kg)进行干预。采用超声心动仪测量左心室射血分数(EF)和短轴缩短率(FS),采用定量聚合酶链反应(QPCR)检测miR-499、α-MHC、β-MHC基因水平,采用蛋白质免疫印迹试验检测α-MHC、β-MHC的蛋白表达量,采用电化学发光仪及其专用试剂盒测定血浆NT-proBNP浓度。结果:LPS刺激后大鼠血浆和心肌组织中miR-499的表达下调(P<0.01)、α-MHC mRNA及其蛋白的表达水平下降(P<0.001),β-MHC mRNA及其蛋白的表达水平显著升高(P<0.01),左心室射血分数下降(P<0.01),血浆NT-proBNP浓度升高(P<0.001)。通过静脉注射miR-499的模拟物(agomir)过表达miR-499的水平后发现,大鼠β-MHC/α-MHC的失调被逆转,左心室射血分数增高(P<0.01),血浆NT-proBNP浓度下降(P<0.001)。结论:miR-499能通过调节α-MHC、β-MHC的表达水平,改善脓毒症引起的大鼠心功能障碍,靶向miR-499可以成为治疗脓毒症引起的心脏功能障碍的有效途径。