含α-Arrestin结构域蛋白3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的探讨含α-Arrestin结构域蛋白3(ARRDC3)基因在人脑胶质瘤组织中的表达水平及其临床意义。方法使用中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库与癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析脑胶质瘤患者的临床资料及其基因表达情况。收集2018年1月至2021年12月徐州医科大学附属医院神经外科收治的9例原发性脑胶质瘤患者的脑胶质瘤组织标本,免疫组织化学实验检测ARRDC3在不同分级胶质瘤中的表达水平。应用非参数检验分析ARRDC3在不同分子类型、不同分级胶质瘤中的表达水平;通过Kaplan-Meier生存曲线分析ARRDC3表达对脑胶质瘤患者生存时间的影响;应用单因素和多因素Cox回归分析ARRDC3的表达对胶质瘤患者预后的影响。结果CGGA和TCGA数据库中的数据显示,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级人脑胶质瘤中ARRDC3基因的表达逐渐升高(P<0.05);免疫组织化学染色实验结果与其一致。异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型胶质瘤患者中,ARRDC3基因表达水平显著高于IDH突变型患者(P<0.05);ARRDC3高表达组患者的中位生存期显著短于ARRDC3低表达组(P<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,年龄、IDH突变状态、放射治疗、ARRDC3表达情况是人脑胶质瘤患者预后的危险因素(P<0.05)。结论人脑胶质瘤组织中ARRDC3的相对表达量随着肿瘤组织病理分级的上升逐渐升高;ARRDC3低表达的脑胶质瘤患者的预后明显好于高表达患者;ARRDC3可能成为预测胶质瘤患者预后的指标之一。

β-arrestins影响肿瘤侵袭转移的相关分子机制

Arrestins家族是包括多个成员的支架蛋白，按照序列同源性与组织分布的不同被分为两种的亚型：一种是visualrodarrestin（Santigen）和conearrestin（C-或者X—arrestin），另一种是β—arrestins（β—arrestin-1和β—arrestin一2），最近，另一组arrestin结构域蛋白α—arrestin也被归人此家族。虽然视杆和视锥arrestins在视神经系统中分别局限于视杆和视锥细胞，但是β—arrestins的表达却无所不在。

β2AR、β-arrestin2、NF-κBp65在溃疡性结肠炎大鼠中的表达及乌梅丸的干预作用

目的:检测溃疡性结肠炎大鼠在药物治疗前后β2AR、β-arrestin2、NF-κBp65的表达水平.方法:SD大鼠随机分为4组:空白组、模型组、美沙拉秦西药组和乌梅丸中药组.模型成功建立后空白组和模型组以生理盐水3mL灌胃,美沙拉秦组用50g/L的美沙拉秦混悬液50mg/100g灌胃,乌梅丸组给予0.515g/mL的乌梅丸液3mL灌胃,各组均连续给药15d后,取脾脏和结肠组织分别用Westernblot法和免疫组织化学法检测β2AR、β-arrestin2、NF-κBp65的表达.结果:在正常组织中β2AR、β-arrestin2的表达较多(15.28%±1.71%,15.28%±1.58%),模型组二者的表达明显下降(12.54%±1.28%,12.67%±1.42%),经治疗后,乌梅丸组和美沙拉秦组中二者的表达显著增加(16.27%±1.40%,16.18%±1.12%;17.05%±1.48%,16.77%±1.40%),免疫组织化学法检测显示表达率有统计学意义.而NF-κBp65在正常组织中表达较少,模型组NF-κBp65的表达明显增加(17.79%±1.24%),经药物治疗后其在乌梅丸组和美沙拉秦组中表达明显下降(16.61%±1.42%,15.39%±1.21%),免疫组织化学法检测显示表达率有统计学意义.结论:对于溃疡性结肠炎的治疗,乌梅丸和美沙拉秦均有明显疗效.

CCR5在炎症性肠病患者肠黏膜的表达及其与β-arrestin2表达的关系

目的:通过分析CCR5在炎症性肠病(IBD)患者活检肠黏膜的表达及其与β-arrestin 2表达的相关性,探讨CCR5与β-arrestin 2在IBD发病中的作用。方法:IBD活动期组53例、IBD缓解期组26例和正常对照组30例纳入研究,用En Vision二步免疫组化方法检测活检肠黏膜CCR5和β-arrestin 2的表达。结果:IBD活动期组CCR5阳性表达率及免疫组化评分均高于正常对照组和IBD缓解期组(P<0.05),CCR5表达与IBD活动期组的临床严重程度、病变范围及内镜下分级无明显关联性;β-arrestin 2在IBD活动期组的阳性表达率均明显低于IBD缓解期组和正常对照组(P<0.05),并且在IBD活动期β-arrestin 2表达与CCR5表达呈负相关性(P<0.05)。结论:在IBD活动期组肠黏膜CCR5呈高表达,β-arrestin 2呈明显低表达,CCR5与β-arrestin 2表达呈负相关性。

大黄丹参上调β-arrestin基因表达阻止大鼠实验性急性胰腺炎重症化进程

目的:探讨生大黄和丹参通过上调β-arrestin基因表达,进而影响大鼠实验性急性胰腺炎重症化进程的作用机理。方法:建立SD大鼠实验性重症急性胰腺炎模型,分为正常组(SO)、实验对照组(SAP)、大黄丹参干预组(DD),检测脾脏组织中β-arrestin mRNA的表达、肝脏组织TRAF6蛋白含量水平、胰腺组织中NF-κBp65蛋白表达的水平。结果:SAP组β-arrestin mRNA表达受到显著抑制,DD组出现β-arrestin mRNA表达去阻抑现象;SAP组TRAF6蛋白含量水平呈下降变化,DD组TRAF6蛋白含量水平下降更明显;SAP组NF-κB转录活性增强,DD组NF-κB的活性受到抑制。结论:生大黄和丹参可以阻止急性胰腺炎的重症化进程,其机理与上调β-arrestin基因表达,弱化TLR-IL-1R信号系统的作用相关。

β-arrestin信号转导通路在炎症性肠病发生过程中的作用机制

β-arrestin作为衔接蛋白参与G蛋白偶联受体(GPCR)相关信号信号通路,β-arrestin生物功能多样,能调节细胞的增殖、生存、凋亡及运动功能和基因转录过程.β-arrestin参与调节机体的炎症和免疫反应过程,抑制促炎转录因子NF-κB的基础活性,调节TLR/NF-κB信号转导通路对NF-κB的活化;参与T淋巴细胞活化,抑制CD4+T淋巴细胞凋亡,抑制NK细胞的细胞毒性作用,调节巨噬细胞的生存和功能;β-arrestin还通过调节多种趋化因子受体的脱敏、内化和信号转导过程,影响免疫细胞的趋化运动和促进中性粒细胞脱颗粒.炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,IBD)的病因可能是多种遗传基因异常导致的机体对肠道正常菌群的过度免疫反应而形成,这种异常免疫反应被认为是IBD发生的核心因素,而β-arrestin可能通过多种途径调节其免疫反应,参与IBD肠道黏膜的炎症反应过程.因此对β-arrestin的研究必将进一步揭示IBD的发病机制,也为IBD的治疗提供了新的思路.

β-arrestin2在非小细胞肺癌患者血清中表达的临床意义

背景与目的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中最常见的类型,具有较高的发病率及病死率。β-arrestin2是一种介导受体脱敏的重要可溶性蛋白质,在G蛋白偶联受体介导的信号转导中具有重要调节作用。本研究旨在探讨β-arrestin2在NSCLC患者血清中的表达,并探讨其临床意义。方法选取留有血清标本的2005年1月-2006年12月于中山大学肿瘤防治中心治疗并确诊的NSCLC患者67例及正常体检者20例,采用ELISA方法测定选取血清标本中β-arrestin2蛋白的表达情况,并对相应病例的临床及随访资料进行回顾性分析。结果 NSCLC患者组别均较正常人组别血清β-arrestin2浓度低(P<0.001,P<0.001,P<0.001);同时I期患者组别较III期、IV期患者组别血清β-arrestin2浓度高(P<0.001,P<0.001);而III期与IV期患者组别血清β-arrestin2浓度无差异(P=0.273)。Kaplan-Meier分析显示β-arrestin2高表达患者较中、低表达患者预后更好(P<0.001,P<0.001)。COX回归分析显示,β-arrestin2浓度和肿瘤分期对预后具有明显意义(P=0.003,P=0.004)。结论β-arrestin2在正常人和NSCLC患者、不同病理分期NSCLC患者血清中浓度有差异。血清β-arrestin2浓度影响NSCLC患者预后。

BRET技术在G蛋白偶联受体与β-arrestins相互作用研究中的应用进展

G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)是一个重要的细胞膜受体超家族。β-arrestin 1和β-ar-restin 2是广泛存在于细胞内的调配器和支架蛋白,它们在G蛋白偶联受体的细胞内信号转导、脱敏、内化、复敏以及G蛋白非依赖的信号转导中发挥重要作用。生物发光共振能量转移(BRET)技术能够实时监测活细胞内GPCRs和β-arrestins的相互作用,可进一步阐明β-arrestin调节GPCRs的作用机制,有助于开发新一代影响GPCRs功能活动的药物。

hβ-arrestin1重组蛋白不同亚型筛选及互作鉴定

目的构建GST/β-arrestin1融合蛋白表达载体,筛选其不同亚型重组子,并诱导表达、纯化蛋白,初步进行蛋白亚型互作比较,为进一步功能研究提供实验基础。方法提取人源细胞的mRNA,反转录为cDNA。用PCR法扩增hβ-arrestin1全长编码基因,通过SalI和NotI酶切位点将hβ-arrestin1全长定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达载体pGEX-5X-1-β-arrestin1,并通过BglⅡ单酶切筛选A、B亚型,然后将重组质粒转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,用谷胱甘肽-琼脂糖珠亲和纯化表达的GST/β-arrestin1A、B,SDS-PAGE鉴定,互作实验比较亚型的结合能力。结果酶切及测序结果证明,成功构建了β-arrestin1A、B原核表达载体,并通过SDS-PAGE证实:经IPTG诱导表达及亲和纯化,从转化重组质粒的BL21菌株中获得了融合蛋白GST/β-arrestin1A、B亚型,通过GST Pulldown初步比较了重组β-arrestin1A、B蛋白亚型的结合能力。结论成功构建pGEX-5X-1-β-arrestin1A、B原核表达载体并确定了融合蛋白的诱导表达及纯化方法,且互作实验显示β-arrestin1A有较强的结合能力,为进一步研究β-arrestin1的生物学功能奠定了基础。

β-arrestins介导的信号通路在恶性肿瘤病理过程中的作用

β-arrestins是介导受体脱敏的重要的蛋白质家族,在G蛋白偶联受体的脱敏、内化和复敏中都有重要的作用。作为一类多功能的蛋白,β-arrestins对绝大多数由G蛋白偶联受体介导的信号通路有调节作用,并且参与调节一些非七次跨膜受体的信号转导。在多种恶性肿瘤中,β-arrestins通过调节G蛋白偶联受体或其他一些信号转导途径影响肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移过程,参与了恶性肿瘤的病理过程。该文就β-arrestins在恶性肿瘤发生发展过程中所起到的作用及目前的研究状况作一综述。

β-Arrestins参与GPCRs信号通路的分子机制

β-抑制蛋白(β-arrestins)是一类在β肾上腺素受体激酶(βARK)提纯过程中发现的重要支架蛋白和信号调控因子;G蛋白偶联受体(GPCRs)为7次跨膜受体,在细胞信号转导中发挥关键作用,是很多临床药物的作用靶点.β-抑制蛋白作为衔接蛋白,调控GPCRs相关的信号通路,介导GPCRs的脱敏、内化、循环、复敏等生理过程,影响多种疾病的进程.本文总结了β-抑制蛋白参与GPCRs信号通路的研究进展,侧重阐明了其中的分子机制,以期为开发新一代调控GPCRs功能活性的相关药物提供理论基础.

β-arrestin-2通过上调PI3K/Akt信号抑制自噬以减轻小鼠肝脏缺血-再灌注损伤

目的验证β-arrestin-2是否通过上调PI3K/Akt信号抑制自噬对小鼠肝脏缺血-再灌注损伤(IRI)发挥保护作用。方法将C57BL/6背景的β-arrestin-2基因敲除(KO)及野生型(WT)小鼠各12只,随机分为KO小鼠假手术组(KO+sham组),KO小鼠IRI组(KO+IRI组),WT小鼠假手术组(WT+sham组)和WT小鼠IRI组(WT+IRI组),每组各6只。分别建立70%肝脏IRI模型或进行假手术处理,于肝脏再灌注或手术后6 h进行相关研究。采用免疫组织化学(免疫组化)染色检测凋亡信号蛋白裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)、增殖信号蛋白Ki-67及PI3K/Akt通路信号蛋白p-Akt的表达。结果免疫组化染色结果显示,与相应的sham组比较,KO+IRI组和WT+IRI组小鼠肝组织中的cleaved Caspase-3、Ki-67和p-Akt阳性细胞计数均增加(均为P<0.01);与WT+IRI组比较,KO+IRI组小鼠肝组织中cleaved Caspase-3阳性细胞计数增加,Ki-67和p-Akt阳性细胞计数均减少(均为P<0.05)。结论β-arrestin-2可减轻小鼠IRI后肝细胞凋亡、促进其损伤修复,其通过上调PI3K/Akt信号抑制自噬来减轻小鼠肝脏IRI。

β-arrestin对恶性肿瘤侵袭和转移过程的影响

β抑制蛋白(即β-arrestin)1和β-arrestin 2是一类介导受体脱敏的重要可溶性蛋白质,对绝大部分与受体耦联G蛋白介导的信号转导具有重要调节作用。在G蛋白耦联受体(GPCRs)脱敏、内化、复敏、细胞增殖反应和基因转录中具有重要地位。β-arrestin能够通过GPCRs或其他一些信号转导途径影响肿瘤细胞生长、迁移、转移进程。现就β-arrestin在肿瘤的发生和转移过程中所起到的作用及目前的研究状况予以综述。

G蛋白偶联信号转导通路及β-arrestin在信号转导中的作用

GTP偶联的调节蛋白(G蛋白)的功能在细胞信号转导和调节中是十分重要的.作为一种被广泛研究的参与蛋白直接或间接地调节一些生理过程.G蛋白有两种类型:包含3个不同亚基的“大G蛋白”和只有1个亚基的“小G蛋白”.最近的研究显示还有另外一种化学物质β-arrestin参与到了G蛋白信号转导通路中.

G蛋白偶联受体激酶和arrestins在受体调节中的作用

Ｇ 蛋白偶联受体（ Ｇｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ， Ｇ Ｐ Ｃ Ｒｓ）是一大家族，介导许多激素的信号转导。在激动剂的持续作用下， Ｇ Ｐ Ｃ Ｒｓ 可发生对激动剂的敏感性下降，即受体减敏，现认为这一过程主要由 Ｇ 蛋白偶联受体激酶（ Ｇｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｉｎａｓｅｓ ， Ｇ Ｒ Ｋｓ） 和ａｒｒｅｓｔｉｎｓ 两大蛋白家族介导： Ｇ Ｒ Ｋｓ 先结合并磷酸化被激动剂占领的受体，然后ａｒｒｅｓｔｉｎｓ与磷酸化的受体结合，阻止受体与 Ｇ 蛋白发生作用，导致受体功能减退。近来发现， Ｇ Ｒ Ｋｓ 和ａｒｒｅｓｔｉｎｓ 还参与受体的内陷机制。

β-arrestin基因表达对大鼠实验性急性胰腺炎重症化进程的影响

目的探讨急性胰腺炎重症化进程与β-arrestin基因抑制Toll样受体-白介素1受体(TLR-IL-1R)系统作用的相关性。方法建立SD大鼠实验性急性胰腺炎模型,分为假手术组(SO)、实验组(SAP);以real-time PCR检测脾脏组织中β-arrestin mRNA的表达,Western blot和免疫组化检测肝脏组织TRAF6蛋白和胰腺组织中NF-κBp65蛋白表达。结果与SO组比较,SAP组β-arrestin mRNA表达受到显著抑制TRAF6蛋白表达下降;NF-κBp65转录活性增强(P<0.05或0.01)。结论TLR-IL-1R系统可能参与急性胰腺炎重症化的病理过程。

β-arrestin1和β-arrestin2在白血病中的表达及意义

目的探讨β-arrestin1和β-arrestin2在白血病患者中的表达及意义。方法收集初发白血病患者95例(Leu组),根据白血病类型不同分为:急性髓细胞白血病(AML)亚组(30例),急性淋巴细胞白血病(ALL)亚组(44例)和慢性粒细胞白血病(CML)亚组(21例);以非恶性血液病患者36例(NL组)作为正常对照。收集患者的骨髓和外周血标本,分离单个核细胞。采用实时定量PCR法检测β-arrestin1、β-arrestin2的mRNA表达,采用Western blotting和免疫荧光法检测β-arrestin1、β-arrestin2蛋白表达的变化。结果Leu组和NL组的骨髓和外周血单个核细胞中,均检测到β-arrestin1、β-arrestin2mRNA和蛋白的表达,Leu组显著高于NL组(P<0.01)。与NL组比较,AML、ALL和CML各亚组的骨髓和外周血中β-arrestin1、β-arrestin2的mRNA和蛋白表达水平均有明显升高(P<0.05或P<0.01),但三个亚组间无明显差异(P>0.05)。结论白血病患者骨髓和外周血单个核细胞中β-arrestin1、β-arrestin2的表达明显升高,可能与白血病的发生发展密切相关。

β-arrestin 2抗基因RNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的构建携带β-arrestin 2抗基因RNA的慢病毒表达载体并对其进行鉴定。方法将线性化的慢病毒载体pGC-FU与抗基因RNA在In-Fusion交换酶作用下构建目的质粒pGC-agRNA,转化感受态细胞,对长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析。重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞NG108-15细胞的转染效率。结果抗基因RNA被成功构建入慢病毒表达载体pGC-FU,病毒滴度为2×109TU/mL。用该慢病毒感染NG108-15细胞,当感染复数(MOI)为100时,感染效率大于95%。结论成功构建了携带β-arrestin 2抗基因RNA的慢病毒表达载体,为研究β-arrestin 2在μ阿片受体调控机制中的作用提供了有效的研究工具,而且为抗基因RNA技术应用于体内外实验研究奠定了基础。

β-arrestin2抗基因RNA表达载体的构建及其基因沉默效应鉴定

目的吗啡耐受与神经元μ阿片受体持续脱敏感化有关,而μ阿片受体调控蛋白β-arrestin2在其中起着关键性作用,因此β-arrestin2有可能成为抑制吗啡耐受状态的有效靶点。文中构建携带β-arrestin2抗基因RNA的表达载体pGPU6/GFP/agRNAs,并评价其用于基因沉默研究的可行性。方法根据β-arrestin2基因转录起始位点序列,从-14处开始至+13处结束,每隔一个碱基,依次合成9条21个碱基长度的抗基因RNA片段,并分别构建入质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo。利用脂质体Lipofectamine介导的基因转染技术,分别将各个表达载体转染NG108-15细胞,于转染后第5天分别取转染不同抗基因RNA片段的细胞提取总RNA,应用realtime PCR和Western blot检测细胞β-arrestin2的表达,评价其基因沉默效应。结果筛选出1个表达具有基因沉默效应的抗基因RNA表达载体pGPU6/GFP/Arrb9。Realtime PCR结果显示NG108-15细胞转染该片段后,β-arrestin2 mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.05),下降程度达95%。结论携带β-arrestin2抗基因RNA的表达载体可有效下调NG108-15细胞β-arrestin2的表达,实现基因沉默效应。

原发性胆汁性肝硬化患者中β-arrestin 1表达增高及其意义

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者中β-arrestin 1的表达及其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR检测60例PBC患者、60例乙肝后肝硬化患者和60例健康体检者PBMCs中β-arrestin 1 mRNA水平,采用免疫印迹（western-blotting）技术检测β-arrestin 1蛋白表达水平.结果 PBC患者PBMCs中β-arrestin 1 mRNA的表达显著高于健康对照组和疾病对照组（P＜0.01）,而疾病对照组和健康对照组PBMCs中β-arrestin 1 mRNA的表达差异无统计学意义（P＞0.05）,并且β-arrestin 1表达水平与Mayo risk score正相关（Pearson r2=0.593 5,P＜0.001）.PBC患者PBMCs中β-arrestin 1蛋白水平显著高于健康对照组和疾病对照组（P＜0.01）,而疾病对照组和健康对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 PBC患者中β-arrestin 1表达显著增高,提示β-arrestin 1在PBC发病机制中可能起着重要作用,有可能作为PBC疾病进程的一个新的免疫状态标志.