神经肽Y/Y1受体激活β⁃catenin信号通路介导心肌细胞损伤

目的:研究神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)/Y1受体信号转导在心肌细胞损伤中的作用及机制。方法:C57BL/6J小鼠皮下注射异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)构建心肌损伤模型,腹腔注射Y1受体特异性拮抗剂BIBO3304干预。小鼠随机分为对照组(生理盐水)、ISO组[20 mg/(kg·d)ISO]、BIBO3304+ISO组[0.1 mg/(kg·d)BIBO3304+20 mg/(kg·d)ISO]、BIBO3304组[0.1 mg/(kg·d)BIBO3304],每组10只,连续给药14 d。实时定量PCR和Western blot检测小鼠心肌组织中NPY表达。HE染色和Masson染色观察各组小鼠心肌纤维结构变化和纤维化程度;定量PCR检测小鼠心肌肥大基因心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、β⁃肌球蛋白重链(β⁃myosin heavy chain,β⁃MHC)mRNA表达。采用Y1受体特异性激活剂[Leu31,Pro34]⁃NPY刺激H9C2细胞,检测ANP、β⁃MHC mRNA表达;CCK⁃8检测心肌细胞活力。Western blot检测各组小鼠心肌组织和H9C2细胞中activeβ⁃catenin、磷酸化糖原合成酶激酶⁃3β(phospho⁃glycogen synthesis kinase 3β,p⁃GSK3β)、总糖原合成酶激酶⁃3β(total glyco⁃gen synthesis kinase 3β,t⁃GSK3β)蛋白表达。免疫荧光染色检测心肌细胞β⁃catenin入核情况。利用β⁃catenin特异性抑制剂ICG001处理细胞,检测[Leu31,Pro34]⁃NPY诱导的心肌细胞肥大和细胞活力变化。结果:与对照组比较,ISO组小鼠心肌组织NPY mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05),心肌纤维排列紊乱,心肌纤维化程度高,心肌肥大基因表达增加。与ISO组比较,BIBO3304+ISO组小鼠心肌损伤和纤维化得到有效缓解,心肌肥大基因表达下降(P<0.01)。与对照组比较,[Leu31,Pro34]⁃NPY增加H9C2细胞ANP、β⁃MHC mRNA表达,降低心肌细胞活力(P<0.01)。与对照组比较,ISO组小鼠心肌组织activeβ⁃catenin、p⁃GSK3β表达明显上调,p⁃GSK3β/t⁃GSK3β增加;与ISO组比较,BIBO3304+ISO组心肌组织activeβ⁃catenin、p⁃GSK3β表达降低(P<0.05)。与对照组比较,[Leu31,Pro34]⁃NPY显著增加心肌细胞activeβ⁃catenin、p⁃GSK3β表达(P<0.05),促进细胞核β⁃catenin积累。与[Leu31,Pro34]⁃NPY组比较,BIBO3304抑制细胞核β⁃catenin表达,ICG001显著缓解[Leu31,Pro34]⁃NPY诱导的心肌细胞肥大和细胞活力下降(P<0.01)。结论:NPY通过Y1受体转导激活β⁃catenin信号通路介导心肌细胞损伤和心肌纤维化。

应力刺激通过Wnt/β⁃catenin通路调控牙骨质细胞的矿化

目的牙骨质再矿化对牙根吸收后牙骨质修复至关重要,本文探究应力下Wnt/β⁃catenin通路对牙骨质细胞矿化的调控机制。方法对矿化诱导21 d的牙骨质细胞系IDG⁃CM6细胞加载轻力6 h,通过茜素红染色观察IDG⁃CM6细胞矿化程度,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT⁃qPCR)、蛋白质印迹(Western blot)及免疫荧光检测β⁃catenin及Runx2、Osterix的表达水平。采用生信技术筛选差异表达基因后,通过敲除IDG⁃CM6细胞内β⁃catenin检测矿化程度及Runx2、Osterix表达水平变化。结果应力下,IDG⁃CM6细胞矿化增加,Runx2、Osterix表达水平升高;生信分析及RT⁃qPCR、Western blot、免疫荧光染色表明应力促进β⁃catenin的表达,下调β⁃catenin能逆转应力刺激下的矿化效应。结论应力条件下,Wnt/β⁃catenin通路参与了牙骨质矿化的调控,可能是牙根吸收后牙骨质修复的关键通路。

慢性肺源性心脏病患者血清GSK⁃3β、β⁃catenin mRNA表达水平与病情严重程度及预后的关系

目的分析慢性肺源性心脏病(CPHD)患者血清中糖原合成酶激酶⁃3β(GSK⁃3β)、β⁃连环蛋白(β⁃catenin)信使RNA(mRNA)表达水平与病情严重程度及预后的关系。方法选取2020年1月—2021年10月汉中市三二〇一医院收治的CPHD患者108例作为CPHD组,根据肺心功能分为失代偿亚组40例、代偿亚组68例,根据患者1年内生存情况分为存活亚组85例、死亡亚组23例。以同期健康体检者108例为健康对照组。收集CPHD患者的基本资料,荧光定量PCR法检测受试者血清GSK⁃3β、β⁃catenin mRNA表达水平;比较各组血清GSK⁃3β、β⁃catenin mRNA表达水平差异;Pearson法分析CPHD患者血清GSK⁃3β、β⁃catenin mRNA表达水平的相关性,多因素Cox回归分析影响CPHD患者死亡的危险因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清GSK⁃3β、β⁃catenin mRNA表达水平对CPHD患者死亡的预测价值。结果与健康对照组比较,CPHD组血清GSK⁃3βmRNA表达水平显著降低,β⁃catenin mRNA表达水平显著升高(t/P=28.208/<0.001、25.981/<0.001);与代偿亚组比较,失代偿亚组血清GSK⁃3βmRNA表达水平显著降低,β⁃catenin mRNA表达水平显著升高(t/P=12.572/<0.001、12.156/<0.001);与存活亚组比较,死亡亚组吸烟史比例、PaCO_(2)、β⁃catenin mRNA表达水平显著升高,PaO_(2)、GSK⁃3βmRNA表达水平显著降低[χ^(2)(t)/P=5.941/0.015、3.690/<0.001、7.353/<0.001、2.723/0.008、5.730/<0.001];CPHD患者血清GSK⁃3βmRNA与β⁃catenin mRNA表达水平呈负相关(r/P=-0.502/<0.001);GSK⁃3βmRNA高表达是CPHD患者死亡的保护因素[HR(95%CI)=0.843(0.728~0.976)],β⁃catenin mRNA高表达是其危险因素[HR(95%CI)=1.391(1.041~1.859)];血清GSK⁃3β、β⁃catenin mRNA及二者联合预测CPHD患者死亡的曲线下面积分别为0.838、0.884、0.913,均有较好的预测价值。结论CPHD患者血清GSK⁃3βmRNA呈低表达,β⁃catenin mRNA呈高表达,二者与病情严重程度及预后相关,且对患者预后有较高预测效能。

SFRP1/Wnt/β⁃catenin通路在宫颈癌干细胞中的作用

目的探讨宫颈癌干细胞中的SFRP1/Wnt/β⁃catenin通路的作用。方法运用流式分选宫颈癌SiHa细胞中的侧群干细胞(side population cell,SP)及非侧群干细胞(non side population cell,NSP);体内外功能实验验证SP及NSP细胞之间的增殖、克隆形成、成球及皮下成瘤能力差异,免疫印迹实验检测干性标志物(CD133、CD44、Nanog);经放化疗处理后,检测细胞增殖、克隆形成能力;免疫印迹实验检测分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)、Wnt/β⁃catenin通路蛋白,免疫荧光检测β⁃catenin的表达情况,酶联免疫吸附实验检测SFRP1分泌情况。结果SP细胞的增殖、克隆形成、成球及皮下成瘤能力明显强于NSP细胞,SP细胞的干性标志物水平明显高于NSP细胞;经过放化疗处理后,SP细胞的增殖、克隆形成能力明显强于NSP细胞;SP细胞中的SFRP1表达明显高于NSP细胞,分泌SFRP1的浓度明显低于NSP细胞,SP细胞中Wnt/β⁃catenin通路激活且β⁃catenin在胞核有明显表达。结论宫颈癌干细胞可能通过减少SFRP1的分泌来激活Wnt/β⁃catenin通路,从而促进其增殖、克隆及皮下成瘤能力,并增强其放化疗抵抗能力。

沉默TIPE基因下调Wnt/β⁃catenin信号对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究沉默TIPE(tumor necrosis factor⁃α⁃induced protein 8,TNFAIP8)基因下调Wnt/β⁃catenin信号对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法通过构建shRNA⁃TIPE慢病毒载体转染人非小细胞肺癌细胞系A549,利用Real time PCR、Western blot检测A549内TIPE、β⁃catenin的表达水平,细胞克隆形成实验、CCK8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果shRNA⁃TIPE慢病毒转染非小细胞肺癌细胞系A549后:(1)TIPE和β⁃catenin的mRNA、蛋白表达水平均低于阴性对照组和空白对照组;(2)TIPE基因沉默后,A549细胞克隆形成能力显著下降(F=17.48,P=0.0003),生长曲线实验检测A549细胞增殖能力下降;(3)shRNA⁃TIPE慢病毒转染后,A549细胞凋亡率(18.4±4.5)%明显高于阴性对照(12.7±3.6)%和空白对照组(11.5±3.4)%,差异有统计学意义(F=4.4844,P=0.0351)。结论TIPE可能通过激活Wnt/β⁃catenin信号通路促进非小细胞肺癌细胞系A549细胞增殖,抑制凋亡。

同源域蛋白同源盒基因通过调控Wnt/β⁃catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖

目的探讨同源域蛋白同源盒基因(HOPX)在胃癌中的表达情况及调控胃癌细胞的增殖能力及其作用机制。方法采用Real time⁃PCR及Western blot检测HOPX在胃癌细胞和组织中的mRNA及蛋白表达水平;在胃癌细胞HGC27及BGC823中稳定过表达HOPX基因,通过CCK⁃8法、克隆形成实验、EdU法检测HOPX对胃癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测HOPX对胃癌细胞细胞周期的调控作用。另外将用于检测β⁃catenin/TCF/LEF可转录活性的荧光素酶报告质粒TOP flash和FOP flash转染胃癌细胞,使用双荧光素酶报告系统测定过表达HOPX对细胞内荧光素酶转录活性的影响。此外采用Western blot分别测定过表达HOPX对胃癌细胞内β⁃catenin、GSK⁃3β及p⁃GSK⁃3β蛋白表达水平的变化。进一步检测过表达HOPX后,胃癌细胞核内β⁃catenin蛋白表达水平及其下游靶基因CyclinD1的表达变化,以探讨HOPX影响胃癌细胞增殖的具体机制。结果Real time⁃PCR及Western blot结果显示HOPX在胃癌中的mRNA及蛋白表达水平均显著降低,HOPX过表达后可显著抑制胃癌细胞的增殖并抑制其细胞周期。Western blot结果表明过表达HOPX可通过抑制GSK3β的磷酸化水平促进β⁃catenin的降解,从而抑制β⁃catenin入核,进而下调下游靶基因CyclinD1的表达,达到抑制胃癌细胞的增殖能力。结论HOPX通过调控Wnt/β⁃catenin信号通路以抑制胃癌细胞的增殖。

CT灌注参数与胃癌临床病理特征及Wnt/β⁃catenin通路介导血管新生的关系

目的研究CT灌注参数与胃癌临床病理特征及Wnt/β⁃catenin通路介导血管新生的关系。方法选择2018年1月至2020年12月在中国人民解放军陆军第七十三集团军医院经病理诊断的胃癌患者作为研究对象,术前进行CT灌注成像检查并测量血流量(BF)及血容量(BV)、达峰时间(TTP)、平均通过时间(MTT);术后收集胃癌组织,检测Wnt1、Wnt3a、β⁃catenin、bFGF、VEGF的mRNA表达水平及微血管密度(MVD)。结果TNMⅢ期胃癌的CT灌注参数BF、BV均高于TNMⅠ~Ⅱ期胃癌,TTP、MTT低于TNMⅠ~Ⅱ期胃癌,差异有统计学意义(t=5.793、2.668、2.057、4.975,P<0.05);低分化胃癌的CT灌注参数BF、BV均高于中高分化胃癌,TTP、MTT低于中高分化胃癌,差异有统计学意义(t=4.772、2.668、2.231、5.520,P<0.05);胃癌组织的BF、BV与Wnt1、Wnt3a、β⁃catenin、bFGF、VEGF的mRNA表达水平及MVD水平均呈正相关,TTP、MTT与Wnt1、Wnt3a、β⁃catenin、bFGF、VEGF的mRNA表达水平及MVD水平均呈负相关(P<0.05);胃癌组织BF、BV≥中位数的患者OS率和PFS率低于BF、BV<中位数的患者,TTP、MTT≥中位数的患者OS率和PFS率高于TTP、MTT<中位数的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌CT灌注参数BF、BV、TTP、MTT的变化与TNM分期增加、分化程度降低及生存预后不良有关,Wnt/β⁃catenin通路介导的血管新生与CT灌注参数的变化相关。

慢性肾脏病血管钙化大鼠模型血清中HIF⁃1α、β⁃catenin的表达及意义

目的:建立慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)血管钙化大鼠模型,探讨血清低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、β-连环蛋白(β-catenin)水平与血管钙化的相关性。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(CON组,10只)和CKD血管钙化组(CKD组,20只),血管钙化组大鼠给予腺嘌呤灌胃及高磷饲料喂养。第6周末收集两组大鼠血、尿液分别检测肾功、钙、磷及24 h尿蛋白定量等;留取肾组织行HE染色;大鼠主动脉行Von Kossa染色及钙含量测定;ELISA法检测血清中HIF-1α、β-catenin水平。结果:与CON组相比,CKD组大鼠24 h尿蛋白定量、血BUN、Scr、P、Ca×P、主动脉钙含量、血清HIF-1α、β-catenin水平均明显增加,血钙降低(P均<0.05);CKD组大鼠见肾小球萎缩、肾小管扩张及肾间质纤维化;主动脉可见明显的钙化结节,Von Kossa染色可见较多黑色物质沉积;血清HIF-1α、β-catenin水平与血P、Ca×P与大鼠主动脉钙含量呈正相关(P均<0.05)。结论:CKD血管钙化时血清HIF-1α、β-catenin水平明显增高,且与主动脉钙化程度明显相关。

MLCK、E⁃cadherin、β⁃catenin水平预测高脂血症急性胰腺炎严重程度及预后

目的探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、E⁃钙黏蛋白(E⁃cadherin)、β⁃连环蛋白(β⁃catenin)水平预测高脂血症急性胰腺炎(HAP)患者严重程度及预后。方法选取内蒙古自治区人民医院2018年6月至2020年6月收治的75例HAP患者(HAP组)与60例同期健康体检者(正常组)。HAP组根据病情严重程度分为轻症组(n=53)与重症组(n=22);以院内治疗期间预后作为标准,存活患者为良好组(n=60),死亡患者为不良组(n=15)。各组均行MLCK、E⁃cadherin、β⁃catenin的相对mRNA表达及C反应蛋白(CRP)、淀粉酶(AMY)、甘油三酯(TG)水平检测。研究外周血MLCK、E⁃cadherin、β⁃catenin与血液指标的相关性,并对MLCK、E⁃cadherin及β⁃catenin表达预测HAP预后的价值进行受试者工作特征曲线(ROC)分析。结果三组外周血MLCK、E⁃cadherin、β⁃catenin相对mRNA表达量及CRP、AMY、TG水平:重度组>轻症组>正常组,差异均有统计学意义(P<0.05)。良好组MLCK、E⁃cadherin、β⁃catenin相对mRNA表达量及CRP、AMY、TG水平显著低于不良组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HAP患者MLCK、E⁃cadherin及β⁃catenin分别与CRP、AMY及TG呈正相关(P<0.05)。MLCK敏感性93.33%,特异性86.67%;E⁃cadherin敏感性86.67%,特异性86.67%;β⁃catenin敏感性80.00%,特异性93.33%。结论术前检测HAP患者外周血MLCK、E⁃cadherin、β⁃catenin表达可判断HAP患者病情严重程度,可作为HAP患者预后的预测指标。

低氧微环境通过TGFBI调控Wnt/β-catenin通路介导胰腺癌化疗耐药及机制研究

目的:研究低氧微环境通过TGFBI调控胰腺癌耐药的作用及分子机制。方法:以CCK-8方法检测细胞增殖;以Western blotting技术检测蛋白表达水平;以ImageJ软件分析蛋白灰度值;RNAi技术用于敲减TGFBI基因。结果:TGFBI在Panc-1细胞中表达比正常细胞增强;低氧促进胰腺癌细胞Panc-1增殖并减弱顺铂对Panc-1的抑制作用,而高氧抑制Panc-1细胞增殖并加强顺铂的杀伤作用;低氧促进TGFBI表达及EMT行为;低氧通过TGFBI调控Panc-1细胞增殖及顺铂的杀伤作用;低氧通过TGFBI调控Wnt/β-catenin信号,进而促进EMT行为。结论:低氧微环境通过增强TGFBI表达促进胰腺癌细胞增殖及耐药;低氧微环境通过TGFBI激活Wnt/β-catenin信号通路,促进EMT标志分子表达。

补中益气汤协同Siβ-catenin调控Wnt/β-catenin信号通路干预肺腺癌顺铂耐药性的分子机制研究

目的:探讨补中益气汤含药血清协同Siβ-catenin调控Wnt/β-catenin信号通路干预A549/DDP细胞顺铂耐药性的分子机制研究。方法:采用siRNA干扰沉默β-catenin的表达,Western blot检测正常血清组、顺铂组、siCTNNB1-235组、siCTNNB1-510组、siCTNNB1-547组A549/DDP细胞的β-catenin蛋白的相对表达量;干扰β-catenin后,Western blot检测各组A549/DDP细胞β-catenin和Survivin的蛋白表达量,MTT法检测各组A549/DDP细胞对顺铂的IC50,Annexin V/PI染色法检测各组A549/DDP细胞顺铂诱导的凋亡率。结果:相较于正常血清组(1.00),siCTNNB1-235组(0.323±0.021)对β-catenin表达抑制率达67%(P=0.000)。RNAi技术沉默β-catenin后,与正常血清组(1.00)相比,补中益气汤联合顺铂组的Survivin(0.247±0.015)和β-catenin(0.257±0.015)蛋白的表达下调更为明显(P=0.000,P=0.000)。IC50和正常血清组(28.330±1.029)µmol/L相比,单独补中益气汤含药血清(20.350±1.155)µmol/L或单独瞬时转染siCTNNB1-235组(15.577±1.535)µmol/L均可降低A549/DDP细胞顺铂的IC50(P=0.000,P=0.000),2者联合(10.453±0.999)µmol/L使用可进一步降低顺铂的IC50(P=0.000)。与正常血清组(9.130±0.384)%相比,瞬时转染siCTNNB1-235联合顺铂组(64.393±0.244)%和补中益气汤联合顺铂组(70.120±0.400)%的总凋亡率均升高(P=0.000,P=0.000)。结论:补中益气汤含药血清和瞬时转染siβ-catenin在抑制Wnt/β-catenin信号通路改善肺腺癌顺铂耐药性方面具有协同效应,且补中益气汤具有siβ-catenin瞬时转染样效应。

CTNND1通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究CTNND1调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制,为胰腺癌精准治疗提供新理论依据。方法:通过生信分析验证CTNND1在胰腺癌和正常组织中的表达,免疫组织化学(IHC)和qPCR进一步验证。Transwell、划痕实验和细胞增殖试验用于研究CTNND1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下成瘤实验检测CTNND1对人胰腺癌细胞成瘤能力的影响。结果:在胰腺癌细胞中敲低CTNND1可以抑制胰腺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路以及增殖、迁移和侵袭能力。加入LiCl(Wnt/β-catenin特异性激活剂)能部分恢复CTNND1敲低胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。裸鼠皮下成瘤显示,敲低CTNND1抑制了肿瘤裸鼠皮下成瘤。结论:敲低CTNND1能从体内外通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌的增殖、迁移和侵袭及皮下成瘤能力。

下调METTL5通过Wnt/β-catenin信号通路抑制三阴乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的探讨甲基转移酶5(methyltransferase-like 5,METTL5)在三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)中的作用和潜在机制。方法采用免疫组织化学方法和Western blot检测TNBC肿瘤组织和细胞系中METTL5的表达情况。用靶向METTL5的shRNA(shRNA-METTL5)转染TNBC细胞后,用CCK-8、集落形成、伤口愈合以及Transwell实验分别检测细胞增殖活性、迁移与侵袭,Western blot检测Wnt/β-catenin信号关键蛋白的表达。构建异种移植瘤模型,验证敲降METTL5对TNBC细胞在体内生长以及Wnt/β-catenin信号活性的影响。结果METTL5在TNBC肿瘤组织和细胞系中表达上调(P<0.01)。敲降METTL5可抑制TNBC细胞的增殖、迁移和侵袭并降低了Wnt/β-catenin信号分子β-catenin、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-7的表达(均P<0.01)。体内实验显示,敲降METTL5减缓了移植瘤生长和Wnt/β-catenin信号活性。结论敲降METTL5能抑制TNBC细胞的增殖、迁移与侵袭,其作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

Wnt/β-catenin信号通路的中药调控与创面愈合

创面愈合是由于外伤、糖尿病溃疡、压疮、感染和术后创面不愈合等多种因素导致的如表皮、真皮、肌肉、筋膜等局部组织的损伤,其愈合过程是一个复杂且动态的程序,涉及到多种细胞反应和周围微环境的相互配合。目前,创面发病率呈逐年增长的趋势,造成了全球范围内巨大的社会和经济负担,老龄人口中发生的慢性损伤随着年龄的增长而逐年攀升。当前,修复创面的药物种类及方法多样,一定程度上减轻了患者的生理、心理和经济社会压力。中药单体及复方制剂修复创面具有独特的优势和力量,引起社会各界广泛的关注及应用,Wnt/β-catenin是调节细胞增殖、分化及凋亡,高度参与创面修复,是皮肤损伤修复过程中最重要的经典信号通路之一。Wnt/β-catenin信号通路通过中药单体及复方制剂降低机体创面中蛋白激酶、炎症反应,促进血管新生和表皮干细胞等表达,对创面愈合的治疗具有重要的参考价值。本文复习国内外相关文献,对Wnt/β-catenin信号通路与创面的关系及中药单体和中药复方通过调控该信号通路影响创面愈合的机制进行归纳总结,为中药治疗创面损伤提供新的思路和方向。

lncRNA ENST00000452996.1通过ERK/GSK-3β/β-catenin信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的研究一种新的长链非编码RNA ENST00000452996.1对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭等的影响及其调控机制。方法TCGA数据集分析肝癌组织ENST00000452996.1表达;构建ENST00000452996.1的shRNA载体,包装病毒感染Huh-7细胞(shENST00000452996.1组),CCK-8法、克隆形成法、流式细胞术、划痕法和Transwell小室法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;Western blot法检测shENST00000452996.1组、ERK激动剂EGF处理组和GSK-3β抑制剂TDZD-8处理组的ERK/GSK-3β/β-catenin信号分子的表达。结果TCGA分析发现,肝癌组织ENST00000452996.1表达水平明显高于癌旁组织,且与Edmondson-Steiner分级呈正相关,与总生存时间呈负相关;与对照组相比,shENST00000452996.1组细胞增殖、迁移及侵袭能力明显下降,凋亡能力明显增强,p-ERK1/2、p-GSK-3β^(Ser9)和β-catenin表达均下调,GSK-3β和p-β-catenin表达上调,核β-catenin表达下降;与shENST00000452996.1组相比,EGF处理组p-ERK1/2表达升高,EGF处理组和TDZD-8处理组p-GSK-3β^(Ser9)和β-catenin及核β-catenin表达均升高,GSK-3β和p-β-catenin表达均降低。结论干扰ENST00000452996.1表达抑制ERK1/2磷酸化,阻止GSK3β^(Ser9)磷酸化,导致β-catenin磷酸化,抑制β-catenin核转位,推断ENST00000452996.1通过ERK/GSK-3β/β-catenin信号通路增强肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,抑制细胞凋亡,从而发挥促进肝细胞癌的作用。

基于β-catenin/Slug信号通路表达探讨LPCAT1对子宫颈癌生物学行为的影响

目的观察β-catenin/Slug信号特异性抑制剂FH535与EMT的关系,探讨LPCAT1在调节子宫颈癌细胞侵袭、转移和生长中的作用。方法采用sh-NC和sh-LPCAT1转染Hela细胞,利用载体(Vector)组和LPCAT1过表达质粒转染SiHa细胞,将SiHa细胞分为对照组(Con)、LPCAT1组、LPCAT1+FH535组和FH535组。运用CCK-8法和集落形成试验检测子宫颈癌细胞的增殖。通过伤口愈合试验和Transwell实验检测子宫颈癌细胞的转移、侵袭能力。应用Western blot分析细胞中LPCAT1、β-catenin/Slug信号通路和EMT相关蛋白的表达。结果与Vector组相比,LPCAT1组SiHa细胞的活力、集落数、迁移和侵袭细胞数均显著增加(P<0.05);与sh-NC组相比,sh-LPCAT1组Hela细胞的活力、集落数、迁移和侵袭细胞数均显著降低(P<0.05)。与LPCAT1组相比,LPCAT1+FH535组SiHa细胞中Wnt4(1.18±0.05 vs 0.80±0.06)、β-catenin(1.05±0.08 vs 0.77±0.05)、Slug(1.13±0.06 vs 0.28±0.02)、Cyclin D1(0.99±0.06 vs 0.44±0.02)、N-cadherin(0.91±0.07 vs 0.46±0.03)和vimentin(0.95±0.06 vs 0.49±0.03)表达降低(P<0.05),E-cadherin(0.44±0.03 vs 0.58±0.03)表达增加(P<0.05)。此外,与LPCAT1组相比,LPCAT1+FH535组SiHa细胞的集落数(224±15 vs 146±11)、迁移数(85±3 vs 51±4)和侵袭数(166±10 vs 90±5)均降低(P<0.05)。结论LPCAT1表达增加可能通过激活β-catenin/Slug信号通路促进子宫颈癌的转移和进展,LPCAT1的靶向治疗有望提高子宫颈癌患者的预后。

SOX7通过靶向调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的研究SOX7调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路从而影响结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制。方法将20只裸鼠皮下移植瘤模型随机分为SOX7 NC组(n=5)、SOX mimic组(n=5)、SOX7 NC+PHPS1组(n=5)和SOX7 mimic+PHPS1组(n=5),观察肿瘤生长情况。通过脂质体法将人结直肠癌细胞系SW480细胞转染后,将细胞分为6组,分别为SOX7 NC组、SOX7 mimic组、SOX7 NC+H_(2)O_(2)组、SOX7 mimic+H_(2)O_(2)组、SOX7 NC+PHPS1组、SOX7 mimic+PHPS1组。通过Western blot实验检测各组SW480细胞SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路相关蛋白的表达,通过细胞划痕实验和Transwell侵袭迁移实验检测SW480细胞的侵袭迁移能力,通过CCK-8检测SW480细胞的增殖。结果小鼠体内实验显示:SOX7 mimic组肿瘤体积明显小于SOX7 NC组(P<0.01),经过PHPS1干预的肿瘤体积明显增大,SOX7 mimic+PHPS1组肿瘤体积和SOX7 NC+PHPS1组的差异无统计学意义。体外实验发现:SOX7 mimic抑制了SW480细胞Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT蛋白表达(P<0.01),促进了p-SHP-2蛋白表达(P<0.01);加入H_(2)O_(2)和SHP-2抑制剂后SOX7 mimic组和SOX7 NC组的Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT的蛋白表达水平升高,但差异无统计学意义,SHP-2、p-SHP-2蛋白的表达水平降低,但差异无统计学意义;细胞划痕、Transwell侵袭迁移实验和CCK-8实验结果表明SOX7通过氧化应激和SHP-2通路抑制了SW480细胞的迁移、侵袭和增殖(P<0.01)。结论SOX7可通过靶向SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌增殖、侵袭和迁移。

积雪草酸通过Wnt/β-catenin通路逆转白血病K562/ADR细胞的多药耐药性研究

目的:探讨积雪草酸(asiatic acid,AA)对人耐阿霉素(adriamycin,ADR)慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用及其机制。方法:采用CCK-8法检测K562细胞和K562/ADR细胞对ADR的耐药性;CCK-8法检测AA对K562/ADR细胞活力的影响及对ADR敏感性的增强作用;无毒剂量的AA(10、20μmol/L)处理K562/ADR细胞后,流式细胞术检测细胞内ADR的平均荧光强度;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance protein-1,MRP1)、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、β-连环蛋白(β-catenin)、原癌基因(C-myc)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测MRP1、P-gp、β-catenin、C-myc、cyclinD1蛋白的表达水平。20μmol/L AA联合Wnt/β-catenin通路激动剂WAY-262611(5μmol/L)处理K562/ADR细胞后,Western blot法检测细胞内MRP1、P-gp、β-catenin、C-myc、cyclinD1蛋白表达水平的变化。结果:CCK-8检测结果显示,K562/ADR细胞的耐药性是K562细胞的56.57倍,具有稳定耐药性,差异具有统计学意义(P<0.05)。AA可呈浓度依赖性抑制K562/ADR细胞的增殖活力(r=0.9666)。与0μmol/L AA组相比,10、20μmol/L AA组可明显增强细胞内ADR的平均荧光强度(P<0.05),逆转细胞对ADR的耐药性(P<0.05),明显下调细胞中MRP1、P-gp、β-catenin、C-myc和cyclinD1 mRNA和蛋白的表达(P均<0.05)。与单用20μmol/L AA组相比,20μmol/L AA+WAY组细胞中MRP1、P-gp、β-catenin、C-myc、cyclinD1蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论:AA呈浓度依赖性抑制K562/ADR细胞增殖,逆转该细胞对ADR的耐药性,其逆转机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路后下调耐药相关蛋白MRP1和P-gp的表达有关。

外泌体负载枸杞miR2911调控Wnt/β-catenin信号通路促进非梗阻性无精子症大鼠生精功能恢复

目的:研究外泌体负载的枸杞miRNA(Lb-miR2911)药物通过跨界调控Wnt/β-catenin信号通路对非梗阻性无精子症(NOA)大鼠模型生精功能恢复的影响。方法:4周龄雄性SD大鼠30只,采用白消安腹腔注射方法构建NOA模型,造模5周后将模型大鼠随机分为模型组(MC)、Lb-miR2911^(EXO)治疗组(Lb-miR2911^(EXO))、外泌体空载治疗组(Sham),每组10只。MC组NOA模型大鼠自然恢复,无特殊处理;Lb-miR2911^(EXO)组NOA模型大鼠,睾丸生精小管注射外泌体包被Lb-miR2911药物(0.1 mg/kg),1次/周,共治疗3次;Sham组NOA模型大鼠,睾丸生精小管注射外泌体空载药物(0.1 mg/kg),1次/周,共治疗3次。另取10只同龄正常健康SD大鼠作为正常对照组(NC)。治疗后第2、6周采用RNA FISH技术观察Lb-miR2911药物在睾丸组织中的摄取及代谢变化;治疗后12周采用转录组测序分析结合Western印迹、RT-PCR方法检测各组大鼠睾丸组织中细胞增殖、精子发生及Wnt/β-catenin信号通路的基因表达;睾丸组织形态学及精子质量分析比较各组大鼠生精功能恢复情况;通过组织形态学分析结合血清TNF-α、IL-1β、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等指标检测评估Lb-miR2911外泌体药物对大鼠组织器官毒性。结果:治疗12周后睾丸组织形态学分析发现Lb-miR2911^(EXO)组大鼠睾丸组织各层次生精细胞排列规则,管腔中可见大量成熟精子,与Sham组比较,Johnsen评分显著增加(P<0.05),睾丸重量、睾丸指数、精子浓度和精子活力显著增加(P<0.05);转录组测序分析结合Western印迹、RT-PCR方法证实,与MC组相比,Lb-miR2911^(EXO)组DACT3基因表达下调(P<0.05),而DVL2、β-catenin表达上调,同时p-DVL2及β-catenin(nucleus)蛋白含量增加(P<0.05);细胞增殖相关基因CCND1、CCNE1、CCNE2 mRNA表达上调(P<0.05);精子发生相关基因DMC1、CCR6、JAM2、KLC3表达上调(P<0.05);组织器官毒性检测表明:治疗后Lb-miR2911^(EXO)组大鼠肺部、肝脏、肾脏组织未见病理性变化,与NC组比较血清TNF-α、IL-1β、AST、ALT、肌酐或尿素氮等水平未见升高(P>0.05)。结论:外泌体负载的Lb-miR2911药物通过跨界调节DACT3/Wnt/β-Catenin信号通路促进了NOA大鼠生精功能恢复。

β-catenin过表达对胰腺癌干细胞生物学特性的影响

目的分析β-catenin蛋白在胰腺癌干细胞恶性生物学特性维持过程中的作用及其机制。方法分离培养原代胰腺癌细胞,将胰腺癌细胞分为NC组和ADβ-catenin组,NC组细胞转染阴性空载病毒,ADβ-catenin组细胞转染β-catenin过表达慢病毒载体。采用流式细胞仪分析细胞株肿瘤干细胞表面标志物CD24、CD44及ESA的表达情况;分选出CD24^(+)CD44^(+)ESA^(+)细胞并扩大培养,通过检测分选出细胞的成球能力、克隆形成能力、增殖能力、侵袭迁移能力、细胞周期及凋亡情况;分析β-catenin过表达对胰腺癌干细胞生物学特性的影响。结果ADβ-catenin组细胞中β-catenin mRNA和蛋白的相对表达量显著高于NC组(P=0.016,P=0.015)。流式细胞仪分析结果显示,ADβ-catenin组细胞中CD24^(+)及CD24^(+)CD44^(+)ESA^(+)的细胞率显著高于NC组(P<0.05)。与NC组比较,ADβ-catenin组胰腺癌干细胞克隆形成能力、成球能力、侵袭与迁移细胞数均显著增加(P<0.05)。ADβ-catenin组细胞在24 h、48 h及72 h的光密度(OD)值均显著高于NC组(P<0.05)。与NC组相比,ADβ-catenin组G_(0)/G_(1)期细胞比例显著减少(P<0.05),S期细胞比例增高(P<0.05)。ADβ-catenin组的细胞凋亡率显著低于NC组(P<0.05)。结论β-catenin通过提高胰腺癌原代细胞中CD24^(+)CD44^(+)ESA^(+)的细胞率,促进胰腺癌干细胞成球能力,增强细胞增殖、侵袭与迁移能力,抑制细胞的凋亡,从而维持胰腺癌干细胞的恶性生物学特性。