恶性疟原虫抗药性的分子遗传学

恶性疟原虫对二氢叶酸还原酶抑制剂和氯喹的抗性,已被定位于单一的基因位点。二氢叶酸还原酶基因的特定点突变造成了对两种二氢叶酸抑制剂即环氯胍和乙胺嘧啶的抗性,抗性程度随点突变的位置和所涉及的氨基酸残基的不同而有所差异。氯喹抗性位点已被定位于恶性疟原虫杂交株第7号染色体中的一个400kb的片段之上。阐明该片段内基因的特性将有助于理解引起氯喹抗性的药物快速外流机制。

β-内酰胺酶与细菌耐药性

本文以nitrocefin法对213株革兰氏阴性杆菌进行了β-内酰胺酶定性检测,用等电聚焦技术对β-内酰胺酶作了定型分析,并比较了11种β-内酰胺抗生素对产酶和不产酶菌株的体外抗菌活性,以及不同酶型对细菌耐药性的影响。结果表明,产酶阳性率高达76.53％,以OXA-1、OXA-2型酶为主。产酶与否对抗生素的体外抗菌活性影响很大,产酶菌株对青霉素类和第一、二代头孢菌素呈现高度耐药,MIC_(80)亦较大,同一菌种的非产酶株则明显对β-内酰胺抗生素敏感。第三代头孢菌素无论对产酶或不产酶菌株均有较高度抗菌活性。 同种细菌的不同菌株,由于所产β-内酰胺酶型别的不同,耐药情况也不尽相同,单产染色体酶的菌株不如产质粒酶的菌株耐药,而同时产染色体酶和质粒酶的菌株耐药性最强。

肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 了解我院产超广谱β-内酰胺酶 (ESBL s)肠杆菌科细菌的分离、分布情况及耐药特点 ,以便及时监控和治疗。方法 采用纸片扩散法 ,从 5 33株肠杆菌科细菌筛选出产 ESBL s菌株 ,并对产 ESBL s菌株进行药敏实验。结果 5 33株肠杆菌科细菌产 ESBL s菌株 96株 (18.0 % ) ,以 ICU病房分离率最高 (2 9.5 % ) ,产 ESBL s细菌对第三代头孢菌素高度耐药 (90 .6 %～ 92 .7% ) ,对环丙沙星、庆大霉素和磺胺甲口恶唑 /甲氧苄啶耐药率也较高 (5 1.0 %～ 88.5 % ) ,对亚胺培南全部敏感。结论 纸片扩散法是一种方便、有效检测 ESBL s的方法 ;治疗产 ESBL s细菌引起的感染 ,可选用亚胺培南、头霉素类及含 β-内酰胺酶抑制剂的复合第三代头孢菌素等敏感的抗生素。

141株鲍曼不动杆菌耐药性分析及β-内酰胺酶基因检测

目的了解从临床标本中分离到鲍曼不动杆菌的耐药特点和β-内酰胺酶基因类型,为临床治疗和控制院内感染以及流行病学调查提供依据。方法用WalKAway-40对临床分离的141株鲍曼不动杆菌进行鉴定,琼脂稀释法测定14种抗生素的最低抑菌浓度,PCR扩增β-内酰胺酶基因,对blaOXA进行克隆测序分析。结果141株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率最低分别为34.3%和41%,对哌拉西林和头孢曲松的耐药率最高分别为93.3%和89.6%;141株鲍曼不动杆菌中有42株(29.8%)blaOXA-23检测阳性,3株(2.1%)blaOXA-58阳性,83株(58.9%)blaOXA-66阳性,79株(56.0%)TEM基因阳性,3株(2.1%)SHV基因阳性,2株(1.4%)CTX-M-1-like阳性,5株(3.5%)CTX-M-14-like阳性;blaOXA-1、blaOXA-2、blaOXA-10、blaOXA-20、blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-50、blaOXA-55、blaOXA-60、CTX-M-2、CTX-M-8检测结果均为阴性。结论该临床分离的鲍曼不动杆菌耐药严重,仅对碳青霉烯类、头孢哌酮/舒巴坦保持较高的敏感性;β-内酰胺酶基因型主要是blaOXA-23、blaOXA-66和TEM,这可能与临床上经常使用碳青霉烯类和三代头孢菌素有关。

临床分离沙门菌的耐药性及超广谱β-内酰胺酶类耐药基因

目的研究北京地区2012—2015年沙门菌临床分离株的血清型分布、耐药状况及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因特征。方法采用最小抑菌浓度法测定北京市肠道门诊分离的677株沙门菌株对16种抗菌药物的耐药情况,采用聚合酶链反应(PCR)方法对244株β-内酰胺酶类耐药菌株进行耐药基因检测。结果677株沙门菌分为68种血清型,其中肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌和山夫登堡沙门菌位居前3位。沙门菌对氨苄西林和阿莫西林/克拉维酸的耐药率分别为42.54%、40.77%,至少耐3种以上抗菌药物的菌株占57.16%。244株对氨苄西林和阿莫西林/克拉维酸耐药的沙门菌,携带至少一种ESBLs基因的菌株174株(71.31%),146株bla_(TEM-1)型,30株bla_(OXA-1)型,18株bla_(CTX-M)型(其中7株bla_(CTX-M-15),6株bla_(CTX-M-55)和5株bla_(CTX-M-14));20株同时携带2种耐药基因。结论该地区沙门菌携带ESBLs耐药基因水平较高,以bla_(TEM-1)为主,同时伴有bla_(OXA-1)和3种bla_(CTX-M)基因亚型,呈现基因多样性。

恶性疟原虫抗药性的分子遗传学机制

耐药疟原虫的播散已使疟疾的预防与治疗更加困难。氯喹因其高效低毒曾经是第一线抗疟药,但现在常常无效。抗氯喹恶性疟原虫分布于南美、非洲及东南亚。

正常粪便中大肠埃希菌产超广谱β内酰胺酶及耐药性调查

目的调查正常粪便中大肠埃希菌(E.coli)的耐药性及产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株的检出率,了解普通人群体内肠道菌对常用抗菌剂的耐药性。方法对来自骨科初入院患者、常规筛查结果正常的粪便标本进行培养,分离获得E.coli菌株后进行药敏试验及ESBLs表型确证试验。结果分离获得的222株E.coli中产ESBLs菌株87株(占39.2%)。所有菌株仅对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南和美罗培南的敏感率大于90%。产ESBLs菌株仅对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南的敏感率大于90%。结论医院应对携带产ESBLs菌株的初入院患者制定完善的管理流程,防止菌株播散,以控制或避免医院感染;非胃肠疾病、且入院后2日内未大量使用抗菌剂的患者肠道基础菌的耐药性较高,治疗后耐药性有可能更高,需加强对抗菌剂使用的管理。

铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性变迁

目的调查某院铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性及其变迁,为临床治疗铜绿假单胞菌感染提供参考依据。方法分析1999—2007年分离的2 127株铜绿假单胞菌对18种β-内酰胺类抗生素的药敏结果。结果 9年来铜绿假单胞菌对18种β-内酰胺类抗生素的耐药率逐年上升,各年度差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。只有美罗培南、亚胺培南和头孢他啶的总耐药率<30%。结论铜绿假单胞菌对多种β-内酰胺类抗生素耐药,且耐药率逐年增加,应适当控制第三代头孢菌素和碳青霉烯类药物的使用,以有效控制及延缓耐药株的产生。

临床分离革兰阴性杆菌耐药性分析及金属β-内酰胺酶检测

目的了解临床标本分离的革兰阴性（G^-）杆菌的耐药性及产金属β-内酰胺酶现状，为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法应用MicroScan及TDR-100微生物鉴定系统，结合K-B纸片扩散法对分离菌株进行鉴定和药物敏感性测定；采用双纸片协同法检测金属B一内酰胺酶。结果839株G^-杆菌中，肠杆菌科细菌450株，非发酵菌389株。肠杆菌科以大肠埃希菌为主，占17．52％，其次为肺炎克雷伯菌，占11．80％；非发酵菌以铜绿假单胞菌为主，占24．43％，其次为鲍曼不动杆菌，占8．58％。肠杆菌科细菌对美罗培南耐药率为0～11．8％，而对美洛西林、头孢哌酮、氨苄西林／舒巴坦、复方磺胺甲曙唑及庆大霉素耐药率达41．2％～91．3％；非发酵菌对头孢吡肟和美罗培南耐药率分别为0-20．0％以及0～30．0％，而对美洛西林、复方磺胺甲嗯唑及庆大霉素耐药率达40．0％-93．3％。在耐头孢他啶和／或美罗培南的258株G^-杆菌中，共检出17株（6．59％）金属β-内酰胺酶阳性菌，产该酶菌株对多种抗菌药物耐药。结论临床分离的G^-杆菌耐药已十分严重，并出现产金属β-内酰胺酶菌株；应加强对细菌耐药性监测，防止耐药菌株播散，尤其是产金属β-内酰胺酶菌株感染的暴发。

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的了解本院超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因在大肠埃希菌中的分布类型及对常用抗菌药物耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法用确证法对54株产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌进行确证,用PCR的方法扩增ESBLs基因片段,用K-B纸片扩散法检测对抗菌药物的敏感性。结果 125株大肠埃希菌中,ESBLs阳性率为43.2%。对青霉素类和第一、二代头孢菌素的耐药率为100%,对头孢噻肟、头孢哌酮和头孢曲松的耐药率在95%以上,对头孢他啶的耐药率为31.5%;对环丙沙星和复方新诺明的耐药率分别为79.6%和83.3%;对β-内酰胺类/酶抑制剂复合制剂仍保持较高的敏感性;未发现耐亚胺培南菌株。含耐药基因型CTX-M型49株、TEM型33株、SHV型1株,同时含有两种基因型达29株。结论产ESBLs大肠埃希菌对18种抗菌药物的耐药情况明显高于非产ESBLs大肠埃希菌。基因型主要为CTX-M,其次为TEM,同时含有两种基因型达29株。明确产ESBLs病原菌的基因型及耐药性对临床抗感染治疗及感染控制有较大意义。

产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性监测分析

目的 监测并分析该医院2004年1～12月间产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药性变化，为临床合理使用抗菌药物提供指导。方法 对2004年1～12月从该院临床送检的各类标本中分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，采用纸片琼脂扩散法（K-B法）与Vitek-AMS的GNS卡Mic法相结合进行药敏试验，并严格按照CLSI／NCCLS（美国临床实验室标准化研究所／美国临床实验室标准化委员会）推荐的标准方法检测ESBLs菌株。结果 分离的498株大肠埃希菌中，产ESBLs的有196株，占39．4％；311株肺炎克雷伯菌中，产ESBLs的有91株，占29．3％。产ESBLs菌株对青霉素类、头孢菌素类、单环β-内酰胺类、氨基糖甙类、氟喹诺酮类等抗菌药物产生多重耐药性；ESBLs菌株的耐药性显著高于非ESBLs菌株（P〈0．05），但对亚胺培南都显示高度敏感性。结论 产ESBLs菌株的感染已成为临床抗感染治疗的难题，临床在抗感染治疗过程中，应严格掌握抗菌药物的应用指标，特别加强对产ESBLs菌株的耐药性监测，合理使用各种抗菌药物，以防止ESBLs菌株的增长、扩散与流行。

泌尿系感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的检测与耐药性分析

目的了解该院尿培养中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的发生率和耐药性,为临床合理选择抗生素提供依据。方法对该院临床和门诊送检的1048例尿培养标本进行分析,用 CLSI/NCCLs 推荐的纸片扩散法进行抗生素敏感试验,双纸片协同筛选试验和纸片扩散法表型确证试验检测产超广谱β-内酰胺酶。结果共分离到大肠埃希菌136株,占阳性标本的42.7%;其中男性48株,占35.3%;女性88株,占64.7%;产 ESBLs 大肠埃希菌46株,占33.8%;未检出对亚胺培南耐药的大肠埃希菌。这类菌对呋喃妥因、磷霉素和头孢哌酮/舒巴坦有较高的敏感率。结论大肠埃希菌为泌尿系感染的主要病原菌,女性患者明显高于男性(P<0.05);产 ESBLs 菌株对庆大霉素等10种抗生素的耐药性明显高于非产 ESBLs 菌株(P<0.05)。亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、磷霉素、呋喃妥因、阿米卡星是治疗 ESBLs 菌的较好选择。临床应重视 ESBLs 的检测,根据药敏试验合理选用抗生素。

新生儿呼吸道感染产超广谱β-内酰胺酶菌的菌群分布及耐药性分析

目的探讨新生儿呼吸道产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌的菌群分布及其耐药情况,指导临床合理用药。方法收集2013年1月至2018年9月分离自该院新生儿科患儿呼吸道的产ESBLs菌和非产ESBLs菌,采用肉汤法进行药敏试验。结果新生儿呼吸道感染产ESBLs菌中肺炎克雷伯菌占72.73%,大肠埃希菌占27.27%,二者的ESBLs检出率分别为48.24%和28.12%。产ESBLs菌对部分抗菌药物耐药率明显高于非产ESBLs株,差异有统计学意义(P<0.05)。对添加β-内酰胺酶抑制剂而言,产ESBLs肺炎克雷伯菌对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为29.17%、90.63%和57.29%;而产ESBLs大肠埃希菌的耐药率分别为8.33%、38.89%和2.78%。产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的多重耐药率分别为97.92%和88.89%。结论新生儿呼吸道感染中产ESBLs菌检出率较高,且新生儿呼吸道产ESBLs菌的多重耐药率高于成人。体外抗菌试验结果显示对导致新生儿呼吸道感染的产ESBLs菌,不同含β-内酰胺酶抑制剂的复合β-内酰胺类抗菌药物其耐药率有差别,将对指导临床合理用药具有积极的意义。

新疆乌鲁木齐地区产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的检测及耐药性分析

目的了解新疆乌鲁木齐地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的检出率及其耐药情况,指导临床合理选择抗菌药物。方法菌株鉴定采用VITEKTWO全自动微生物分析仪,K-B纸片扩散法进行药敏试验,ESBLs采用双纸片增效法,对一年来新疆医科大学第一附属医院肺炎克雷伯菌的耐药谱进行回顾性调查。结果共检出391株肺炎克雷伯菌,经确认试验,产ESBLs菌株167株,其阳性率为42.71%。产ESBLs肺炎克雷伯菌对青霉素类药物耐药率最高,对氨苄西林的耐药率高达100.00%;对亚胺培南的耐药率最低,对美洛培南及哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦也显示出较高的敏感性;对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磺胺类等药物具有较高的多重耐药性。结论肺炎克雷伯菌产ESBLs阳性率及多重耐药率高,对大多数抗菌药物耐药且呈多重耐药,亚胺培南、β-内酰胺酶抑制剂复合物可用于控制肺炎克雷伯菌引起的感染。

尿路感染产超广谱β-内酰胺酶菌的耐药性及危险因素分析

目的探讨尿路感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的耐药性及其危险因素。方法选取尿培养结果为革兰阴性杆菌的患者168例,其中产ESBLs菌尿路感染患者63例为观察组,非产ESBLs菌尿路感染患者105例为对照组,对两组尿路感染细菌的耐药性进行比较,并采用Logistic回归分析产ESBLs菌株致尿路感染的危险因素。结果产ESBLs组对头孢菌素等多种抗菌药物的耐药性显著高于非产ESBLs组,差异有统计学意义(均P<0.01);第3代头孢菌素的使用和留置尿管等是产ESBLs菌致尿路感染的独立危险因素(相关危险度值分别为15.121和8.847)。结论产ESBLs菌株耐药性严重,临床上应采取有效措施加以防控。

铜绿假单胞菌质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶耐药性检测

目的 研究铜绿假单胞菌质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的耐药性，检测产AmpC酶株的耐药表型，为临床抗生素的合理使用提供实验室依据。方法 收集108株临床分离鉴定的铜绿假单胞菌，采用Kirby-Bauer药敏纸片法和头孢西丁三维试验（cefoxitin three dimensional test）方法检测出产AmpC酶阳性菌株，检测AmpC酶阳性菌株对12种抗生素的耐药表型。结果 在所收集临床分离的108株铜绿假单胞菌中，产AmpC酶铜绿假单胞菌28株，产AmpC酶菌株对多种抗生素耐药。结论 铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药，产AmpC酶是铜绿假单胞菌对多种抗生素产生耐药的重要机制。

细菌β-内酰胺酶及外膜蛋白改变与耐药性关系的研究

本文通过细菌β-内酰胺酶活性检测及外膜蛋白电泳分析,研究了它们在细菌耐药性中的作用。结果指出:4株耐Aztreonam(Az)菌株,β-内酰胺酶明显升高,活性达349～1235U,对青霉素类、头孢菌素类产生耐药(MIC≥25μg/ml),但对四环素、氯霉素、诺氟沙星、链霉素等非β-内酰胺抗生素及Imipenem仍敏感。另一株耐AZ,株,β-内酰胺酶无明显升高,但外膜蛋白变化明显,和相应敏感株比较,分子量为36 K、37K蛋白带缺失,37.5 K蛋白减少,39K蛋白增加,对头孢菌素类、四环类、氯霉素、诺氟沙星耐药,但对链霉素,Imipenem及青霉素仍敏感。

烟台地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性分析及基因型检测

目的研究烟台地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性,基因型及菌株的同源性,为监控产酶菌株的流行及指导临床合理选择抗生素提供依据。方法EDTA纸片复合法和E-test法分别筛选产金属β-内酰胺酶菌株,PCR扩增耐药基因imp、vim、spm和gim,用MIC法测定产金属β-内酰胺酶菌株对8种常用抗菌药物的敏感度,用肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC PCR方法)确定菌株之间的同源性。结果42株耐亚胺培南和头胞他啶铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选出18株金属酶菌株、E-test法15株、PCR法12株;PCR法检测到imp阳性菌株4株,vim阳性菌株8株;产金属β-内酰胺酶菌株呈多重耐药,且PCR法阳性产金属酶菌株呈现为高水平耐药;ERIC-PCR结果显示,18株产金属β-内酰胺酶菌株呈现7种基因模型,其中10株为同一基因模型。结论经济简便快捷的EDTA纸片复合法可作为首选方法来对产金属酶铜绿假单胞菌进行筛选,烟台地区临床分离的铜绿假单胞菌所产金属β-内酰胺酶基因型以vim型为主,阿米卡星、环丙沙星具有较好的抗菌活性,某医院在一定时期曾出现爆发流行。