提高重组腺病毒载体提纯和滴定效率的研究

目的 探讨提取、纯化和滴定重组腺病毒表达载体的有效方法。方法将已用含报告基因β-半乳糖苷酶基因（IacZ）的重组5型腺病毒载体（Ad5 CMVLacZ）转染的人胚肾293细胞从-70℃转移至37℃，反复冻融使细胞发生破溃，病毒从细胞内释放至上清液。在上清液中加入氯化铯，进行密度梯度超速离心，收集和透析病毒液，用空斑形成实验确定病毒的滴度。结果经提取和纯化的Ad5 CMVLacZ病毒液清晰无色，用系列稀释法将其配制成10^-2～10^-13的稀释度，分别转染100％汇合的293细胞，连续追踪观察空斑的形成及其数目变化，直至转染后第10天，10^-10稀释度的空斑数不再增加为止，计数其空斑。从而确定出mL病毒的滴度，即空斑形成单位（pfu），最终测定得到的结果是3．0×10^10 pfu/mL。结论 用上述方法能制备出优质的重组腺病毒载体，后者足以达到对中枢神经系统损伤和疾病进行基因治疗的要求。