β-半乳糖苷酶基因在小鼠乳腺细胞表达的研究

构建了以乳清酸蛋白（ＷＡＰ）５′区２．６ｋｂ为调控序列，指导β－半乳糖苷酶基因的真核表达质粒，采用直接注射质粒于乳腺的方法在小鼠乳腺中表达出β－半乳糖苷酶活性，证实ＷＡＰ基因调控序列的功能正确性，可以用于转基因动物乳腺表达研究，同时证实该方法可以作为一种暂时性表达载体的验证方法．

酵母α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达

酵母编码α-半乳糖苷酶的基因MEL1被扩增并克隆到表达载体pRSET中.重组质粒pRSET Gal转化至相应的受体菌BL21(DE3)PlysS,阳性克隆经液体培养和IPTG诱导表达.通过SDS PAGE分析,在50kD处有一目的分子大小的亮带.裂解细菌后经X α Gal的显色底物反应,液体变蓝.试验表明:α-半乳糖苷酶基因MEL1在大肠杆菌中得到了表达,糖基化对于维持此酶的生物活性不是必须的.

阴道毛滴虫黏附蛋白ap33基因克隆及其表达

通过提取阴道毛滴虫mRNA ,逆转录合成cDNA ,PCR得到预期长度片段后 ,将其克隆到pUCm-T载体中进行PCR、酶切及测序分析 ,并与GeneBank中核苷酸序列进行同源性分析。再将其克隆至表达载体PET-32a。重组子用酶切、PCR和测序鉴定后 ,转化大肠杆菌并以异丙基 -B- D- 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。从阴道毛滴虫临床分离株中扩增出 92 7bp的ap33的基因片段 ,构建重组质粒PET- 32a (+) - ap33;IPTG诱导后 ,SDS -PAGE显示表达产物的大小约 5 0kDa。

α-半乳糖苷酶可诱导表达系统的构建及验证

α-半乳糖苷酶可有效降解α-半乳糖苷的抗营养作用,提高饲料养分的利用率。为实现α-半乳糖苷酶的可诱导表达,本研究分别克隆了α-半乳糖苷酶基因和乳糖操纵子序列,构建了α-半乳糖苷酶可诱导表达重组质粒,分别用IPTG和α-乳糖两种诱导物处理,采用流式细胞仪检测乳糖操纵子的诱导效应。

原子转移自由基聚合(ATRP)阳离子化菊粉作为非病毒基因载体的研究

利用原子转移自由基聚合(ATRP)将聚甲基丙烯酸N,N-二甲氨基乙酯[P(DMAEMA)]偶联到菊粉多糖(Inulin)上,合成了新型基因载体PDIN.利用核磁共振仪、动态光散射分析仪、透射电子显微镜和凝胶电泳对PDIN及其与质粒pDNA的复合物进行了表征.凝胶阻滞实验结果表明,PDIN可以通过静电相互作用稳定结合pDNA.噻唑蓝(MTT)细胞毒性测试、溶血实验、绿色荧光蛋白表达质粒(pGFP)及β半乳糖苷酶表达质粒(pβgal)转染实验结果表明,PDIN对MCF-7,Hela,COS7和HepG2细胞的毒性较小;其溶血率低,具有良好的血液相容性;载体PDIN能有效将pGFP和pβgal带入COS7细胞并表达,在N/P为1时转染效率最高,其β半乳糖苷酶的酶活为(3.36±0.74)U/mg蛋白,比Lipo2000转染效率[(4.33±0.77)U/mg蛋白]略低.因此,所合成的载体PDIN是一种有潜在应用价值的非病毒基因载体.

复制缺陷重组腺病毒有效转染兔心包组织的实验研究

目的 观察腺病毒载体转染兔心包组织的有效性和外源性基因表达的时相性。方法 用第五代腺病毒粘粒(Adv5-CAG)为对照组或含β半乳糖苷酶基因的第五代腺病毒质粒(Adv5-CAG/LacZ)为实验组转染兔心包组织,转染后第3、7、14、28 d取被转染组织行β-半乳糖苷酶(X-gal)染色及β半乳糖苷酶活性检测。结果 X-gal染色显示实验组转染后第3、7、14、28 d注射部位心包组织均见蓝染,尤以第7 d最明显,而对照组心包组织均无蓝染;β-半乳糖苷酶活性检查示实验组转染后第3 d心包组织中即有β-半乳糖苷酶表达,7、14 d达高峰,28 d表达量明显减少。结论 重组腺病毒载体可有效地转染兔心包组织,外源性基因在兔心包组织中能够表达并能维持1个月左右。

酿酒酵母可诱导启动子功能特性的研究

把大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因克隆到带有ＧＡＬ１启动子的酵母诱导表达质粒ｐＹＥＳ２中，研究了酵母半乳糖诱导启动子ＧＡＬ１控制下的基因表达特性．研究表明，β－半乳糖苷酶基因的表达明显地受培养基中碳源的调节，产生的β－半乳糖苷酶可达细胞总蛋白含量的１０％左右，从而为利用可调控表达系统在酵母菌中实现外源基因较高水平表达打下了一定基础．