衔接蛋白失能同源物2通过抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3对结核性胸膜炎大鼠炎症和氧化应激的影响

目的:探讨衔接蛋白失能同源物2(DAB2)抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对结核性胸膜炎大鼠炎症和氧化应激的影响。方法:按照随机数字法将60只SPF级雄性SD大鼠分为四组,每组40只。除正常对照组外,结核性胸膜炎组、DAB2组和pcDNA-NLRP3组进行建模处理,以第2天是否抽出胸腔积液为模型建立成功。正常对照组不注射结核分枝杆菌H37RV悬液,DAB2组建模后第2天静脉注射AAV9-DAB2质粒,每天1次,连续注射7 d,DAB2+pcDNA-NLRP3组在注射AAV9-DAB2质粒500μg/L的同时注射pcDNA-NLRP380μl,正常对照组和结核性胸膜炎组的大鼠尾静脉注射0.9%氯化钠溶液。进行各组呼吸功能指标测定,收集胸腔积液,记录积液量,观察3、5、7 d的胸腔积液粘连性情况,HE染色观察胸膜组织病理学情况,Western blot检测胸膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)和MMP-9蛋白表达,荧光探针DCFH-DA分析检测活性氧(ROS)的水平。结果:与正常组相比,结核性胸膜炎组的大鼠的胸腔积液和胸膜厚度明显增加,用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(PEF)、用力呼气容积(FEV)0.3和FEV0.3/FVC显著降低,TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达显著升高,基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)蛋白表达显著降低,丙二醛(MDA)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,ROS累积量明显升高(均P<0.001);与结核性胸膜炎组相比,DAB2组大鼠胸腔积液和胸膜厚度显著降低,FVC、PEF、FEV0.3和FEV0.3/FVC明显升高,DAB2组大鼠胸膜组织中的TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达明显降低,TIMP-1水平明显升高,MDA水平降低,SOD水平升高,ROS累积量明显降低(均P<0.001);与DAB2组相比,DAB2+pcDNA-NLRP3组大鼠胸腔积液和胸膜厚度明显升高,FVC、PEF、FEV0.3和FEV0.3/FVC明显降低,DAB2+pcDNA-NLRP3组的TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达明显升高,TIMP-1蛋白表达显著降低,MDA水平明显升高,SOD水平显著降低,ROS累积量显著升高(均P<0.001),各组大鼠在3、5、7 d的胸腔积液粘连性评分比较采用重复测量设计的方差分析,结果显示,不同时间点的胸腔积液粘连性评分比较差异具有统计学意义(均P<0.001);各组胸腔积液粘连性评分比较差异具有统计学意义(均P<0.001);各组胸腔积液粘连性评分变化趋势比较差异有统计学意义(均P<0.001);与模型组相比,DAB2组大鼠的胸膜内和肺间质内血管充血症状减轻,有少量的纤维组织增生,上皮样细胞团以及凝固型坏死也明显减少,淋巴细胞和中性粒细胞浸润也明显减少;与DAB2组相比,DAB2+pcDNA-NLRP3组大鼠的胸膜内和肺间质内血管充血症状加重,出现的纤维组织增生,上皮样细胞团以及凝固型坏死也明显增多,淋巴细胞和中性粒细胞浸润也明显增加。结论:DAB2通过抑制NLRP3的活性促进胸腔积液的吸收,降低胸膜厚度和粘连发生率,降低炎症反应和氧化应激水平,缓解结核性胸膜炎的进展。

薏苡附子败酱散通过抗三结构域蛋白21-Toll样受体4-t-核因子-κB信号通路对类风湿关节炎MH7A细胞的影响

目的观察不同浓度薏苡附子败酱散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维细胞(MH7A)增殖、凋亡及炎症反应的影响,探究其作用机制。方法2022年2―8月,大鼠用不同浓度薏苡附子败酱散及蒸馏水灌胃制备含药血清;20μg/L的TNF-α处理的MH7A细胞记为TNF-α组,TNF-α+含药血清处理的MH7A细胞记为薏苡附子败酱散低浓度组、薏苡附子败酱散中浓度组、薏苡附子败酱散高浓度组,正常培养的MH7A细胞标记为对照组。细胞计数试剂盒(CCK8)、流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞的存活、凋亡及白细胞介素(IL)-1β、干扰素(IFN)-γ;蛋白质印迹法(WB)检测基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9、抗三结构域蛋白21(TRIM21)、Toll样受体4(TLR4)、t-核因子(NF)-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65、p-NF-κB抑制因子(IκB)-α和t-IκB-α蛋白表达。pcDNA 3.1组(转染空载体)、pcDNA+TRIM21组(转染pcDNA 3.1+TRIM21)、薏苡附子败酱散中浓度+si-con组(转染si-con+4.70 g/kg含药血清)、薏苡附子败酱散中浓度+si-TRIM21组(转染si-TRIM21+4.70 g/kg含药血清)。结果与对照组相比,TNF-α组细胞存活率(105.07±1.90比185.67±3.06)、TRIM21(0.56±0.02比0.68±0.04)、MMP-3(0.18±0.00比0.63±0.02)、MMP-9(0.39±0.01比0.82±0.01)、TLR4(0.25±0.02比0.68±0.07)、p-NF-κB p65(0.24±0.01比0.68±0.06)、p-IκB-α(0.22±0.01比0.55±0.04)蛋白表达和IL-1β(31.65±0.66比101.93±0.60)、IFN-γ(8.53±0.16比63.76±1.35)含量均显著升高,凋亡率(6.54±0.06比1.17±0.08)均显著降低;与TNF-α组相比,薏苡附子败酱散低浓度组(185.67±3.06比153.77±3.09;0.68±0.04比0.37±0.02;0.63±0.02比0.47±0.02;0.82±0.01比0.73±0.01;103.2±0.7比92.93±0.85;66.3±1.45比54.47±1.46;0.68±0.07比0.53±0.05;0.68±0.06比0.53±0.06;0.55±0.04比0.47±0.01;1.84±0.07比6.67±0.28)、薏苡附子败酱散中浓度组(185.67±3.06比136.23±1.57;0.68±0.04比0.57±0.02;0.63±0.02比0.37±0.02;0.82±0.01比0.57±0.00;103.2±0.7比86.4±0.75;66.3±1.45比38.1±0.92;0.68±0.07比0.43±0.07;0.68±0.06比0.59±0.01;0.55±0.04比0.40±0.03;1.84±0.07比9.59±0.29)、薏苡附子败酱散高浓度组(185.67±3.06比143.47±1.50;0.68±0.04比0.47±0.02;0.63±0.02比0.41±0.05;0.82±0.01比0.62±0.00;103.2±0.7比89.63±0.42;66.3±1.45比40.17±0.90;0.68±0.07比0.51±0.06;0.68±0.06比0.69±0.07;0.55±0.04比0.41±0.02;1.84±0.07比8.89±0.08)细胞存活率、TRIM21、MMP-3、MMP-9蛋白和IL-1β、IFN-γ含量及TLR4、p-NF-κB p65、p-IκB-α蛋白表达均显著降低,凋亡率均显著升高(P<0.05);与pcDNA组相比,pcDNA+TRIM21组细胞TRIM21蛋白表达(0.24±0.03比0.51±0.04)、细胞凋亡率(1.61±0.11比12.43±0.61)均显著升高,MMP-3(0.64±0.02比0.41±0.04)、MMP-9(0.82±0.03比0.45±0.02)、IL-1β(110.63±0.55比90.93±0.60)、IFN-γ(64.5±0.82比48.1±1.25)及细胞存活率(179.03±0.74比120.07±0.60)均显著降低;敲减TRIM21显著抑制薏苡附子败酱散中浓度对损伤细胞的治疗作用且显著升高TLR4(0.45±0.06比0.61±0.02)、p-NF-κB p65(0.49±0.02比0.56±0.02)、p-IκB-α(0.38±0.01比0.62±0.01)的蛋白表达。结论薏苡附子败酱散增强TNF-α诱导的MH7A细胞的生存能力,其作用机制与上调TRIM21抑制TLR4-NF-κB信号通路活性有关。

Toll样受体4信号通路中髓样分化因子88和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白在皮肤恶性黑素瘤中的表达及意义

目的探讨Toll样受体4(tol-likereceptor4,TLR4)信号通路下游的髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白(toll-like receptor-associated activator of interferon,TRIF)在皮肤恶性黑素瘤(cutaneous malignant melano ma,CMM)中的表达及与临床特征之间的关联。方法应用免疫组化方法检测40例CMM患者肿瘤组织、10例痣细胞痣患者皮损组织和10例健康皮肤组织中MyD88和TRIF的表达水平,采用SPSS22.0统计学软件进行t检验及Pearson检验处理分析。结果CMM中的MyD88及TRIF的表达强度显著高于痣细胞痣与正常皮肤组织(P<0.05);MyD88、TRIF的表达与CMM患者的年龄、性别等因素无明显相关性,而与发病部位、Clark分级、Breslow厚度、溃疡等因素相关,其中发生于肢端相较于非肢端的恶性黑素瘤表达更显著(P-0.002,0.001);随着Clark分级的增加,原位与浸润肿瘤之间,MyD88、TRIF的表达水平也增加(P=0.001,0.012);随着Breslow厚度的增加,两者表达水平也增加(P=0.004,0.026);合并溃疡的CMM中,MyD88表达增加,有统计学意义(P=0.019);TRIF表达强度无统计学差异(P>0.05);MyD88和TRIF均与CMM患者的淋巴结转移无相关性(P0.05)。结论TLR4下游的MyD88和TRIF相互协同,共同参与CMM的发生与发展。

Toll样受体与核苷酸结合寡聚化结构域蛋白在防御反应中的相互作用

哺乳动物具有两个微生物识别系统,一个系统是由Toll样受体(TLRs)的膜结合受体家族组成;另一个系统是由位于胞浆的核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白家族组成。入侵机体的微生物可能通过不同抗原激活多个模式识别受体,导致免疫反应的产生。本文将对TLRs及NODs信号通路在防御反应中的相互作用进行综述。

子宫内膜Toll样受体和核苷酸结合寡聚体结构域蛋白表达及功能研究进展

Toll样受体(TLR)和核苷酸结合寡聚体结构域蛋白(NOD)是先天性免疫应答中识别各种病原微生物保守结构的模式识别受体,与多种病毒和细菌感染性疾病相关。子宫内膜在雌性动物生殖和免疫过程中扮演特殊且重要的角色,既受到卵巢激素调控对精子及胎儿产生免疫耐受,又识别入侵的病原。研究发现,子宫内膜表达多种TLR和NOD,影响动物的发情、妊娠和免疫。文章综述了TLR和NOD的组成、结构及功能,并总结了子宫内膜TLR和NOD的表达及其介导动物发情、妊娠和免疫的相关作用。

脑小血管病与Toll样受体4核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3信号通路

脑小血管病是指由于各种病因影响脑内小动脉、微动脉、毛细血管、微静脉和小静脉导致的一系列临床、影像和病理综合征[1]。影像学主要表现为腔隙性病灶、脑白质高信号、脑微出血、近期皮质下小梗死灶和脑萎缩等异常信号[2]。在我国脑小血管病占缺血性脑卒中的46%[3]。随着我国人口老年化程度的不断加深,脑小血管病发病率呈逐年上升趋势。目前,脑小血管病的病理生理改变暂时集中于内皮功能障碍、血脑屏障破坏、慢性缺血低灌注和炎性反应等因素。

柯里拉京对小鼠单纯疱疹病毒性脑炎Toll样受体3-干扰素诱导链接蛋白通路的调控机制研究

目的:通过柯里拉京(Cor)干预单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)小鼠模型,阐明柯里拉京对Toll样受体3(TLR3)信号通路的调控机制。方法:通过颅内注射单纯疱疹病毒1型(HSV1)建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型,每天定时灌胃1次等体积的柯里拉京或生理盐水,在第5天断头处死小鼠,取出右侧颞叶病变脑组织进行苏木精-伊红(HE)染色,在显微镜下观察小鼠脑组织病理改变,通过定时定量PCR检测TLR3及其下游信号分子TLR结构域的干扰素诱导链接蛋白(TRIF)mRNA的表达情况,Western blot检测TLR3、TRIF蛋白表达情况,ELISA法检测炎性组织细胞内干扰素α(IFN-α)的分泌情况。结果:HSE小鼠模型中TLR3及其下游分子TRIF的mRNA、蛋白表达及IFN-α的分泌均高于正常对照组(P<0.01);柯里拉京干预可有效缓解动物脑组织的病理变化,且TLR3及其下游分子TRIF的mRNA、蛋白表达及IFN-α的分泌均低于正常对照组(P<0.01)。结论:柯里拉京能明显抑制小鼠小胶质细胞内TLR3通路达到缓解单纯疱疹病毒1型引起的脑组织的损伤。

白细胞介素1受体相关激酶1旁路引发和直接连接Toll样受体至快速核苷酸结合寡聚化结构域样受体含热蛋白结构域3炎性体激活

致病性感染和组织损伤引发炎性体的组装，这种胞质蛋白复合物激活半胱天冬酶-1（caspase-1），促进白细胞介素1β前体（pro-IL-1β）和pro-IL-18的切割成熟，还能调节caspase-1依赖的程序性细胞死亡（pyroptosis）。众所周知，微生物识别Toll样受体（TLR）主要是诱导激活caspase-1，但已知的TLR功能仅限于上调炎性体的作用。

秦艽鳖甲散调控Toll样受体4信号通路改善银屑病小鼠皮损作用机制研究

目的:研究秦艽鳖甲散改善银屑病小鼠皮肤损伤和炎症反应的分子机制。方法:将60只小鼠按照随机数字表法随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组(1 mg/kg)及低剂量、中剂量、高剂量秦艽鳖甲散组(0.98、1.95、3.90 g/kg)。除对照组仅剔除毛发,其余各组均使用咪喹莫特构建银屑病小鼠模型。苏木精-伊红(HE)染色检测皮损组织病理变化;银屑病面积与严重性指数评分(PASI)评估皮损程度;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清炎症介质水平;实时萤光定量PCR(qRT-qPCR)检测白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)、白细胞介素-22(IL-22)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平;免疫组织化学检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达水平;蛋白免疫印迹检测NLRP3、TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:与模型组比较,甲氨蝶呤组及低剂量、中剂量、高剂量秦艽鳖甲散组小鼠皮损状态明显改善;PASI评分明显降低;血清炎症介质水平、NLRP3及TLR4/NF-κB通路相关蛋白水平明显降低(均P<0.05)。结论:秦艽鳖甲散能够改善银屑病小鼠皮肤损伤和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB通路,下调NLRP3表达有关。

IgG刺激诱发的小胶质细胞Toll样受体4表达及细胞因子分泌

目的:了解在体外培养条件下免疫球蛋白G(IgG)刺激对小胶质细胞表达Toll样受体4(TLR4)和分泌细胞因子的作用。方法:用不同浓度的IgG(2mg/L、20mg/L、200mg/L)及脂多糖(LPS)(10mg/L)刺激原代培养的大鼠小胶质细胞,24h后以免疫荧光染色观察TLR4的表达,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的含量。结果:IgG直接作用于体外培养的小胶质细胞后,以剂量依赖的方式引起TLR4的表达和TNF-α的分泌,但未检测到IFN-γ含量的变化。作为阳性对照的LPS引起了小胶质细胞TLR4表达,并诱导了TNF-α及少量IFN-γ的分泌。结论:同种IgG刺激可使体外培养的小胶质细胞大量表达TLR4,可能通过MyD88依赖途径导致炎性细胞因子分泌。结果提示至少在中枢神经系统的固有免疫反应中,TLR4可能发挥识别病原体之外的蛋白分子,例如IgG的作用。

Toll样受体4接头分子对乳酸诱导巨噬细胞M2极化的促进作用及其机制

目的:探讨Toll样受体4 (TLR4)接头分子髓样分化因子88 (MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1 (IL)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,定向敲除MyD88和TRIF基因(MyD88-KO组和TRIF-KO组),设未感染的Raw264.7细胞为对照组,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测基因敲除效果。实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组。15 mmol·L^(-1)乳酸诱导24 h后进行各指标检测。RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1(Arg1) mRNA表达水平,光学显微镜下观察各组细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、γ干扰素(INF-γ)和白细胞介素10 (IL0)水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子κB (NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。采用Autodock软件将乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF分子对接并观察其结合情况。结果:采用CRISPR/Cas9技术进行基因定向敲除后,与对照组比较,MyD88-KO组和TRIF-KO组细胞中MyD88和TRIF mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。乳酸作用24 h后,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中M2极化标志物CD206和Arg1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均降低(P<0.05)。细胞形态表现,Raw264.7+乳酸组细胞表现出M2极化形态,即体积增大、明显突起伪足和偏锥形细胞比例增加;MyD88-KO+乳酸组细胞同样表现出M2极化形态变化;TRIF-KO+乳酸组细胞形态变化不明显。ELISA法检测,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ水平差异无统计学意义(P>0.05),IL0水平明显升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显升高(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting法检测,与未处理Raw264.7组比较,Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组细胞中TLR4蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),Raw264.7+乳酸组细胞中核因子κB抑制蛋白α (IκB-α)和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。分子对接,乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF形成氢键数为2、4和4,结合能分别为-2.72、-3.24和-3.66。结结论论:乳酸作用巨噬细胞后,可通过调控TRIF抑制IκB-α活性进而抑制NF-κB,促进M2极化。

辛伐他汀对小鼠巨细胞病毒肺炎Toll样受体2表达的影响

目的:观察辛伐他汀对小鼠巨细胞病毒(MCMV)肺炎小鼠肺组织Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR-2)、干扰素γ(IFN-γ)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响,并探讨辛伐他汀干预MCMV肺炎的可能机制。方法:将40只6~8周龄BALB/c小鼠随机分成5组:正常对照(NC)组、MCMV感染组和辛伐他汀干预(SMV1、SMV2和SMV3)组。SMV1、SMV2和SMV3组分别在腹腔注射MCMV前7 d、与MCMV同时和MCMV感染后3 d给予辛伐他汀(50 mg·kg^(-1)·d^(-1),均连续给药7 d)灌胃,NC组及MCMV组分别予以同体积的生理盐水灌胃。HE染色观察小鼠肺组织的病理改变,real-time PCR检测MCMV DNA的变化,免疫组化和Western blot检测肺组织中TLR-2的表达,ELISA检测肺组织中IFN-γ和MCP-1的变化。结果:与NC组相比,MCMV组肺组织病理染色显示肺泡间质水肿,肺泡壁增宽,内可见大量炎性细胞浸润;肺组织中TLR-2的表达增加,MCMV DNA含量升高,肺组织中炎症因子IFN-γ和MCP-1明显增多(P<0.05)。辛伐他汀干预后,与MCMV组相比,肺组织病理改变较前减轻,TLR-2的表达下降(P<0.05),MCMV DNA含量降低(P<0.05),炎性因子IFN-γ和MCP-1明显下降(P<0.05),且SMV1组TLR-2的表达量及MCMV DNA含量下降较SMV2和SMV3组更明显(P<0.05),而SMV2和SMV3两组相比差异无统计学显著性。结论:辛伐他汀干预通过下调TLR-2信号通路而降低TLR-2的表达,减少IFN-γ和MCP-1的分泌,并抑制MCMV DNA的复制,从而使肺组织的病理损害得以减轻;且提前给予辛伐他汀干预对预防MCMV的感染及减轻炎症反应具有重要作用。

脂多糖与干扰素α联用诱导白血病U937细胞凋亡及其机制

目的:探讨Toll样受体配体内毒素脂多糖(LPS)与干扰素(IFN)-α联用对白血病U937细胞凋亡的作用及其对caspase-8基因表达的影响。方法:将200μg/L的LPS和(或)2000U/mL的IFN-α作用于U937细胞,MTT检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测作用48h后U937细胞中caspase-8mRNA的表达。结果:LPS与IFN-α联用较单用LPS、IFN-α能明显抑制U937细胞增殖、增加细胞凋亡率(P<0.01),且各药物组较对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。LPS与IFN-α联用48h后,caspase-8mRNA的表达水平较IFN-α组、LPS组和对照组均升高(P<0.01)。结论:LPS与IFN-α联用能有效抑制白血病细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与caspase-8的激活有关。

重组干扰素α-2b雾化对毛细支气管炎患儿炎症因子及血清MMP-9、TLR4、TGF-β_(1)的影响

目的:探讨重组干扰素α-2b雾化对毛细支气管炎患儿炎症因子及血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Toll样受体4(TLR4)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))的影响。方法:选取2020年1月—2022年6月在汉川市妇幼保健院诊治的118例毛细支气管炎患儿为研究对象,采用随机数表法将其分为对照组(n=59)和研究组(n=59)。对照组给予常规治疗,研究组在常规治疗的基础上给予重组干扰素α-2b雾化治疗。比较两组治疗前后的炎症因子及血清MMP-9、TLR4、TGF-β_(1)水平。结果:治疗后两组白细胞介素-4(IL-4)、MMP-9、TLR4、TGF-β_(1)水平较治疗前均降低,白细胞介素-10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)水平较治疗前均升高,研究组IL-4、MMP-9、TLR4、TGF-β_(1)水平均低于对照组,IL-10、IFN-γ水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组的治疗总有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:重组干扰素α-2b雾化辅助治疗毛细支气管炎患儿,可有效改善炎症因子,降低血清MMP-9、TLR4、TGF-β_(1),疗效显著。

基于TLR3/TRIF通路分析重组人干扰素α2b联合炎琥宁对病毒性肺炎患儿的疗效与作用机制

目的基于Toll样受体3(TLR3)/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)通路分析重组人干扰素α2b联合炎琥宁对病毒性肺炎(VP)患儿的疗效与作用机制。方法选取2020年1-5月收治的VP患儿200例,根据治疗方法不同分为观察组和对照组,每组100例。对照组给予重组人干扰素α2b治疗,观察组在对照组基础上加用炎琥宁治疗。治疗7 d后,比较2组临床疗效、临床症状改善时间、住院时间及不良反应发生情况,比较2组治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)中TLR3/TRIF通路相关因子[TLR3、TRIF、核因子-κBp65(NF-κBp65)]mRNA表达量、血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)水平及呼吸功能[呼吸频率(RR)、潮气量(VT)、呼气达峰时间(TPTEF)/呼气时间(TE)]。结果观察组临床总有效率高于对照组,退热时间、咳嗽消失时间、呼吸困难消失时间、肺啰音消失时间及住院时间均短于对照组(P<0.01)。治疗7 d后,观察组PBMC中TLR3、TRIF、NF-κBp65 mRNA表达量以及RR低于对照组,血清IgG、IgA、IgM水平以及VT、TPTEF/TE高于对照组(P<0.05)。2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人干扰素α2b联合炎琥宁治疗VP患儿的效果显著,可改善临床症状、呼吸功能,提高免疫球蛋白含量,其作用机制与抑制TLR3/TRIF通路活化有关。

Toll样受体信号通路相关衔接蛋白与乳腺癌的关系及中医药干预研究进展

Toll样受体(TLRs)在机体免疫系统中起着重要作用,且可同时表达于免疫细胞和肿瘤细胞。通过综述近年文献发现:TLRs信号通路的TLR2、TLR3、TLR4、TLR9、核转录因子-κB(NF-κB)、血管内皮生长因子(VEGF)等相关衔接蛋白与乳腺癌并非单一协同或拮抗作用,反映出该通路在乳腺癌发生发展中的复杂性;在中医药抗乳腺癌细胞增殖、转移的作用机制方面,有关研究也涉到TLRs及其通路这一领域,并探索了一些单药或复方对乳腺癌细胞TLRs通路相关靶点的作用,为中医药抗乳腺癌的运用及明确其作用机制提供了实验依据。

TLR3激活协同干扰素α抑制小鼠海马神经元DISC1表达

目的研究TLR3激活对小鼠海马神经元的精神分裂症断裂基因1(DISC1)表达的影响。方法分离培养C57BL/6J小鼠E18海马神经元,给予1μg/mL polyI:C或/和100 IU/mL mIFNα处理细胞24 h后,用RT-qPCR、免疫细胞化学和Western blot方法检测DISC1 mRNA和蛋白的表达,并检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、信号传导和转录激活因子1(STAT1)及糖原合成激酶3β(GSK-3β)的磷酸化。结果相比对照组,polyI:C组和IFNα组DISC1 mRNA及蛋白水平无明显变化,而共刺激(IFNα+polyI:C)组DISC1表达显著下降(P<0.05)。此外,polyI:C和共刺激组p38 MAPK磷酸化水平增加(P<0.05),且IFNα和共刺激组STAT1磷酸化水平亦显著升高(P<0.05),而GSK-3β磷酸化水平无变化。结论外源性IFNα协同TLR3激活可部分通过p38 MAPK和JAK/STAT1信号通路抑制DISC1的表达。

模式识别受体与自噬

模式识别受体识别微生物病原体是天然免疫反应起始的一个重要因素。这些受体可以识别病原微生物共享的保守的分子结构,并诱导下游的信号通路,调节免疫反应。自噬是一个特殊的生物过程,通过隔离并降解细胞大分子、细胞器和病原微生物及其产物,维持细胞的稳态,是调节细胞内代谢反应的重要机制,同时也在天然免疫反应中起到了关键作用。不同的模式识别受体(包括Toll样受体、核酸低聚结构域蛋白样受体、视黄酸诱导基因Ⅰ样受体和DNA感受器)与自噬在天然免疫反应过程中相互调节,模式识别受体参与了自噬的诱导与成熟,自噬也调节了模式识别受体启动的天然免疫反应。本文就模式识别受体与自噬的相互调节领域的研究内容进行综述。

慢病毒介导短发夹RNA干扰技术建立小鼠肺组织TRIF沉默模型

目的通过慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰技术建立小鼠肺组织β干扰素Toll/白细胞介素1受体结构域衔接蛋白(TRIF)沉默模型。方法构建TRIF的siRNA干扰质粒及慢病毒载体。将18只Balb/c小鼠随机分为空白组、实验组、对照组,每组6只。分别将含TRIF-shRNA、对照慢病毒载体的病毒液经鼻滴入转染实验组、对照组小鼠的肺组织。第8天处死小鼠取肺组织检测绿色荧光蛋白表达情况,取肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织检测TRIF mRNA和蛋白的表达水平。结果实验组肺组织中可见明显绿色荧光蛋白表达,且肺组织中的TRIF mRNA和及蛋白表达水平均低于空白组及对照组(均P<0.05)。3组肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织中的TRIF mRNA表达水平差异无统计学意义(均P>0.05)。结论使用滴鼻方法可有效建立肺组织局部TRIF沉默小鼠模型。

桔梗皂苷D对大鼠溃疡性结肠炎的改善作用及对TLR4/NOD信号通路蛋白表达的影响

【目的】探讨桔梗皂苷D对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用及机制。【方法】将50只大鼠随机分为5组,包括正常组,模型组,桔梗皂苷D低、中、高剂量组,每组10只。除正常组大鼠给予蒸馏水饮用外,其他组大鼠通过在饮用水中施加5%硫酸葡萄糖钠(DSS)连续7 d诱导构建溃疡性结肠炎模型。实验第2~8周,桔梗皂苷D低、中、高剂量组大鼠分别灌胃10、25、50 mg·kg^(-1)·d^(-1)桔梗皂苷D混悬液,正常组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水。给药期间,观察大鼠一般情况。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察结肠组织病理形态并进行组织学评分,Western Blot法检测结肠组织Toll样受体4(TLR4)/核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)通路相关蛋白TLR4、髓样分化因子88(MyD88)和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达水平。【结果】(1)与正常组比较,模型组大鼠体质量、生存率、结肠长度和结肠质量均显著降低,疾病活动指数(DAI)评分显著升高(均P<0.01);与模型组比较,桔梗皂苷D低、中、高剂量组大鼠体质量、生存率、结肠长度和结肠质量均显著升高,DAI评分显著降低,其中,桔梗皂苷D中剂量组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)与正常组比较,模型组结肠组织病理学评分升高(P<0.001);与模型组比较,桔梗皂苷D低、中、高剂量组结肠组织病理学评分均显著降低(P<0.05或P<0.01)。(3)与正常组比较,模型组中TLR4、MyD88和NLRP3的蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,桔梗皂苷D中剂量组的TLR4、MyD88和NLRP3蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】桔梗皂苷D可改善大鼠溃疡性结肠炎,其机制与通过TLR4/NOD信号通路缓解肠道炎症有关。