β淀粉样多肽诱导培养大鼠神经元钙超载的实验研究

目的 :观察人工合成的 β淀粉样多肽 (Aβ)对培养神经元细胞内游离钙 ([Ca2 + ]i)的影响以及褪黑素 (Mel)的阻断作用。材料和方法 :用激光扫描共聚焦显微镜技术 ,检测给予不同浓度 (Aβ2 5～ 3 5和Mel后新生大鼠皮层培养神经元 [Ca2 + ]i荧光强度。结果 :神经元暴露Aβ2 5～ 3 50 5、 1、 10 μmol/L环境后 ,[Ca2 + ]i荧光与对照组比较均呈较有意义升高 (P <0 0 5 ) ;同时暴露Mel组 ,未见钙荧光强度升高。结论 :Aβ2 5～ 3 5可诱导神经元[Ca2 + ]i升高 ,并呈剂量依赖性 ;预先给予Mel可部分阻断这种毒性作用。

阿尔茨海默病中β淀粉样多肽与线粒体异常及靶向治疗

β淀粉样多肽沉积与线粒体异常改变均为阿尔茨海默病的主要特征,也是其发病机制中的关键环节。β淀粉样多肽通过在线粒体内沉积导致线粒体功能障碍;通过与分裂/融合蛋白相互作用引起线粒体形态分布异常及突触功能损害;通过引起线粒体内钙稳态失调诱导细胞凋亡。同时,线粒体异常也加重β淀粉样多肽的毒性。在以上作用环节中,对电子传递链、分裂/融合蛋白、亲环蛋白D等新旧靶点及相关治疗药物的深入研究为阿尔茨海默病的线粒体靶向治疗带来希望。

腹内侧前额叶注射β淀粉样多肽对大鼠自发活动的影响

目的检测腹内侧前额叶微注射β淀粉样多肽对大鼠自发活动的影响。方法双侧腹内侧前额叶边缘下皮层区(IL区)微量注射Aβ1-42作为Aβ组,微注射溶媒为溶媒组,27天后进行自发活动检测,腹内侧前额叶进行石蜡切片HE染色。结果虽然HE染色显示Aβ组IL区细胞受损或完全消失,但Aβ组和溶媒组在大鼠自发活动的总路程、总时间、中间区域活动路程和中间区域活动时间等方面比较,差异均无显著性。结论腹内侧前额叶边缘下皮层区微注射β淀粉样多肽不影响大鼠本身的自发活动。

基于硫同位素稀释质谱法的β淀粉样多肽绝对定量研究

采用液相色谱-同位素稀释质谱(HPLC-ID-ICPMS)在线联用技术,通过对β淀粉样多肽中硫元素的测定,实现了β淀粉样多肽的准确定量分析。首先通过优化4种液相色谱条件,将β淀粉样多肽纯品中的Aβ42与杂质进行分离,然后将液相洗脱液与34S稀释剂在线混合,针对34S稀释剂对34S/32S信号强度和灵敏度的影响,对34S稀释剂的流速进行了优化,并根据同位素稀释法的公式以及Aβ42中硫元素含量,得到β淀粉样多肽中Aβ42的含量为(0.763±0.004) g/g。本方法在5~60μg/g范围内,线性相关系数为0.999,检出限为140 pg/g,定量限为467 pg/g,目标物的回收率均在98%~105%之间,相对标准偏差均小于6%。本样品采用氨基酸水解法的测量结果为(0.768±0.009) g/g,两种方法的测量结果一致性良好。

β淀粉样多肽纤维形成与阿尔茨海默病

阿尔茨海默病（AD）是老年性痴呆常见的类型，其主要病理改变之一为老年斑。老年斑是AD患者脑内出现的以β淀粉样多肽（Aβ）为主要成分，含有变性的轴突、神经纤维以及胶质细胞突起的病理性斑块。Aβ是淀粉样蛋白前体（APP）的酶解产物，研究证实大脑及脑脊液中Aβ含量的增高与认知能力下降密切相关。Aβ具有较强的聚集能力，其相互聚集形成的纤维具有毒性，能够促发炎症级联反应、轴突损伤、突触丢失和细胞凋亡等病理改变，是导致神经元变性乃至形成痴呆的重要因素。研究Aβ分子结构及其纤维形成的机制，探讨阻止其聚集的方法，在AD的防治研究中有着重要的意义。

康复训练对血管性痴呆大鼠海马β淀粉样多肽及胰岛素降解酶的影响

目的观察康复训练对血管性痴呆（VD）大鼠海马B一淀粉样多肽（Aβ）及胰岛素降解酶（IDE）的影响。方法共选取30只SD大鼠，采用随机数字表法将其分为康复组、模型组及假手术组。选用结扎双侧颈总动脉方法制成VD大鼠模型，康复组每天进行1h康复训练。于术后第4周进行行为学测试，以评估各组大鼠学习记忆能力；待行为学测试结束后采用免疫组化法检测各组大鼠海马（DG）区Aβ及IDE表达。结果术后第4周时发现康复组大鼠学习记忆功能明显优于模型组（P〈0．05）；且康复组大鼠海马区Aβ表达较模型组显著降低（P〈0．05），IDE表达则较模型组明显增高（P〈0．05）。结论康复训练能改善YD大鼠学习记忆功能，其治疗机制可能与上调IDE表达、减少Aβ在海马中的蓄积有关。

Alzheimer氏病淀粉样前体蛋白的研究进展

Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ氏病（ＡＤ）是一种发生于老年人群的原发性退行性脑病，其特征性病变为细胞内神经纤维缠绕（ＮＦＴ）及细胞外老年斑（ＳＰ）．构成ＳＰ的主要成分β淀粉样多肽（βＡ）为一由淀粉样前体蛋白（ＡＰＰ）剪切而来的分子质量约为４ｋｕ的多肽，其神经毒性可能由其氧化作用和在脂质双层中形成的Ｃａ２＋通道所致．ＡＰＰ的功能目前尚未完全明了，可能具有促进细胞粘附、维护突触膜稳定性等功能．ＡＰＰ主要通过两种途径进行加工修饰：一为分泌途径，由一些假定的分泌酶催化；另一为胞内体溶酶体途径．在形成ＳＰ的βＡ中，较长者比短者更易聚集，因此一些ＡＰＰ突变由于能够释放出更多的较长的βＡ或者使较短的βＡ生成量增加而致发家族性ＡＤ．一些可能在ＡＰＰ的代谢中起着重要作用的因素，如早衰蛋白的突变，也可通过增加βＡ的生成量而致发ＡＤ．

β-淀粉样蛋白寡聚化模拟研究进展

AD主要病理改变之一为老年斑。聚集的β淀粉样多肽(Aβ)纤维是老年斑构成核心,也导致AD患者神经退行性病变和认知障碍。Aβ神经毒性主要来自于可溶性Aβ寡聚体。但是关于Aβ及其寡聚体的毒性性质存在不同的研究观点,而且Aβ的聚集机制和产生毒性的机制尚不十分明确。Aβ的折叠和聚集是一个非常复杂的过程,在研究寡聚化问题时,经典的方法不能揭示寡聚化过程中原子间的相互作用。分子动力学可以在时标和不可能实验研究的细节上,提供可见的、可量化的蛋白质3D结构。结合近几年的研究成果,综述了分子动力学模拟方法模拟Aβ寡聚化过程的研究进展,以期为AD的早期预防、诊断和治疗提供参考。

糖尿病合并阿尔茨海默病患者中分拣蛋白相关受体-1基因和胰岛素样生长因子-1的表达及其相关性

目的:研究分拣蛋白相关受体-1(sortilin-related receptor 1,SORL1)基因和胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)在老年糖尿病合并阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者中的表达及相关性分析.方法:选择30例老年糖尿病AD患者(A组)、30例老年AD不合并糖尿病患者(B组)、30例老年糖尿病不合并AD患者(C组)和30例老年健康人群(D组),采用PCR法检测血清SORL1 mRNA水平,ELISA法检测血清IGF-1和β淀粉样多肽(Aβ)水平,免疫组织化学染色检测微管结合蛋白(Tau)磷酸化水平;比较各组上述指标表达的差异性,分析SORL1 mRNA和IGF-1水平的相关性.结果:A组血清SORL1 mRNA水平最高,B组次之(P<0.05);C组和D组差异无统计学意义(P>0.05).血清IGF-1和Aβ水平、Tau磷酸化阳性率A组>B组>C组>D组,差异有统计学意义(P<0.05).Pearson检验显示:A组SORL1 mRNA与IGF-1水平呈负相关(r=?0.723,P=0.013),其他3组无相关性(P>0.05).结论:SORL1基因和IGF-1在老年糖尿病合并AD患者中异常表达,可影响Aβ和Tau蛋白的形成;结果还需要进一步验证.

血清胰岛素样生长因子1在老年糖尿病痴呆患者中的表达及相关信号通路分析

目的研究血清胰岛素样生长因子1(IGF-1)在老年糖尿病痴呆患者中的表达及相关信号通路。方法选择2017年6月至2018年12月上海市第九人民医院黄浦分院神经内科就诊且符合标准的患者120例,将患者分为4组,其中A组为老年痴呆且合并糖尿病患者,B组为老年痴呆未合并糖尿病患者,C组为老年糖尿病未合并痴呆患者,D组为老年健康体检人群,每组各30例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测4组研究对象血清IGF-1和β淀粉样多肽(Aβ)水平,免疫组化染色微管结合蛋白(Tau蛋白)磷酸化阳性率,Western blot法检测朊蛋白(PrP)、叉头状转录因子O(FOXO)亚家族蛋白和p-PI3K、p-Akt水平。结果A组患者IGF-1和Aβ水平、Tau蛋白阳性率、PrP、FOXO蛋白和p-PI3K、p-Akt水平均高于B组,B组高于C组和D组,差异均有统计学意义(P<0.05),C组和D组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论IGF-1在老年糖尿病合并痴呆患者中呈高表达,可能与p-PI3K/Akt信号通路激活,PrP、FOXO蛋白异常表达有关,最终影响了Aβ和Tau蛋白的形成。

PS1/APP双转基因AD模型小鼠与Aβ_(1-40)海马注射AD模型大鼠的组织病理学比较

目的对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimerdisease,AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异。方法对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl’s染色结合免疫组织化学方法观察脑内Aβ沉积和星形胶质细胞的活化情况。结果①PS1/APP双转基因AD小鼠刚果红染色显示皮质和海马内广泛圆形Aβ沉积,周围绕以胶质细胞带,免疫组化显示GFAP阳性细胞活化呈团块聚集。②AD大鼠刚果红染色显示单侧海马齿回区有Aβ斑块状沉积,Nissl’s染色显示注射针道附近海马锥体层细胞丢失,注射侧海马GFAP阳性细胞增多。结论Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠尽管可以模拟人类AD疾病的部分特征病理改变,但是不能模拟疾病渐进性的病理学改变。PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理改变与渐进性过程,是较为理想的实验动物模型,但该模型未发现细胞丢失。

抗氧化剂在阿尔茨海默病治疗中的地位和临床应用前景

氧化应激与β淀粉样多肽沉积、线粒体功能障碍等病理改变相互促进,在阿尔茨海默病(AD)发生发展中起重要作用。抗氧化治疗因而成为AD治疗的重要方面。大量基础研究证实抗氧化剂对AD的病情有改善作用,并从中筛选出许多具有临床应用前景的抗氧化药物。但在临床试验中,这些抗氧化剂的效果仅有部分获得肯定,许多抗氧化剂在AD治疗中的效果并没有达到预期水平,仍需进一步研究和探索。

华佗健聪汤拮抗Aβ所致神经毒性的体外研究

目的探讨华佗健聪汤对β淀粉样多肽(Aβ)所致神经毒性的拮抗作用。方法以原代培养的SD乳鼠神经元为材料,随机分为正常组、模型组、华佗健聪汤组、人参皂苷Rg1对照组。除正常组外,其余各组用Aβ1-42造成神经元损伤,华佗健聪汤组用华佗健聪汤给SD成年大鼠灌胃(含生药20 g/kg)后获取的大鼠含药血清进行干预,人参皂苷Rg1对照组用人参皂苷Rg1进行干预。观察并拍摄细胞形态,检测MTT值,取细胞上清夜检测LDH、T-AOC、NO等指标。结果华佗健聪汤组与模型组相比,MTT、T-AOC显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05);而LDH和NO则明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论华佗健聪汤对Aβ所致神经元损伤的大鼠有较好的保护作用,抗自由基的氧化损伤作用可能是其保护神经元的作用机制之一。

凝聚态Aβ_(25～35)可通过JNK/p38 MAPK途径诱导胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨JNK／p38MAPK在p淀粉样蛋白多肽片段25-35（Aβ25-35）诱导的阿尔茨海默病（AD）样胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化中的作用。方法 应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法，观察Tau蛋白磷酸化和JNK／p38丝裂原活化的蛋白激酶（JNK／p38MAPK）的表达情况。结果凝聚态Aβ25-35（20μmol／L）作用于皮层神经元12h，Tau蛋白sep396、Ser199/202、Thr205位点的磷酸化水平明显增高，同时JNK／p38MAPK的总量及其活性形式．磷酸化JNK／p38MAPK的蛋白表达水平也增加。结论 Aβ25-35可通过激活JNK／p38MAPK使Tau蛋白的磷酸化水平增高。

氯胺酮上调GSK-3β活性加重Aβ_(25-35)诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化

目的探讨氯胺酮对凝聚态Aβ25-35诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)Tau蛋白过度磷酸化的影响及可能作用的机制。方法将培养的PC12细胞随机分为对照组(C)、10μmol/L Aβ25-35(A组)、1 mmol/L氯胺酮(K组)、氯胺酮和Aβ25-35(AK组),作用时间均为6 h。MTT比色法测定细胞活力,蛋白免疫印迹检测Tau蛋白不同磷酸化位点和糖原合成激酶3β(GSK-3β)在Ser9位点的磷酸化(p-GSK-3βSer9)相对于GSK-3β的表达水平,用GSK-3β特异性抑制剂氯化锂(LiCl)干预。结果 AK组的细胞存活率显著低于其余组;Tau蛋白在Ser396、Ser404和Thr231位点的磷酸化水平显著高于A组(P<0.05)。LiCl可通过增加p-GSK-3βSer9的表达抑制上述变化。结论氯胺酮通过上调GSK3β的活性增加Aβ25-35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化。

朊蛋白在阿尔兹海默症中作用的研究进展

蛋白质构象病是一类由于蛋白构象错误而引发组织病变的疾病。阿尔兹海默症是一类典型的蛋白质构象病,而关于其相关蛋白,β淀粉样多肽(Aβ)诱发疾病的机理目前有很多种说法,最近发现朊蛋白在Aβ诱发阿尔兹海默症的过程中有着较为重要的作用。综述了朊蛋白与Aβ的主要作用方式以及这些相互作用与阿尔兹海默症关系研究的最新研究进展。

咪达唑仑对凝聚态Aβ25-35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化和凋亡蛋白的影响

目的探讨咪达唑仑对凝聚态Aβ25～35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白过度磷酸化的影响及凋亡相关蛋白表达的变化。方法将培养的PC12细胞随机分为4组:对照组(C组);10μmol/L Aβ25～35(A组);20μmol/L咪达唑仑(M组);咪达唑仑和Aβ25～35(MA组),作用时间均为6小时。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活力;用免疫印迹法和免疫细胞化学染色,观察咪达唑仑对Aβ25～35诱导的PC12细胞不同磷酸化位点Tau蛋白的表达、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)的表达和PC12细胞形态的变化。结果咪达唑仑作用于凝聚态Aβ25～35诱导的PC12可使凋亡相关蛋白Bax表达增高,Bcl-2表达降低。Tau蛋白Ser396、Ser404位点磷酸化水平显著增高(P<0.05)。结论咪达唑仑可增强凝聚态Aβ25～35诱导的大鼠PC12细胞Tau蛋白的过度磷酸化和细胞凋亡蛋白表达的增加。

胆固醇在阿尔茨海默病发病机制中的作用

一、AD的β淀粉样多肽假说 无论早发型还是迟发型AD,它们的一个共同特征是β淀粉样多肽(Beta-amyloid,Aβ)在脑的特定区域的异常聚集.这种异常聚集在细胞外形成老年斑,是AD特征性的病理改变之一.