人参皂苷Rg_1对β-淀粉样肽(25-35)侧脑室注射所致小鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的 观察人参皂苷Rg1对 β 淀粉样肽 [β AP ,(2 5 - 35 ) ]所致小鼠拟阿尔茨海默 (AD)学习记忆功能障碍的改善作用及其作用机制。方法 小鼠侧脑室注射凝聚态 β AP 4nmol,次日 ,ipRg15和 10mg·kg-1,10d后 ,测试各组被动回避、空间学习记忆能力 ,及皮层、海马组织胆碱乙酰转移酶 (ChAT)和乙酰胆碱酯酶 (AchE)活性变化。结果人参皂苷Rg1可明显改善 β AP所致小鼠被动回避、空间学习记忆能力及皮层海马组织ChAT活性的下降。β AP对小鼠AchE活性无显著性影响 ,但与对照、模型组相比 ,Rg1明显抑制AchE活性。结论 Rg1对 β AP(2 5 - 35 )所致的小鼠学习记忆障碍有显著改善作用 ,其对胆碱能系统的影响是Rg1重要作用机制之一。

左旋黄皮酰胺对冈田酸和β淀粉样肽_(25-35)神经毒性的保护作用

探讨左旋黄皮酰胺对冈田酸(okadaic acid,OA)诱导的人神经瘤细胞(SH-SY5Y)和去卵巢(ovariectomy,OVX)及单侧侧脑室注射Aβ25-35所致神经元损伤的保护作用。通过MTT试验、LDH释放测定试验、Hoechst 33258荧光染色试验以及SH-SY5Y细胞检测,考察左旋黄皮酰胺拮抗冈田酸诱导的细胞毒作用。通过避暗试验、电镜检测、Nissl体染色及HE染色,考察左旋黄皮酰胺对去卵巢及侧脑室注射Aβ25-35大鼠神经元的保护作用。左旋黄皮酰胺可明显拮抗冈田酸诱导的细胞毒作用,提高去卵巢及侧脑室注射Aβ25-35大鼠的学习记忆能力,保护海马及皮层神经元。左旋黄皮酰胺可拮抗冈田酸及Aβ25-35诱导的神经毒性,具有神经保护作用。

三七总皂甙对淀粉样β_(25～35)肽诱导的NG108-15细胞老年性痴呆模型的保护作用(英文)

背景:阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)的病理病因虽然还没有完全清楚,但目前认为β-淀粉样肽(amyloidβ-peptide,Aβ)是引起AD的胆碱能神经功能紊乱的主要成分。因此,Aβ的产生及其对神经细胞的影响,以及寻找该病的发病机制、治疗方法及其有效的治疗药物成了医药界的研究热点。目的:观察三七总皂甙(PNS)对NG108-15细胞老年性痴呆模型的影响,为寻找该病的发病机制提供佐证,为研究和开发中药的新成分提供理论依据。设计:体外平行对照实验。单位:广西中医学院新药开发中心,广西中医学院生物化学教研室。对象:实验在广西中医学院新药开发中心完成。NG108-15细胞:中国科学院上海细胞研究所提供。PNS:云南玉溪维和制药厂生产。Aβ25～35片段:德国Sigma公司产品,批号:042K49501。MTT(四甲基噻唑蓝),德国Sigma公司产品,批号:020609。cAMP(环一磷酸腺苷)日本ャマサ酱油株式会社产品,批号:00207。胚胎牛血清(FBS):由美国Hy-clone公司提供,批号:0405。DMEM培养基:美国GIBCO公司产品,批号:0311。干预:NG108-15细胞培养法:含50mL/L胚牛血清、10g/LHAT、10g/L青霉素和链霉素(1:1)的DMEM培养液,置100mL/LCO2、37℃用的培养箱内培养殖,每隔一天换一次液,4d传代一次。主要观察指标:利用MTT法、细胞计数法和细胞形态学?

溶血磷脂酸对β-淀粉样蛋白片段AβP31-35所致小鼠大脑皮层离体神经元凋亡的神经保护作用(英文)

已报道低浓度溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对去血清培养所致的神经元凋亡有神经保护作用.为了进一步观察LPA是否对β-amyloid peptide fragment 31-35(AβP31-35)所致的神经元凋亡也起类似的作用,本研究应用DNA电泳分析、HO33342和TUNEL染色法等技术,对培养的小鼠大脑皮层神经元进行了观察.结果显示,只有使用较低浓度的LPA(1～10μmol/L)、并且将此剂量的LPA比AβP31-35提前12～24 h加入培养液时,才可看到LPA明显削弱了AβP31-35所致的神经元凋亡.以上结果表明,适当浓度的LPA在长时间预作用的条件下,可对AβP31-35所致的皮层神经元凋亡起保护因子或抗凋亡因子的作用,但其作用途径可能较在去血清培养所致的凋亡时更为复杂,因为在去血清的同时加入LPA就能制止去血清所致的凋亡.

β-淀粉样蛋白31-35片段对海马神经元分离膜片Ca^(2+)激活大电导钾通道的抑制

为了确定β－淀粉样蛋白（ＡβＰ）在影响神经元电生理特性并导致神经毒作用时的最短活性序列，实验采用膜片钳技术，在急性分离的大鼠海马ＣＡＩ区锥体细胞的“内面向外”式膜片上，观察了ＡβＰＲ的３１－３５和２５－３５片段对Ｃａ２＋激活大电导钾（ＢＫ）通道活动的影响。结果显示，浴液中给予 ５μｍｏｌ／Ｌ的ＡβＰ ３１－３５后，ＢＫ通道的平均开放概率（Ｐｏ）和开放频率在１～３ｍｉｎ内分别减少了８５．８％（Ｐ＜０．０１）和７２．１％（Ｐ＜０．０１）；平均开放时间减少了４１．１％（Ｐ＜０．０１）；平均电流幅度则无明显改变（Ｐ＞０．０５）；给子同样摩尔浓度的ＡβＰ ２５－３５后，ＢＫ通道平均Ｐｏ减少了８５．５％（Ｐ＜０．０１），平均开放时间减少了５１．４％，（Ｐ＜０．０５）。结果提示，两种ＡβＰ片段对海马神经元ＢＫ通道具有抑制作用，这可能与ＡβＰ的神经毒性作用有关；ＡβＰ３１－３５片段可能是ＡβＰ分子中影响细胞电生理特性的最小活性序列。

姜黄素对β-淀粉样肽(25-35)诱导去血清培养PC12细胞周期异常与细胞凋亡的影响

目的:探讨姜黄素(Cur)对β-淀粉样肽(25-35)(βamyloid peptide-25-35,Aβ25-35)诱导体外去血清培养的PC12细胞周期异常与凋亡的影响。方法:PC12细胞用常用的去血清培养使细胞同步于G0期,用MTT比色法分析细胞存活率,流式细胞仪检测分析细胞周期与凋亡,Hoechst33258荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21基因的变化。结果:用不同终浓度(0,1.25,2.5,5,10,20μmol.L-1)Cur预处理去血清培养的PC12细胞1 h,再用Aβ25-35处理24 h,细胞存活率增加;Aβ25-35引起的S期细胞百分率明显减少,凋亡率明显降低(P<0.01),亚二倍体峰消失;核固缩、碎裂减少;p21 mRNA表达和P21蛋白表达增加。结论:Cur可以影响Aβ诱导的去血清培养PC12细胞周期分布及减少凋亡,可能与上调p21的表达有关。

黄皮酰胺对β-淀粉样多肽25～35片段诱导的大鼠学习记忆功能障碍的影响

目的 :研究黄皮酰胺对诱导产生的模拟人类 Alzheimer病 (AD)的病理模型大鼠的影响。方法 :采用文献报道的方法获得病理模型 ,并以口服方式给予黄皮酰胺 ,观察其与对照组在行为学上的差异。行为测试采用跳台法和 Y型水迷宫法。结果 :给药组与对照组在行为学上的差异有统计学意义。结论 :黄皮酰胺可显著抑制病理模型的学习记忆功能障碍。

慢性孵育β淀粉样肽_(25-35)对培养大鼠海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响

目的 研究慢性孵育 β淀粉样肽2 5- 35(β AP2 5- 35)对海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响。方法 用RT PCR方法检测mRNA的表达 ,用光密度扫描法半定量测定表达变化。结果 在正常培养的海马神经元上延迟整流 (Kv2 1,Kv1 5 ) ,瞬间外向 (A型 ) (Kv4 2 ,Kv1 4 ) ,钙激活的大电导 (rSlo)钾通道亚型均有表达。β AP2 5- 353μmol·L- 1 孵育细胞 2 4h后 ,Kv2 1mRNA的表达明显上调 ,其它亚型则无显著性变化 ;β AP2 5- 35上调Kv2 1mRNA的作用主要发生在 β AP2 5- 35应用后 4 8h内 ;6 0h后Kv2 1mRNA表达水平显著下调。结论 Kv2 1转录水平的上调可能参与 β AP2 5- 35选择性地增加海马神经元上延迟整流钾电流 (IK)的作用。

β淀粉样肽_(25-35)对PC细胞p53和bcl-2基因表达的影响

目的:观察β淀粉样肽2 5- 35(βamyloid peptide2 5- 35,Aβ2 5- 35)诱导PC12细胞凋亡和对p5 3及bcl- 2基因表达的影响。方法:采用终浓度分别为0、5、10、2 0 μmol/ L Aβ2 5- 35处理PC12细胞2 4 h,用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst332 5 8- PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,DNA电泳观察梯状条带(DNA- L adder) ,RT- PCR和Westernblot检测p5 3和bcl- 2基因表达变化。结果:随着Aβ2 5- 35剂量的增加,PC12细胞存活率降低,凋亡明显增加,p5 3基因表达增加,bcl- 2基因表达降低。结论:Aβ2 5- 35诱导PC12细胞凋亡可能与上调p5 3基因,下调bcl- 2基因有关。

肝再生增强因子在β-淀粉样肽(25-35)诱导PC12细胞中的表达

目的观察肝再生增强因子(ALR)在β-淀粉样肽(25-35)(Aβ25-35)诱导PC12细胞阿尔茨海默病(AD)体外模型中的表达。方法体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,分为实验组和空白对照组,实验组用终浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞建立AD细胞模型,MTT法测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,应用RT-PCR检测ALR mRNA表达变化、Western印迹法检测ALR蛋白表达变化。结果 Aβ25-35组中PC12细胞的存活率较对照组明显降低(P<0.05),细胞凋亡率也明显增高(P<0.05),ALR mRNA在Aβ25-35组中表达较对照组明显降低(P<0.05),W estern印迹法检测其蛋白表达也较对照组下降(P<0.05)。结论 ALR在Aβ25-35诱导PC12细胞致AD模型中表达减少,可能与AD的发生发展有关。

β-淀粉样肽（25-35）对PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β-amyloid peptide25—35（Aβ25-35）对PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响。方法：采用终浓度分别为0，5，10，201μmol／L的Aβ25-35处理PC12细胞24h，用MTT比色法分析细胞存活率；Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变；RT—PCR检测par-4和bcl-2基因mRNA表达变化；Western blot检测Par-4和Bcl-2蛋白表达变化。结果随着Aβ25-35剂量的增加，PC12细胞存活率降低，凋亡明显增加，且par-4基因表达增加，bcl-2基因表达降低。结论：Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡可能与上调Par-4表达和下调Bcl-2表达有关。

磷脂酶C-三磷酸肌醇途径参与β-淀粉样肽(25-35)诱导的海马神经元[Ca^2＋]i的增加

目的探讨内质网(ER)钙库在β-淀粉样肽(25-35)(Aβ25-35)诱导的细胞内钙超载中的作用。方法用钙高度特异性荧光探针Flou-3/AM负载海马神经元,进行荧光染色,利用激光扫描共焦显微镜观察在不同药物干预条件下海马神经元内游离钙离子荧光强度的变化。结果 2、10、20μmol/L各浓度组凝聚态Aβ25-35均增加了海马神经元胞内[Ca2+]i(n=5,P<0.05);三磷酸肌醇受体(IP3R)的特异性抑制剂2-APB明显地抑制了胞内[Ca2+]i的增加,蓝尼碱受体(RyR)的特异性抑制剂硝苯呋海因(dantrolene)却无法抑制。Aβ25-35作用1h后内质网钙容量即有明显下降,作用24h后降低更为明显。在无细胞外钙情况下,磷脂酶C(PLC)的抑制剂U73122部分抑制了Aβ25-35诱导的胞内[Ca2+]i的增加。结论凝聚态Aβ25-35可通过IP3途径产生,IP3作用于IP3R而引起内质网钙的释放,磷脂酶C的活化可能参与了上述过程。

原发老年性痴呆淀粉样β_(25～35)多肽诱导乙酰胆碱能受体缺损的研究

目的:探讨活性肽段Aβ25～35是否可以直接改变神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nAchRs)亚型的表达及其机制。方法:实验于2002/2003在瑞典皇家医学院老年病研究所中心进行。采用配体结合实验以及WesternBlot,RPA法,观察在Aβ25～35侵害早期,PC12细胞损伤机制。结果:用nmol浓度Aβ25～35能明显降低PC12细胞nAchRs结合位点数量,引起α7等亚单位蛋白和mRNA水平不同程度的下降,Aβ25～35(0.1～100nmol/L)作用后,[3H]epibatidine结合力平均显著下降37.4%,Aβ25～35(10～100nmol/L)共同孵育,[125I]α-BTX结合力平均降低为28.2%。α7亚单位随Aβ25～35(1～100nmol/L)呈剂量依赖性递减分别为23.4%,α3亚单位随Aβ25～35(0.1～100nmol/L)呈剂量依赖性递减分别为42.8%。α7亚单位mRNA水平随Aβ25～35(1～100nmol/L)呈浓度依赖性下降分别为33.8%。对照组反转肽段Aβ35～25对PC12细胞nAchRs结合位点,α3,α7,β2亚单位的蛋白和mRNA水平无明显影响。nmol浓度Aβ25～35与nAchRs的特异结合力较弱,但明显抑制细胞活性。结论:在AD病程早期,Aβ可直接引起nAchRs退行性改变;细胞内在信号传导系统的失衡可能是引起nAchRs生物合成降低的原因之一。

β淀粉样肽22-35单克隆抗体的制备和应用

目的制备稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,以Aβ2 2 -35单克隆抗体建立Aβ检测方法。 方法以人工合成的Aβ2 2 -35连接匙孔槭血蓝蛋白 ,免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0 细胞融合 ,制得能稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,采用Westernblotting增强化学发光技术观察大鼠脑内Aβ含量。 结果得到 2株能稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,Aβ2 2 -35单克隆抗体的Ig亚类为IgG3 ,青年组和老年组大鼠脑Aβ含量分别为 9.8± 2 .8和 13 .3 6± 2 .65 pmol/ 12mg脑组织。 结论制备得到的Aβ2 2 -35单克隆抗体特异性强 ,效价高 ,测得的老年大鼠脑Aβ含量显著高于青年大鼠。

艾塞那肽-4改善β淀粉样蛋白诱导的小鼠昼夜节律紊乱及时钟蛋白CLOCK蛋白的异常表达

目的探讨艾塞那肽(exendin)-4对β淀粉样蛋白(Aβ)引起的C57BL/6小鼠昼夜节律紊乱的影响,观察exendin-4对Aβ引起的海马时钟蛋白CLOCK蛋白异常表达的影响。方法海马内注射15 nmol Aβ31-35、50 pmol Exendin-4,对照组海马内注射等体积的高压三蒸水,利用Vital View跑轮分析软件观察各实验组小鼠昼夜节律的变化。蛋白质印迹法检测各组小鼠海马区CLOCK蛋白在不同时间的表达变化。结果 Aβ处理组小鼠出现明显昼夜节律紊乱,其自由运转周期为(23.67±0.05)h,鲁棒值为(22.5±4.3)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),Exendin-4预处理组小鼠昼夜节律部分恢复正常,其自由运转周期为(23.53±0.05)h,鲁棒值为(47.0±4.0)%,与Aβ处理组比较差异有统计学意义(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,对照组CLOCK蛋白在CT8和CT20表达高,在CT2和CT14时表达低,Aβ处理组CLOCK蛋白表达缺乏节律性,Exendin-4预处理组CLOCK蛋白部分恢复节律表达。结论 Exendin-4可部分恢复Aβ31-35导致的C57BL/6小鼠的昼夜节律紊乱,并部分纠正Aβ31-35引起的海马区CLOCK蛋白的异常表达。

β-淀粉样肽神经细胞损伤模型的建立及应用

目的：建立β-淀粉样肽神经细胞损伤模型，探讨工具药维生素E，加兰他敏，四乙基铵，多奈哌嗪对Aβ25-35孵浴造成细胞损伤的影响，寻找具有抗Aβ损伤作用的工具药。方法：（1）应用不同浓度Aβ25-35孵浴神经细胞24hr、48h、72hr，MTT法测定细胞存活率，以确定有效的损伤时间和剂量。（2）应用神经细胞损伤模型，预防性给予上述几种工具药，72hr后MTT法检测该模型细胞存活率。结果：（1）分别单独应用3μmol／L、10μmol／L Aβ25-35，

β淀粉样蛋白25～35急性给药和慢性孵育对神经元Ca2+非依赖性的K+电流作用的比较

目的探讨β-淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）急性给药和慢性孵育对神经元Ca^2＋非依赖性的K^＋电流作用的区别。方法急性分离大鼠海马及培养皮层神经元;Aβ25-35急性给药（3min）或慢性孵育（24h）;利用全细胞膜片钳技术记录Ca^2＋非依赖性的K^＋电流以及Calcein-AM法检测神经元活力。结果Aβ25-35急性给药使急性分离的海马神经元Ca^2＋非依赖性的K^＋电流幅度明显降低（n=11）,而慢性孵育则使培养的皮层神经元该电流幅度明显升高（n=11）。前者是Aβ25-35通过对K^＋通道直接的效应发挥其抑制作用,而后者可能主要是通过Aβ25-35上调通道蛋白,改变通道数量而发挥作用。结论不同的给药方式通过不同的机制对海马和皮层神经元的Ca^2＋非依赖性的K^＋电流产生不同的作用。

第Ⅲ组代谢性谷氨酸受体抑制Aβ_(31～35)诱导的神经元胞内钙增高

目的观察第Ⅲ组代谢型谷氨酸受体激动剂L-SOP和(R,S)-PPG对Aβ31～35所致培养神经元胞内Ca2+浓度升高的影响。方法原代培养的大鼠额叶皮层神经元,分别加入第Ⅲ组mG luR s激动剂L-SOP或(R,S)-PPG,利用实时Ca2+荧光成像技术观察对Aβ31～35所致〔Ca2+〕i升高的影响。结果急性给予Aβ31～35可引起培养神经元的〔Ca2+〕i水平呈剂量依赖性的升高,即随着Aβ31～35浓度的增加,其〔Ca2+〕i升高的幅度逐渐增加,而潜伏期逐渐缩短;经L-SOP或(R,S)-PPG预处理后,使Aβ31～35所引起的〔Ca2+〕i的平均升高幅度降低,平均潜伏期明显延长。结论在离体培养的神经元第Ⅲ组mG luR s的激活可通过抑制Aβ31～35引起的Ca2+超载,对Aβ31-35诱导的神经毒发挥保护作用。

雷帕霉素改善Aβ31-35所致小鼠昼夜节律紊乱

目的:观察大环内酯类抗生素雷帕霉素(Rapa)对β-淀粉样蛋白31-35(Aβ31-35)引起的C57BL/6小鼠昼夜节律紊乱及小鼠海马神经元细胞系HT22中Per2表达异常的影响。方法:选取6～8周雄性C57BL/6小鼠进行跑轮行为学实验,分析Rapa在改善Aβ31-35所致小鼠昼夜节律紊乱中的作用。将HT22神经细胞随机分为对照组、Aβ31-35组、Rapa预处理组和Rapa单独处理组,CCK-8法检测细胞活力。采用real-time PCR法检测上述各组细胞于circadian time(CT)4、CT8、CT12、CT16、CT20和CT24的Per2 mRNA表达水平,通过Western blot方法检测Per2 mRNA表达差异最大时点CT16的PER2蛋白表达水平。结果:与对照组相比,Aβ31-35引起小鼠昼夜节律紊乱,自由运转周期显著延长;Rapa预处理后,小鼠的昼夜节律紊乱情况有所改善,自由运转周期显著降低。Aβ31-35引起HT22细胞活力显著降低且具有剂量依赖性;Rapa预处理后有效逆转Aβ31-35诱导的HT22细胞存活率下降(P<0.05)。经Aβ31-35处理后,HT22细胞Per2的mRNA水平在CT16处较对照组明显降低;Rapa预处理后Per2的mRNA异常表达得到显著改善。与对照组相比,Aβ31-35组CT16时Per2蛋白水平显著降低;与Aβ31-35组相比,Rapa预处理组Per2蛋白水平在一定程度上升高(P<0.05)。结论:Rapa可以有效缓解Aβ31-35所致C57BL/6小鼠昼夜节律紊乱,并有效改善Aβ31-35所致HT22细胞中Per2的异常表达。