阿尔茨海默病患者血清中人β淀粉样蛋白1-42和人磷酸化tau-181蛋白的临床检测意义

目的探讨阿尔茨海默病(AD)患者血清中人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)和人磷酸化tau-181蛋白(p-tau-181)的临床检测意义。方法选取60例AD患者作为AD组,依据简易智力状态检查表(MMSE)评分不同分为轻度AD组(20例)、中度及以上AD组(40例);选择同期进行体检的75例健康受试者作为健康对照组。对两组血清Aβ1-42和p-tau-181水平进行检测。比较AD组与健康对照组不同性别血清Aβ1-42和p-tau-18水平;AD组与健康对照组血清Aβ1-42和p-tau-18水平;AD组不同严重程度血清Aβ1-42和p-tau-18水平。结果健康对照组中男性受试者血清Aβ1-42和p-tau-18水平与女性比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。AD组中男性患者血清Aβ1-42和p-tau-18水平与女性比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。AD组血清Aβ1-42和p-tau-18水平分别为(102.0±12.3)、(22.1±6.9)pg/ml,显著高于健康对照组的(33.7±10.6)、(10.9±7.1)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。中度及以上AD组血清Aβ1-42和p-tau-18水平分别为(108.2±11.1)、(25.3±7.3)pg/ml,高于轻度AD组的(89.6±9.8)、(15.7±8.6)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AD患者中血清Aβ1-42和p-tau-181均呈高表达,且其浓度与AD患者病情严重程度呈正相关。

七氟烷对β淀粉样蛋白_(1-40)诱导的大鼠认知功能障碍影响及机制

目的 探讨七氟烷吸入对β淀粉样蛋白(Aβ)_(1-40)诱发的大鼠认知功能障碍影响及其可能的机制。方法 于2021年8月至2022年8月,将32只成年雄性Sprague-Dawley大鼠以随机数字表法分为生理盐水(NS)+氧气组、NS+七氟烷组、Aβ+氧气组和Aβ+七氟烷组,每组8只,分别给予双侧海马内注射NS或Aβ_(1-40)。吸入30%氧气或2.5%七氟烷过程中监测生命体征,采用Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能;酶联免疫吸附测定检测海马Aβ_(1-40)水平;免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙接头蛋白分子1(IBA1)的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测白细胞介素-1β(IL-1β)、核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达;蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-xL(Bcl-xL)、胱天蛋白酶-9(caspase-9)、脑源性神经营养因子(BDNF)和晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的蛋白表达。结果 维持吸入2.5%七氟烷在4个不同时间点(1、2、3和4 h)对大鼠生命体征无影响。与NS+氧气组比较,Aβ+氧气组大鼠原始平台探索时间减少,逃逸潜伏期增加;与Aβ+氧气组相比,Aβ+七氟烷组大鼠原始平台探索时间减少,逃逸潜伏期增加(P<0.05)。Aβ+七氟烷组大鼠海马区Aβ_(1-40)水平[(42.18±5.72)ng/L],GFAP和IBA1阳性细胞数[(24.33±1.21)个和(37.82±3.23)个],caspase-9和RAGE蛋白表达(0.74±0.11和0.81±0.07),IL-1β、NF-κB和iNOS mRNA表达(28.98±12.32、25.91±12.31和43.92±17.21)均高于NS+七氟烷组[(18.13±2.89)ng/L、(10.51±0.96)个、(17.17±1.77)个、0.23±0.02、0.29±0.03、1.35±0.04、1.37±0.05、1.42±0.06]和Aβ+氧气组[(32.61±4.82)ng/L、(15.76±1.25)个、(24.76±2.31)个、0.45±0.08、0.68±0.08、10.23±6.56、6.51±2.34、13.23±4.81];Bcl-xL和BDNF蛋白表达(0.13±0.04和0.18±0.04)低于NS+七氟烷组(1.07±0.31和0.58±0.07)和Aβ+氧气组(0.46±0.11和0.33±0.04)(P<0.05)。而NS+氧气组和NS+七氟烷组之间各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 七氟烷通过启动大鼠海马的神经毒性、神经炎症和神经元凋亡,加剧了Aβ_(1-40)诱发的大鼠认知功能障碍。

牛膝提取物含药血清对Aβ_(1-42)诱导的神经元氧化应激和凋亡的调控机制研究

目的探讨牛膝提取物含药血清对β淀粉样蛋白_(1-42)(amyloidβ-protein_(1-42),Aβ_(1-42))诱导的神经元氧化应激和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养大鼠海马神经元,分为对照组,模型组(Aβ_(1-42)诱导神经元),牛膝低、中、高剂量组(15、30、45μg/mL的牛膝提取物含药血清作用于Aβ_(1-42)诱导的神经元),si-ZBTB20-AS1组[Aβ_(1-42)诱导转染锌指和BTB结构域蛋白20的反义RNA小干扰RNA的神经元]和si-NC组(Aβ_(1-42)诱导转染乱序无意义阴性序列的神经元)。ELISA法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR法检测ZBTB20-AS1表达水平,Western blot法检测细胞增殖抗原Ki67和胱天蛋白酶-3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3)表达水平。结果与对照组比较,模型组SOD含量、细胞存活率、Ki67蛋白表达均降低(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1表达、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,牛膝中、高剂量组SOD含量、细胞存活率、Ki67蛋白表达均升高(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1表达、Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-ZBTB20-AS1组SOD含量、细胞存活率、Ki67蛋白表达均升高(P<0.05),MDA含量、细胞凋亡率、BTB20-AS1表达、Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05)。结论牛膝提取物含药血清可能通过下调ZBTB20-AS1表达抑制Aβ_(1-42)诱导的海马神经元氧化应激和凋亡。

寡聚态β-淀粉样肽_(1～42)可通过胶质-炎症反应损伤神经元

目的观察寡聚态β-淀粉样肽1～42(Oligo-Aβ1～42)诱导的小胶质细胞条件培养液对Neuro-2A神经元细胞的影响,探讨炎症介质在胶质介导的神经元损伤中的作用。方法以Oligo-Aβ1～42诱导BV-2细胞,制备小胶质细胞条件培养液,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定Neuro-2A神经细胞的活力,AO-EB染色荧光显微镜观察计数细胞凋亡和坏死率;酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定小胶质细胞培养上清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及前列腺素E2(PGE2)水平;Griess法检测上清NO水平;免疫印迹法测定小胶质细胞胞质环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平。结果Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液(Aβ-CM)明显引起Neuro-2A神经细胞损伤,MTT法显示神经元活力随Aβ诱导剂量的增加而逐渐下降(P<0.01),并且浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的Aβ-CM组比同浓度Aβ单纯组神经细胞的存活率更低,分别为(53.75±3.95)和(34.61±2.72)(Aβ-CM组与Aβ单纯组相比P<0.05,P<0.01);联合作用组(Aβ-CM+Aβ)神经细胞存活率下降更明显,两因素方差分析显示,Aβ诱导的小胶质细胞条件培养液与单纯Aβ(1.0μmol/L)有协同作用[F(3,39)=53.16,P<0.001]。AO-EB荧光观察计数显示,低浓度(0.2μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液可引起神经细胞发生凋亡性损伤,较高浓度(1.0～5.0μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导不仅引起神经细胞凋亡,还引起细胞发生坏死性改变。进一步研究显示,低浓度(0.2～5.0μmol/L)的Oligo-Aβ1～42明显增加小胶质细胞培养上清中TNF-α、PGE2、NO的产量及胞质COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),呈现一定的量效关系。结论低浓度Oligo-Aβ1～42可通过胶质-炎症反应加剧神经元损伤,其作用可能与Oligo-Aβ1～42诱导小胶质细胞产生炎症介质及胞质内COX-2、iNOS蛋白表达水平增高有关。

与IGFBP-3相关的RXRα、STAT-1信号通路在β-淀粉样肽_(1～42)诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)、视网膜X受体α(RXRα)及信号转导子和转录激动子(STAT-1)在β-淀粉样肽1～42(Aβ1～42)诱导大鼠海马神经元凋亡中的可能作用。方法以原代培养的大鼠海马神经元为模型,分为对照组和Aβ1～42组,加入不同浓度的凝聚态Aβ1～42,原位缺口末端标记法(TUNEL)观察凋亡细胞的形态;免疫细胞荧光方法检测凋亡细胞及IGFBP3、RXRα阳性细胞;免疫印迹法检测RXRα蛋白和STAT-1蛋白的表达水平。结果20μmol/LAβ1～42作用大鼠海马神经元24h能明显诱导神经元凋亡,表现为TUNEL/DAPI染色出现阳性细胞;20μmol/LAβ1～42作用大鼠海马神经元3～6h后IGFBP3阳性细胞、RXRα阳性细胞、RXRα蛋白的表达水平均较对照组有明显增高(P<0.01),在较高水平保持一段时间后逐渐下降;而STAT-1蛋白的表达水平则显著降低(P<0.01)。结论IGFBP3/RXRα或STAT-1信号转导通路可能在Aβ1～42诱导大鼠海马神经元凋亡中起一定作用。

β-淀粉样多肽1-42(Aβ_(42))多克隆抗体的制备及其鉴定

目的 :β -淀粉样多肽 1 - 4 2 (Amyloidβ1 -42 ,简称Aβ42 )是存在于阿尔茨海默病 (Alzheimer′sDis ease,AD)患者脑组织中的特异病理改变之物 ,同时它在AD患者的脑积液及血浆中有所改变。我们制备Aβ42多克隆抗体及其建立测定方法 ,是希望找到一个特异性鉴定AD的生物指标。方法 :将Aβ42 多肽与匙孔虫戚血蓝蛋白 (KLH)偶联 ,免疫新西兰白兔从而产生抗 -Aβ42 多克隆抗体。此特异性抗体可用于ELISA、Western印迹法和免疫组织化学的方法中 ,并可测定AD脑组织中的特异性淀粉样沉淀物。结果 :通过免疫组织化学法鉴定此抗 -Aβ42 多克隆抗体 ,结果显示在AD患者的脑组织淀粉样沉淀物中呈阳性。同时应用Western印迹法对Aβ42 抗体进行了鉴定 ,结果显示Aβ42 多肽的分子量与Aβ42 多肽标准的 4 5kDa分子量相一致。结论 :我们所制备的Aβ42 多克隆抗体能与Aβ42 抗原呈特异性结合 ,这就为研究淀粉样前体蛋白 (APP)

豆腐果苷对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病模型大鼠认知功能的影响

目的:探究豆腐果苷(HEL)对β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导阿尔茨海默病(AD)大鼠认知功能的影响。方法:24只SPF级健康雄性SD大鼠随机分成生理盐水(NS)组、Aβ_(1-42)+NS组、Aβ_(1-42)+HEL组、HEL组,每组6只。通过脑立体定位双侧海马区注射Aβ_(1-42)(5μg/μL)建立AD模型,注射3 d后Aβ_(1-42)+NS组和Aβ_(1-42)+HEL组分别给予生理盐水和豆腐果苷(50 mg/kg)灌胃治疗4周;作为对照,NS组和HEL组分别给予生理盐水和豆腐果苷(50 mg/kg)灌胃4周。治疗结束后通过Morris水迷宫实验对各组大鼠行为、认知能力进行评估;通过HE染色检测各组大鼠海马CA1区细胞的形态变化;采用免疫组化检测大鼠海马CA1区核因子-κB(NF-κB)表达情况;免疫印迹检测大鼠海马中淀粉前体样蛋白(APP)、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达水平。结果:(1)与NS组相比,Aβ_(1-42)+NS组大鼠逃逸潜伏期明显延长,穿越原平台次数和停留在原平台象限的时间均显著降低;海马CA1区细胞形态发生明显核固缩;APP、NF-κB、TNF-α表达显著升高(P<0.05)。(2)与Aβ_(1-42)+NS组相比,Aβ_(1-42)+HEL组大鼠逃逸潜伏期明显缩短,穿越原平台次数和原平台所在象限停留时间均明显增多。(3)海马CA1区细胞核固缩得到良好改善;APP、NF-κB、TNF-α表达明显降低(P<0.05)。(4)NS组和HEL组大鼠Morris水迷宫结果无显著差异,APP、NF-κB和TNF-α蛋白在海马CA1区均无明显变化。结论:豆腐果苷能够改善Aβ_(1-42)诱导AD大鼠认知功能,可能与抑制APP、NF-κB及TNF-α的蛋白表达有关。

β淀粉样蛋白42寡聚体诱导神经元毒性和阿尔茨海默病病理形成

目的探究β淀粉样蛋白(Aβ)42寡聚体对神经元毒性的作用及诱导产生类似阿尔茨海默病(AD)病理的机制。方法采用Western blot检测和透射电子显微镜对合成的Aβ_(42)寡聚体进行鉴定。为评估Aβ_(42)寡聚体的影响,使用2,5-二苯基四氮唑溴盐检测细胞活性,将10μmol/L的Aβ_(42)寡聚体与人神经母细胞瘤系(SH-SY5Y)细胞共孵育12h和24h,与人胚胎干细胞(hESC)衍生的谷氨酸能神经元共孵育24h、48h和96h,同时设立相应对照组。原位末端标记法检测谷氨酸能神经元凋亡情况;免疫荧光染色法检测AD相关病理Aβ斑块及p-tau病理变化。结果Western blot显示,Aβ_(42)寡聚体样品中观察到单体和小分子量聚集体(<30000)。透射电子显微镜成像显示,Aβ_(42)寡聚体主要呈圆球形颗粒状。10μmol/L的Aβ_(42)寡聚体与SH-SY5Y细胞共孵育12h、24h,细胞存活率显著低于其对照组[(70.89±2.54)%vs(100.00±2.02)%,(52.63±3.37)%vs(100.00±2.80)%,P<0.05]。10μmol/L的Aβ_(42)寡聚体与谷氨酸能神经元共孵育24h、48h和96h,细胞存活率显著低于其对照组(P<0.05)。10μmol/L的Aβ_(42)寡聚体与谷氨酸能神经元共孵育48h、96h,凋亡率显著高于其对照组[(1.44±0.31)%vs(1.00±0.38)%,(1.75±0.64)%vs(1.00±0.31)%,P<0.05]。10μmol/L的Aβ_(42)寡聚体与谷氨酸能神经元共孵育24h、48h、96h,均产生呈圆形颗粒状的Aβ斑块阳性信号,其对照组均无Aβ斑块阳性信号。10μmol/L的Aβ_(42)寡聚体与谷氨酸能神经元共孵育24h,细胞在Thr231位点处产生tau过度磷酸化,Aβ_(42)寡聚体组平均荧光强度显著高于其对照组(P<0.05)。结论Aβ_(42)寡聚体对SH-SY5Y细胞和谷氨酸能神经元均具有毒性,可以诱导谷氨酸能神经元产生AD样病理。

非痴呆血管性认知障碍患者血清p-tau-181Aβ_(1-42)及sLOX-1在早期诊断中的意义

目的探讨血清磷酸化tau蛋白-181(p-tau-181)、β淀粉样蛋白_(1-42)(Αβ_(1-42))、可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)在非痴呆血管性认知障碍患者早期诊断中的临床意义。方法选取2022-04—2023-03临汾市人民医院收治的102例非痴呆血管性认知障碍患者为研究组,以同期在我院体检的110例健康者为对照组。所有纳入对象入院后均采用酶联免疫吸附法检测血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1水平,并进行组间比较。采用受试者工作特征(ROC)曲线和曲线下面积(AUC)评价血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1对非痴呆血管性认知障碍的早期诊断价值,同时采用二分类Logistic逐步回归分析非痴呆血管性认知障碍的危险因素。结果研究组血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1水平均高于对照组(P<0.05)。血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1诊断非痴呆血管性认知障碍患者的AUC为0.762(95%CI:0.712~0.812)、0.833(95%CI:0.783~0.883)、0.867(95%CI:0.827~0.907),三者联合早期诊断非痴呆血管性认知障碍患者的AUC为0.917(95%CI:0.867~0.967)。二分类Logistic逐步回归分析显示,Hcy[OR(95%CI)=2.707(1.611~4.551)]、p-tau-181[OR(95%CI)=3.047(1.736~5.347)]、Αβ_(1-42)[OR(95%CI)=2.192(1.422~3.381)]、sLOX-1[OR(95%CI)=3.404(1.883~6.153)]均为影响非痴呆血管性认知障碍发生的相关因素(P<0.05)。结论非痴呆血管性认知障碍患者血清p-tau-181、Αβ_(1-42)、sLOX-1水平均升高,且均可作为早期诊断的有效指标,三者联合能更有效评估非痴呆血管性认知障碍。

Aβ_(1-42)及P-tau-181在阿尔茨海默病患者血清中的表达及意义

目的探讨血清β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))及磷酸化tau蛋白181(P-tau-181)在阿尔茨海默病(AD)患者血清中的表达及意义。方法选取2022年11月至2023年7月医院收治的40例阿尔茨海默病患者为AD组,40例血管性痴呆(VD)患者为VD组,另选择医院同期接收的40名健康体检老年人为健康组,3组均给予Aβ_(1-42)及P-tau-181检测。比较3组的Aβ_(1-42)及P-tau-181浓度及不同检测方法的阳性检出率。结果3组Aβ_(1-42)、P-tau-181浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05);AD组的Aβ_(1-42)及P-tau-181浓度均高于VD组、健康组、VD组的Aβ_(1-42)及P-tau-181浓度均高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05);AD组Aβ_(1-42)、P-tau-181联合检测的阳性检出率高于Aβ_(1-42)、P-tau-181单一检测,差异有统计学意义(P<0.05);VD组Aβ_(1-42)、P-tau-181联合检测的阳性检出率高于Aβ_(1-42)、P-tau-181单一检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Aβ_(1-42)及P-tau-181在阿尔茨海默病患者血清中的浓度较健康人群及血管性痴呆患者更高,且联合检测的阳性检出率较单一指标检测更高。

人参皂苷Rg_1对β-淀粉样肽(25-35)侧脑室注射所致小鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的 观察人参皂苷Rg1对 β 淀粉样肽 [β AP ,(2 5 - 35 ) ]所致小鼠拟阿尔茨海默 (AD)学习记忆功能障碍的改善作用及其作用机制。方法 小鼠侧脑室注射凝聚态 β AP 4nmol,次日 ,ipRg15和 10mg·kg-1,10d后 ,测试各组被动回避、空间学习记忆能力 ,及皮层、海马组织胆碱乙酰转移酶 (ChAT)和乙酰胆碱酯酶 (AchE)活性变化。结果人参皂苷Rg1可明显改善 β AP所致小鼠被动回避、空间学习记忆能力及皮层海马组织ChAT活性的下降。β AP对小鼠AchE活性无显著性影响 ,但与对照、模型组相比 ,Rg1明显抑制AchE活性。结论 Rg1对 β AP(2 5 - 35 )所致的小鼠学习记忆障碍有显著改善作用 ,其对胆碱能系统的影响是Rg1重要作用机制之一。

Alzheimer病与血管性痴呆患者脑脊液中β-淀粉样蛋白_(1-42)水平的对照研究

目的 :探讨脑脊液 (CSF)中β -淀粉样蛋白1-42 (β -amyloidprotein1-42 ,Aβ1-42 )的水平对Alzheimer病 (AD)的诊断价值 ,寻找AD理想的生物学标志。方法 :将符合美国国立神经病、语言障碍和卒中研究所 -老年性痴呆及相关性疾病协会 (NINCDS -ADRDA)的”很可能AD”标准的 2 2例AD患者 ,同时将 2 0例血管性痴呆 (vasculardementia ,VD)和 2 1例正常对照 (normalcontrol,NC)纳入研究。用酶联免疫吸附法 (ELISA)分别检测AD组、VD组和NC组CSF中的Aβ1-42 水平。同时评定 :AD、VD组患者的简易智能量表 (MMSE)、HACHINSKI缺血量表及临床痴呆量表 (CDR)等参数。结果 :三组CSF中Aβ1-42 平均浓度 (x±s) (pg/ml)如下 :AD组 343.94± 16 5 .87;VD组 4 6 6 .6 5± 2 2 2 .4 6 ;NC组 4 80 .4 0± 2 17.16 ,AD组明显低于NC组 (P <0 .0 5 ) ;虽然AD组低于VD组、VD组低于NC组 ,但差异均无显著性(P >0 .0 5 ) ;AD组CSF中Aβ1-42 浓度与CDR、MMSE评分明显相关 (P <0 .0 5 )。结论 :Alzheimer病患者CSF中Aβ1-42浓度降低是其重要的实验室表现 。

β淀粉样肽_(1-40)通过激活caspase-3诱导大鼠皮层神经元凋亡

目的 探讨半胱氨酸蛋白酶caspase 3在 β淀粉样肽1 4 0 (β AP1 4 0 )诱导大鼠皮层神经元凋亡中的可能作用。 方法 用 β AP1 4 0 诱导神经元凋亡 ,同时检测caspase 3活力和caspase 3活性片段及caspase 3mRNA的表达水平。 结果 4 0mg·L- 1 的凝聚态 β AP1 4 0 诱导大鼠皮层神经元凋亡过程中 ,caspase 3活力和caspase 3mRNA的表达水平均有明显增高 (P <0 0 1) ;特异性的caspase 3抑制剂Ac DEVD CHO对caspase 3的激活和皮层神经元细胞凋亡均有明显的阻断作用。 结论 caspase 3可能是 β AP1 4 0

脑苷肌肽对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑内β-淀粉样蛋白42和钙结合蛋白-D28K表达的影响

目的观察脑苷肌肽(cattle encephalon glycoside and ignotin injection,CEGI)对APPswe/PS1d E9双转基因痴呆模型小鼠脑内β-淀粉样蛋白42(amyloidβ-peptide,Aβ42)和钙结合蛋白-D28K(calbindin-D28K,CB)表达的影响,探讨CEGI对阿茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的防治作用。方法 APPswe/PS1d E9双转基因AD模型小鼠共48只,随机分为脑苷肌肽低剂量组[Tg+CEGI-L组,腹腔注射CEGI 6.6 ml/(kg·d)]、高剂量组[Tg+CEGI-H组,腹腔注射CEGI 13.2 ml/(kg·d)]、阳性药盐酸多奈哌齐组[Tg+Donepezil组,Donepezil灌胃2 mg/(kg·d)],模型组(Tg组,腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液),每组12只;同月龄同背景非转基因野生型C57BL/6J小鼠12只作为正常对照组(n Tg组,腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液)。小鼠自5月龄开始腹腔注射给药1个月,然后进行Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力,硫黄素S荧光染色和免疫组织化学染色检测皮质区Aβ42表达,免疫组织化学染色检测海马CA1区及CA3区CB表达的变化。结果行为学实验,与Tg组比较,Tg+CEGI-L组小鼠空间学习和记忆能力有明显改善(P<0.05);小鼠大脑皮质Aβ42的表达数目在Tg组显著高于Tg+CEGI-L组和Tg+CEGI-H组(43.00±10.03 vs 24.63±10.61/24.89±6.81,P<0.05);小鼠海马CA1区神经元保护性蛋白CB在Tg+CEGI-L组显著高于Tg组(0.056±0.023 vs 0.031±0.001,P<0.05)。结论 CEGI能抑制Aβ42在大脑中的聚集沉积、CB过表达来降低神经元损伤,进而改善APPswe/PS1d E9双转基因痴呆模型小鼠的学习记忆能力。

淀粉样蛋白Aβ_(1-42)与α_1-抗糜蛋白酶反应的体外研究

目的研究淀粉样蛋白Aβ1-42与α1-抗糜蛋白酶(α1-antichymotrypsin,ACT)在体外动态反应的性质,为阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病机制的研究探索新的领域。方法Aβ1-42、ACT以10:1的摩尔比溶解于Tris缓冲液中,37℃下孵育7h形成复合物。SDS-PAGE及糜蛋白酶(chymotrypsin,CHY)干扰实验探索Aβ1-42/ACT复合物的性质;采用ACT蛋白酶抑制剂活性的化学计量法研究和荧光标记Aβ1-42的解离追踪计算Aβ1-42与ACT的结合速率和解离速率;定量分析Aβ1-42浓度对ACT活性的影响。结果Aβ1-42与ACT反应7h形成的复合物在SDS-PAGE电泳条件下不稳定,ACT仍具有蛋白酶抑制剂活性。Aβ1-42与ACT结合后,后者的蛋白酶抑制剂活性减弱约10倍(SI=1.1vsSI=10.5),并且在一定范围内ACT的活性随Aβ1-42浓度的增高而减弱。Aβ1-42/ACT的结合速率常数为1.7(M.s)-1,解离速率常数为1.4×10-5s-1,即37℃、PH值7.4条件下Aβ1-42与ACT的结合速率远远高于解离速率。结论体外定量实验证实Aβ1-42、ACT之间的动态反应可形成稳定复合物并最终使ACT丧失蛋白酶抑制剂活性,提示ACT在AD的发病中可能发挥着与Aβ1-42相关的重要作用。

淀粉样蛋白Aβ_(1-42)在阿尔茨海默病中的意义

目的 :探讨老年人阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)脑脊液淀粉样蛋白Aβ1 - 42 的含量及其意义。方法 :采用ELISA法检测 30例AD ,非AD痴呆患者 2 5例和对照组 2 1例患者脑脊液中Aβ1 - 42 的浓度。结果 :AD患者脑脊液中Aβ1 - 42 水平明显低于非AD痴呆和对照组。结论 :Aβ1 - 42 在AD的发病中起重要作用 ,脑脊液Aβ1 - 42

普兰林肽对5×FAD小鼠和WT小鼠认知行为及脑和视网膜β淀粉样蛋白6E10、炎症因子和神经细胞形态的影响

目的 探讨普兰林肽对5×FAD小鼠和WT小鼠认知行为及脑和视网膜的β淀粉样蛋白(Aβ)6E10、炎症因子和神经细胞形态的影响。方法 实验选取5×FAD小鼠32只、WT小鼠16只,均为雌性。随机将5×FAD小鼠分为空白组、治疗组;WT组不进行任何处理;空白组腹腔注射PBS溶液;治疗组每天腹腔注射1次普兰林肽[200μg/(μ·d)],治疗8周。Morris水迷宫实验测定其认知行为的变化;采用免疫组织化学检测小鼠海马组织细胞、视网膜中Aβ6E10蛋白的表达;ELISA测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)炎症因子的含量。HE染色测定小鼠海马组织中神经细胞的排列和形态。结果 治疗组的潜伏时间短于5×FAD组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组的穿越平台次数和目标象限停留百分比高于5×FAD组,差异有统计学意义(P<0.05);5×FAD组脑内和视网膜内的Aβ6E10面积高于治疗组,差异具有统计学意义(P<0.05);视网膜和脑内的Aβ6E10具有正相关(P<0.05)。治疗组与5×FAD组脑中和视网膜中的TNF-α和IL-1β比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组较5×FAD组神经细胞排列规则,边界清晰。结论 普兰林肽可以改善小鼠的认知能力;使神经细胞排列较为规整,形态规则边界清晰;神经胶质细胞分布集中;周围间隙减小;脑内和视网膜内Aβ6E10具有同步性。

白藜芦醇对β淀粉肽_（1-42）刺激内皮细胞炎症因子表达的影响

目的探索白藜芦醇对β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）刺激内皮细胞炎症因子IL-1、IL-6与TNF-α表达影响。方法5×101μmol/L Aβ1-42刺激人脐静脉内皮细胞（HUVEC）24h,同时给予白藜芦醇160、80、40、20μg/L干预,CCK-8法检测HUVEC细胞活性;ELISA法检测IL-1、IL-6和TNF-α水平。结果与模型组比较,白藜芦醇各浓度组可以明显提高Aβ1-42刺激后HUVEC细胞活性,抑制Aβ1-42致HUVEC的IL-1、IL-6与TNF-α表达,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 20μg/L以上浓度白藜芦醇可减少Aβ1-42致HUVEC炎症因子IL-1、IL-6与TNF-α的表达。

阿尔茨海默病患者及对照者血清或脑脊液β-淀粉样蛋白1-42水平的Meta分析

目的 系统评价阿尔茨海默病(AD)患者及对照者血清或脑脊液(CSF)β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)水平,评估Aβ1-42作为AD生物标志物的诊断潜力。方法 计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库、维普数据库、PubMed、EMBASE、Web of Science中对AD患者及对照者血清或CSF Aβ1-42进行检测的研究,检索时限从建库到2022年3月。根据纳入及排除标准进行文献筛选并提取基本资料,依据修改后的纽卡斯尔-渥太华量表(NOS)评价文献质量。采用RevMan5.3和Stata12软件做Meta分析并生成森林图,异质性较大时采用亚组分析寻找异质性来源,采用Egger’s检验评估纳入文献是否存在发表偏倚。结果 共纳入17篇文献,共计AD患者1 322例,对照者1 137例。Meta分析结果显示,AD患者的血清或CSF Aβ1-42水平低于对照者,差异具有统计学意义(P<0.00001)。对照者类型结果显示,两亚组总体标准化均数差(SMD)结果与未分组结果大体一致,组间异质性检验结果为χ~2=13.890,P=0.000。Egger’s检验结果显示,纳入文献可能存在发表偏倚(t=2.250,P=0.034)。结论 AD患者的血清或CSF Aβ1-42水平低于对照者,对照者的选择是导致异质性产生的主要原因。

远志皂苷元对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞凋亡和自噬的影响

目的:观察远志皂苷元(TEN)对阿尔茨海默病体外模型β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导PC12细胞凋亡和自噬的影响。方法:体外培养PC12细胞,并随机分为对照组(正常生长PC12细胞)、模型组(Aβ_(1-42)诱导PC12细胞损伤)以及TEN低、中、高剂量组(Aβ_(1-42)诱导PC12细胞损伤+TEN低、中、高剂量)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白和自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)和Beclin-1以及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果:与对照组比较,模型组细胞活力明显下降(P<0.01),p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01),Caspase-3、Bax、LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,TEN各剂量组神经元存活率升高,p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达增加,Caspase-3、Bax、LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:TEN有助于减轻Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞毒性,其机制可能与抑制凋亡和自噬水平有关。