β淀粉样蛋白25-35对BV2细胞TREM2/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨不同浓度β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)对小胶质细胞髓样细胞触发受体2(TREM2)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将BV2细胞随机分为5组,分别加入0、5、10、20、40μmol/L的Aβ25-35,作用24、48 h,镜下观察细胞形态,CCK-8法测定细胞活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定NF-κBp65、TREM2 mRNA表达。结果:显微镜下观察干预48 h后Aβ25-35≥10μmol/L细胞成片死亡,干预24 h后,CCK-8检测显示,不同浓度Aβ25-35干预BV2细胞的存活率均>70%,ELISA和RT-PCR检测显示,Aβ25-3520μmol/L和40μmol/L组促炎因子TNF-α和TREM2 mRNA的表达均明显升高,Aβ25-3520μmol/L的NF-κB p65 mRNA表达明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Aβ25-35浓度20μmol/L作用24 h,能够激活小胶质细胞发生炎症反应,可能与TREM2/NF-κB信号通路的激活有关。

胱抑素C、淀粉样蛋白A与β_(2)-微球蛋白联合检验对早期糖尿病肾病的诊断价值分析

目的分析胱抑素C(CysC)、淀粉样蛋白A(SAA)与β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)联合检验对早期糖尿病肾病(DN)的诊断价值。方法选取48例早期DN患者作为观察组,另选取46例单纯2型糖尿病患者作为对照组。两组患者均接受CysC、SAA、β_(2)-MG、尿微量白蛋白(mAlb)水平检测。比较两组患者CysC、SAA、β_(2)-MG、mAlb水平;比较CysC、SAA、β_(2)-MG单独检验与三项指标联合检验对早期DN的诊断灵敏度与特异度;分析早期DN患者CysC、SAA、β_(2)-MG与mAlb的相关性。结果观察组CysC(1.83±0.25)mg/L、SAA(15.85±1.23)mg/L、β_(2)-MG(0.65±0.12)mg/L、mAlb(75.50±8.48)均高于对照组的(0.38±0.18)、(5.73±0.56)、(0.15±0.08)、(20.05±2.00)mg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。CysC单独检验对早期DN的诊断灵敏度与特异度分别为68.75%与67.39%,SAA单独检验对早期DN的诊断灵敏度与特异度分别为75.00%与76.09%,β_(2)-MG单独检验对早期DN的诊断灵敏度与特异度分别为60.42%、60.87%,三项指标联合检验对早期DN的诊断灵敏度与特异度分别为95.83%与95.65%;三项指标联合检验对早期DN的诊断灵敏度与特异度均高于CysC、SAA、β_(2)-MG单独检验(P<0.05)。Pearson相关性分析发现,CysC、SAA、β_(2)-MG与早期DN患者mAlb呈正相关性(r=0.615、0.895、0.590,P<0.05)。结论CysC、SAA与β_(2)-MG联合检验在早期DN诊断中具有较高临床应用价值,灵敏度与特异度更高,适于临床推广。

七氟烷对β淀粉样蛋白_(1-40)诱导的大鼠认知功能障碍影响及机制

目的 探讨七氟烷吸入对β淀粉样蛋白(Aβ)_(1-40)诱发的大鼠认知功能障碍影响及其可能的机制。方法 于2021年8月至2022年8月,将32只成年雄性Sprague-Dawley大鼠以随机数字表法分为生理盐水(NS)+氧气组、NS+七氟烷组、Aβ+氧气组和Aβ+七氟烷组,每组8只,分别给予双侧海马内注射NS或Aβ_(1-40)。吸入30%氧气或2.5%七氟烷过程中监测生命体征,采用Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能;酶联免疫吸附测定检测海马Aβ_(1-40)水平;免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙接头蛋白分子1(IBA1)的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测白细胞介素-1β(IL-1β)、核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达;蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-xL(Bcl-xL)、胱天蛋白酶-9(caspase-9)、脑源性神经营养因子(BDNF)和晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的蛋白表达。结果 维持吸入2.5%七氟烷在4个不同时间点(1、2、3和4 h)对大鼠生命体征无影响。与NS+氧气组比较,Aβ+氧气组大鼠原始平台探索时间减少,逃逸潜伏期增加;与Aβ+氧气组相比,Aβ+七氟烷组大鼠原始平台探索时间减少,逃逸潜伏期增加(P<0.05)。Aβ+七氟烷组大鼠海马区Aβ_(1-40)水平[(42.18±5.72)ng/L],GFAP和IBA1阳性细胞数[(24.33±1.21)个和(37.82±3.23)个],caspase-9和RAGE蛋白表达(0.74±0.11和0.81±0.07),IL-1β、NF-κB和iNOS mRNA表达(28.98±12.32、25.91±12.31和43.92±17.21)均高于NS+七氟烷组[(18.13±2.89)ng/L、(10.51±0.96)个、(17.17±1.77)个、0.23±0.02、0.29±0.03、1.35±0.04、1.37±0.05、1.42±0.06]和Aβ+氧气组[(32.61±4.82)ng/L、(15.76±1.25)个、(24.76±2.31)个、0.45±0.08、0.68±0.08、10.23±6.56、6.51±2.34、13.23±4.81];Bcl-xL和BDNF蛋白表达(0.13±0.04和0.18±0.04)低于NS+七氟烷组(1.07±0.31和0.58±0.07)和Aβ+氧气组(0.46±0.11和0.33±0.04)(P<0.05)。而NS+氧气组和NS+七氟烷组之间各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 七氟烷通过启动大鼠海马的神经毒性、神经炎症和神经元凋亡,加剧了Aβ_(1-40)诱发的大鼠认知功能障碍。

血清β-淀粉样蛋白1-42、脂蛋白相关磷酸酶A2、α_(2)巨球蛋白水平与脑梗死并发血管性痴呆的关系及联合检测的预测价值

目的 探讨脑梗死并发血管性痴呆与血清β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、脂蛋白相关磷酸酶A2(LP-PLA2)、α_(2)巨球蛋白(α_(2)M)的相关性及联合检测的预测价值。方法 选取2019年1月至2023年3月宝鸡高新医院收治的201例脑梗死患者作为研究对象,根据所选患者6个月内是否并发血管性痴呆将其分为并发组(39例)和未并发组(162例)。通过单因素及多因素logistic回归分析脑梗死并发血管性痴呆与血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平的关系,并采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M单一及联合检测对脑梗死并发血管性痴呆的预测价值。结果 并发组与未并发组患者的年龄、糖尿病史、脑梗死面积、血管狭窄程度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,年龄较大、合并糖尿病、脑梗死面积较大、血管狭窄程度为重度、血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平较高是脑梗死并发血管性痴呆的独立危险因素(OR分别为4.614、4.362、2.497、4.246、2.425、2.568、3.080,P<0.05)。并发组血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平高于未并发组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M联合检测预测脑梗死并发血管性痴呆的曲线下面积为0.910,高于血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M单一检测(0.736、0.772、0.737,P<0.05)。结论 脑梗死患者并发血管性痴呆可能与年龄较大、合并糖尿病、脑梗死面积较大、血管狭窄程度为重度及血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M水平较高有关,且血清Aβ1-42、LP-PLA2、α_(2)M联合检测预测脑梗死并发血管性痴呆的价值更高。

血清25-羟维生素D_(3)、白细胞介素-6及血清淀粉样蛋白A在儿童肺炎中的应用研究

目的 探讨血清25-羟维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]、白细胞介素-6(IL-6)与血清淀粉样蛋白A(SAA)水平在不同类型儿童肺炎中的变化及相关性。方法 选取该院儿科2021年2月至2022年4月收治确诊的肺炎患儿90例为观察组,根据标准分为普通肺炎组(60例)和重症肺炎组(30例);另依据感染类型分为细菌感染组(39例)、病毒感染组(35例)、肺炎支原体感染组(16例)。再选取同期近期无感染史的健康儿童30例为对照组。对比各组25-(OH)D_(3)、IL-6与SAA水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析评价25-(OH)D_(3)、IL-6及SAA对儿童肺炎的诊断价值。结果 (1)普通肺炎组、重症肺炎组血清IL-6、SAA水平均明显高于对照组,25-(OH)D_(3)水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重症肺炎组血清25-(OH)D_(3)、IL-6、SAA水平与普通肺炎组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)25-(OH)D_(3)在细菌感染组、病毒感染组、肺炎支原体感染组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);细菌感染组血清IL-6、SAA水平均高于病毒感染组和肺炎支原体感染组(P<0.05);肺炎支原体感染组SAA水平高于病毒感染组(P<0.05)。(3)SAA、IL-6、25-(OH)D_(3)单项检测诊断肺炎的曲线下面积(AUC)分别为0.770、0.697、0.561;SAA、IL-6、25-(OH)D_(3)联合检测诊断肺炎的AUC可提升至0.841,诊断效能优于各指标单项检测。结论 血清25-(OH)D_(3)、IL-6及SAA可作为儿童肺炎的监测指标,对评估肺炎病情变化有指导意义,三者联合检测可提高对肺炎的诊断效能。

1-磷酸鞘氨醇受体2通过AKT/mTOR通路调节线粒体功能参与Aβ_(25-35)诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y损伤

阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)是一种与年龄相关的认知功能下降的神经退行性疾病。1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2,S1PR2)参与多种细胞过程,被证实在神经系统发育中发挥重要作用。本文旨在探究S1PR2对Aβ_(25-35)诱导的AD细胞模型损伤的作用及可能机制。研究通过Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞构建细胞损伤模型,并且构建靶向S1PR2的干扰序列用于干预细胞中S1PR2的表达。Western印迹及RT-PCR检测S1PR2蛋白及基因表达,发现Aβ_(25-35)诱导的细胞模型中S1PR2蛋白及基因表达均显著增加(P<0.01),S1PR2干预后模型组内S1PR2蛋白及基因表达显著降低(P<0.001)。CCK8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,结果显示,S1PR2干预后显著增加Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞的增殖活性,减少细胞凋亡(P<0.01)。Western印迹检测细胞中APP、Tau、p-Tau和PSD95的表达,结果显示,S1PR2干预后显著降低模型组细胞内APP、Tau和p-Tau的表达,增加突触蛋白PSD95的表达,可显著改善Aβ_(25-35)诱导的细胞损伤(P<0.001)。另外,试剂盒检测细胞中ATP的产生,流式细胞术检测ROS含量及线粒体膜电位以分析细胞的线粒体功能,结果显示,Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞显著降低了细胞中ATP的产生,增加了ROS含量,减少了线粒体膜电位(P<0.001)。S1PR2干预后显著增加Aβ_(25-35)诱导的细胞模型中ATP的产生,降低ROS含量,增加线粒体膜电位(P<0.001)。最后,通过Western印迹检测AKT/mTOR通路蛋白质表达,结果显示,Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞促进了p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR的表达,S1PR2干预后显著抑制AKT/mTOR通路的激活(P<0.001)。总而言之,S1PR2可能通过促进AKT/mTOR通路调节线粒体功能参与Aβ_(25-35)诱导的细胞损伤进程。

人参皂苷Rb1抑制β淀粉样蛋白_(25-35)诱导的皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨人参皂苷Rb1对凝聚态β AP25 35诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化的影响及其可能的作用机制。方法 通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测神经元tau蛋白磷酸化水平、总tau蛋白水平和糖原合成酶3β(GSK 3β)的蛋白表达水平。结果 凝聚态β AP25 35(20μmol·L-1)作用于皮层神经元12h,tau蛋白磷酸化水平和总tau蛋白水平均增高,同时GSK 3β蛋白表达也增多。用人参皂苷Rb1或GSK 3β特异性抑制剂氯 化锂预处理后,凝聚态β AP25 35诱导的tau蛋白的过度磷酸化受到明显抑制,同时GSK 3β的表达也降低。结论 人 参皂苷Rb1可通过抑制GSK 3β的表达来抑制凝聚态β AP25 35诱导的皮层神经元tau蛋白的过度磷酸化。

人参总皂苷对β-淀粉样蛋白_(25～35)诱导的海马神经细胞毒性的保护作用

目的探讨人参总皂苷对β-淀粉样蛋白(Aβ_(25~35))诱导的海马神经细胞毒性的保护作用。方法建立大鼠海马神经细胞Aβ_(25~35)损伤模型。通过Neurofilament染色,测定细胞毒性以及乳酸脱氢酶(LDH)活性考察人参总皂苷对Aβ_(25~35)诱导的海马神经细胞毒性的保护作用;利用Hoechst33258进行免疫荧光染色实验,观察细胞形态,检测细胞凋亡情况;通过Fluo-3AM荧光探针技术在共聚焦显微镜下测定细胞内钙离子浓度(〔Ca^(2+)〕i)的变化情况。结果 1.5μmol/L Aβ_(25~35)为造成神经细胞毒性的最佳浓度。人参总皂苷50 mg/L,100 mg/L以及200 mg/L对Aβ_(25~35)诱导的海马神经细胞具有良好保护作用,呈现出一定的剂量依赖性。人参总皂苷100 mg/L可显著降低Aβ_(25~35)诱导的神经细胞凋亡,可明显抑制Aβ_(25~35)诱导的海马神经细胞〔Ca^(2+)〕i的升高。结论人参总皂苷可有效保护海马神经细胞免受Aβ_(25~35)毒性损伤,其作用机制与降低〔Ca^(2+)〕i有关。

血清淀粉样蛋白A和25-羟维生素D水平与反复呼吸道感染患儿预后的相关性

目的 探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)、25-羟维生素D[25(OH)D]水平与反复呼吸道感染(RRTI)患儿预后的相关性。方法 选择2019年6月至2020年6月南阳市中心医院收治的58例RRTI患儿为研究对象(观察组),另选择同期来院体检的健康儿童40例作为对照组。采集所有受试者空腹外周静脉血3~5 mL,采用免疫散射比浊法检测受试者血清中SAA水平,化学发光法检测受试者血清25(OH)D水平。观察组患儿随访1 a,根据治疗效果将患儿分为预后良好组(n=36)和预后不良组(n=22)。收集2组患儿的临床资料,采用单因素和多因素logistic回归分析影响RRTI患儿预后的因素。采用Spearman相关分析SAA、25(OH)D水平与RRTI患儿预后的相关性,并绘制受试者操作特征(ROC)曲线评估血清SAA、25(OH)D水平对RRTI患儿预后的预测价值。结果 观察组患儿血清SAA水平显著高于对照组,25(OH)D水平显著低于对照组(P<0.05)。单因素分析结果显示,患儿的家族呼吸系统疾病史、父母职业接触化工物品、患儿是否吸二手烟、家庭养宠物占比及SAA、25(OH)D水平与RRTI患儿预后有关(P<0.05);患儿的性别、年龄、体质量指数、父母文化程度、出生时是否发生窒息、是否早产与RRTI患儿预后无关(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,家族呼吸系统疾病史、患儿吸二手烟、家庭养宠物及SAA高水平、25(OH)D低水平是影响RRTI患儿预后的因素(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,SAA水平与RRTI患儿预后呈负相关(r=-0.737,P<0.05),25(OH)D水平与RRTI患儿预后呈正相关(r=0.491,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,SAA水平预测RRTI患儿预后的最佳截断值、曲线下面积、灵敏度、特异度分别为4.37 mg·L^(-1)、0.798(95%可信区间0.742~0.865)、79.20%、62.10%,25(OH)D水平预测RRTI患儿预后的最佳截断值、曲线下面积、灵敏度、特异度分别为15.74μg·L^(-1)、0.836(95%可信区间0.794~0.921)、86.80%、61.20%。结论 SAA在RRTI患儿中呈高表达,25(OH)D在RRTI患儿中呈低表达,SAA、25(OH)D水平是影响患儿预后的因素,对患者预后有较高的预测价值。

阿魏酸钠对β淀粉样蛋白_(25-35)诱导的体外培养神经细胞损伤的保护作用

目的 研究阿魏酸钠 (SF)对 β淀粉样蛋白2 5-3 5(Aβ2 5-3 5)诱导的原代培养神经细胞损伤的保护作用。方法 以原代培养孕 17～ 18d的SD大鼠胎鼠的大脑皮层神经细胞为观察对象。倒置显微镜下观察给药前后神经细胞的形态学变化 ,用MTT比色实验检测神经细胞活性 ,依据LDH漏出率检测神经细胞膜的损伤程度 ,以MDA生成量推测生物膜不饱和脂肪酸过氧化程度。结果 与正常对照组相比 ,Aβ2 5-3 5(2 0 μmol/L)处理 2 4h ,可使神经细胞活性显著下降 (P <0 0 1) ,SF (10 μmol/L ,5 0 μmol/L ,10 0 μmol/L ,5 0 0 μmol/L ,1mmol/L)能剂量依赖地减轻Aβ2 5-3 5的细胞毒性。结论 SF能够对抗Aβ2 5-3 5诱导的培养皮层神经细胞的损伤。

人参皂苷Rg_1对β-淀粉样肽(25-35)侧脑室注射所致小鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制

目的 观察人参皂苷Rg1对 β 淀粉样肽 [β AP ,(2 5 - 35 ) ]所致小鼠拟阿尔茨海默 (AD)学习记忆功能障碍的改善作用及其作用机制。方法 小鼠侧脑室注射凝聚态 β AP 4nmol,次日 ,ipRg15和 10mg·kg-1,10d后 ,测试各组被动回避、空间学习记忆能力 ,及皮层、海马组织胆碱乙酰转移酶 (ChAT)和乙酰胆碱酯酶 (AchE)活性变化。结果人参皂苷Rg1可明显改善 β AP所致小鼠被动回避、空间学习记忆能力及皮层海马组织ChAT活性的下降。β AP对小鼠AchE活性无显著性影响 ,但与对照、模型组相比 ,Rg1明显抑制AchE活性。结论 Rg1对 β AP(2 5 - 35 )所致的小鼠学习记忆障碍有显著改善作用 ,其对胆碱能系统的影响是Rg1重要作用机制之一。

β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响

背景:通过调节神经干细胞分化过程中的tau蛋白磷酸化水平可提高神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病的效果。目的:观察β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中tau蛋白磷酸化水平的影响。方法:分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后,分别采用免疫荧光细胞化学和Western-blot检测Tau[pS396]、Tau[pS262]及GSK-3β[pTyr279,216]表达情况。结果与结论:正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达,β-淀粉样蛋白25～35可以使Tau[pS396]、Tau[pS262]和GSK-3β[pT279/216]表达上调,而人参皂苷Rb1可以逆转β-淀粉样蛋白25～35的作用。提示β-淀粉样蛋白25～35和人参皂苷Rb1通过调节GSK-3β的活性对tau蛋白的磷酸化水平产生调控作用。

左旋黄皮酰胺对冈田酸和β淀粉样肽_(25-35)神经毒性的保护作用

探讨左旋黄皮酰胺对冈田酸(okadaic acid,OA)诱导的人神经瘤细胞(SH-SY5Y)和去卵巢(ovariectomy,OVX)及单侧侧脑室注射Aβ25-35所致神经元损伤的保护作用。通过MTT试验、LDH释放测定试验、Hoechst 33258荧光染色试验以及SH-SY5Y细胞检测,考察左旋黄皮酰胺拮抗冈田酸诱导的细胞毒作用。通过避暗试验、电镜检测、Nissl体染色及HE染色,考察左旋黄皮酰胺对去卵巢及侧脑室注射Aβ25-35大鼠神经元的保护作用。左旋黄皮酰胺可明显拮抗冈田酸诱导的细胞毒作用,提高去卵巢及侧脑室注射Aβ25-35大鼠的学习记忆能力,保护海马及皮层神经元。左旋黄皮酰胺可拮抗冈田酸及Aβ25-35诱导的神经毒性,具有神经保护作用。

三七总皂甙对淀粉样β_(25～35)肽诱导的NG108-15细胞老年性痴呆模型的保护作用(英文)

背景:阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)的病理病因虽然还没有完全清楚,但目前认为β-淀粉样肽(amyloidβ-peptide,Aβ)是引起AD的胆碱能神经功能紊乱的主要成分。因此,Aβ的产生及其对神经细胞的影响,以及寻找该病的发病机制、治疗方法及其有效的治疗药物成了医药界的研究热点。目的:观察三七总皂甙(PNS)对NG108-15细胞老年性痴呆模型的影响,为寻找该病的发病机制提供佐证,为研究和开发中药的新成分提供理论依据。设计:体外平行对照实验。单位:广西中医学院新药开发中心,广西中医学院生物化学教研室。对象:实验在广西中医学院新药开发中心完成。NG108-15细胞:中国科学院上海细胞研究所提供。PNS:云南玉溪维和制药厂生产。Aβ25～35片段:德国Sigma公司产品,批号:042K49501。MTT(四甲基噻唑蓝),德国Sigma公司产品,批号:020609。cAMP(环一磷酸腺苷)日本ャマサ酱油株式会社产品,批号:00207。胚胎牛血清(FBS):由美国Hy-clone公司提供,批号:0405。DMEM培养基:美国GIBCO公司产品,批号:0311。干预:NG108-15细胞培养法:含50mL/L胚牛血清、10g/LHAT、10g/L青霉素和链霉素(1:1)的DMEM培养液,置100mL/LCO2、37℃用的培养箱内培养殖,每隔一天换一次液,4d传代一次。主要观察指标:利用MTT法、细胞计数法和细胞形态学?

水溶性β-淀粉样蛋白25-35片段诱致大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡

目的 探讨β-淀粉样蛋白 ( Aβ)在形成淀粉样沉积前对体外培养的 PC1 2细胞的毒性作用。方法 应用流式细胞仪检测 Aβ的剂量依赖性毒性 ;应用 DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA末端标记和电镜判断 Aβ损伤细胞的途径。结果 流式细胞仪检测发现随着 Aβ2 5 -35浓度的增加 ,PC1 2细胞的死亡率增加 ;加入 1 0 μmol/L Aβ2 5 -35 2 4 h后 ,经 TUNEL发现细胞核着色 ,并可见细胞核碎片 ;DNA琼脂糖凝胶电泳可见间隔 1 80～ 2 0 0 bp左右的梯度条带 ;电镜显示细胞核浓缩 ,胞浆内有空泡形成 ,胞浆内细胞器完好。结论 Aβ在形成纤维状沉积前即对神经细胞有毒性作用 ,可促进神经细胞的凋亡。

β-淀粉样蛋白25-35片段诱导PC12细胞凋亡

目的 探讨 β -淀粉样蛋白 2 5 - 35片段 (Aβ2 5-3 5)对体外培养的PC12细胞的毒性作用机制。方法 用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)代谢率检测 ,光镜吖啶橙荧光染色术 ,透射电镜以及流式细胞仪技术研究Aβ2 5-3 5损伤PC12细胞的途径。结果 用Aβ2 5-3 5处理PC12细胞 2 4h ,Aβ2 5-3 5剂量依赖性地引起PC12细胞的MTT代谢率减少 ,荧光染色及电镜观察发现经Aβ2 5-3 5处理的PC12细胞表现出凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪检测发现 ,对照组 2 0 μmol/L及 5 0 μmol/L的Aβ2 5-3 5组PC12细胞的凋亡率分别为 0 .0 8%± 0 .0 1% ,14 .8%± 1.13% ,2 5 .9%± 2 .34%。

雌激素减轻β-淀粉样蛋白25-35所致的PC12细胞毒活性

目的:观察17-β雌激素对β-淀粉样蛋白25—35(Aβ25-35)所致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)毒活性的影响。方法:PC12细胞暴露于不同浓度的Aβ25-35或Aβ25-35加17-β雌激素,观察PC12细胞的细胞计数,四甲基偶氮唑蓝(MTT)代谢率与乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果:Aβ25-35引起PC12细胞计数及MTT代谢率减少,LDH释放率升高,且有剂量依赖性;而17-β雌激素可提高相应的细胞计数及MTT代谢率,降低相应的LDH释放率。结论:17-β雌激素具有拮抗Aβ25-35所致PC12细胞毒性的作用。

慢性孵育β淀粉样肽_(25-35)对培养大鼠海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响

目的 研究慢性孵育 β淀粉样肽2 5- 35(β AP2 5- 35)对海马神经元电压依赖性外向钾通道亚型mRNA表达的影响。方法 用RT PCR方法检测mRNA的表达 ,用光密度扫描法半定量测定表达变化。结果 在正常培养的海马神经元上延迟整流 (Kv2 1,Kv1 5 ) ,瞬间外向 (A型 ) (Kv4 2 ,Kv1 4 ) ,钙激活的大电导 (rSlo)钾通道亚型均有表达。β AP2 5- 353μmol·L- 1 孵育细胞 2 4h后 ,Kv2 1mRNA的表达明显上调 ,其它亚型则无显著性变化 ;β AP2 5- 35上调Kv2 1mRNA的作用主要发生在 β AP2 5- 35应用后 4 8h内 ;6 0h后Kv2 1mRNA表达水平显著下调。结论 Kv2 1转录水平的上调可能参与 β AP2 5- 35选择性地增加海马神经元上延迟整流钾电流 (IK)的作用。

蛇床子素降低磷酸二酯酶含量改善β淀粉样蛋白25-35片段诱导的大鼠神经毒性

目的观察蛇床子素(Ost)抗β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)25-35片段诱导的大鼠神经毒性作用并探讨其可能机制。方法雄性SD大鼠30只随机分为假手术组、模型组、Ost(40 mg/kg)治疗组(n=10)。双侧海马注射Aβ25-35建立大鼠神经毒性模型,连续Ost(40 mg/kg)灌胃15 d。每组大鼠随机选取3只进行尼氏染色观察其海马尼氏小体的变化。其余大鼠采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定海马磷酸二酯酶(PDE)及PDE2、PDE4、PDE5、PDE7、PDE9的含量变化。结果模型组大鼠海马的尼氏小体较假手术组皱缩,排列不整齐,甚至消失;而Ost治疗组海马神经元排列较整齐,变性神经元减少。同时,ELISA结果表明,模型组中大鼠海马PDE、PDE4及PDE5的含量较假手术组显著增高(P<0.01);但经Ost治疗后,其水平均有所降低(P<0.01,P<0.05),而对PDE2、PDE7和PDE9的含量没有影响。结论 Ost可抗Aβ25-35所致的大鼠神经毒性,其机制可能与抑制PDE4和PDE5的蛋白表达有关。

人参皂苷Rb1对β-淀粉样蛋白25-35诱导神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化的影响

背景:前期研究发现,人参皂苷Rb1和β-淀粉样蛋白25-35可调节神经干细胞分化过程中Tau蛋白的磷酸化水平。蛋白磷酸酯酶2A与Tau蛋白过度磷酸化密切相关。目的:观察β-淀粉样蛋白25-35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中Tau蛋白磷酸化水平和蛋白磷酸酯酶2A活性的影响。方法:分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后分组:①空白组:不加其他处理因素继续培养36h。②β-淀粉样蛋白组:培养24h后,加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12h。③预处理组:先加入人参皂苷Rb1预处理24h,再加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12h。分别采用免疫荧光细胞化学法和western-blot法检测各组细胞Tau[pS396]、Tau[pS262]表达以及蛋白磷酸酯酶2A活性。结果与结论:正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达;β-淀粉样蛋白组细胞的Tau[pS396]和Tau[pS262]表达上调,蛋白磷酸酯酶2A活性无明显变化;预处理组Tau[pS396]和Tau[pS262]表达下调且蛋白磷酸酯酶2A活性显著增强。提示正常神经干细胞分化过程中Tau蛋白表达一定程度的磷酸化水平,人参皂苷Rb1可通过提高蛋白磷酸酯酶2A活性来减轻β-淀粉样蛋白25-35诱导的神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化。