金黄色葡萄球菌β溶血素研究进展

金黄色葡萄球菌β溶血素是一种具有磷脂酶C活性的外毒素,具有白细胞毒性、溶血活性等特征,并且对奶牛乳房炎也具有一定的致病性。因此,β溶血素在免疫预防和细胞生物学领域的研究具有很大的价值。对其理化性质与细胞膜作用机制进行介绍,对其毒力、致病性等最新研究进展进行综述。

牛乳腺炎无乳链球菌β溶血素对奶牛外周血液单核巨噬细胞吞噬功能的影响

目的探索奶牛乳腺炎无乳链球菌β溶血素对奶牛单核巨噬细胞吞噬功能的影响。方法利用牛淋巴细胞分离液从奶牛外周血分离获得单核细胞,经培养使其分化成巨噬细胞,利用牛乳腺炎无乳链球菌野生型菌株(BMSA1886βh)及牛乳腺炎无乳链球菌β溶血素基因敲除突变株(BMSA1886△βh)侵染巨噬细胞,通过吖啶橙染色法对其进行染色荧光显微观察,统计巨噬细胞对BMSA1886βh及BMSA1886△βh吞噬率差异。结果巨噬细胞对奶牛乳腺炎无乳链球菌野生型株的吞噬指数(1.16)和吞噬率(58%)显著低于其对与β溶血素突变株的吞噬指数(2.06)和吞噬率(80%),表明β溶血素可抑制巨噬细胞的吞噬作用。结论牛乳腺炎无乳链球菌β溶血素对奶牛外周血液巨噬细胞有一定的抑制作用,被吞噬的野生型无乳链球菌在巨噬细胞内的存活率较突变株相对较高。

牛源抗金黄色葡萄球菌β溶血素单链抗体的鉴定及其生物学特性

β溶血素(β-hemolysin,Hlb)在金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺的致病过程中起到了重要的作用,但是关于牛源抗β溶血素的免疫制剂研究较少。本研究首先以金黄色葡萄球菌ATCC25923的DNA为模板,利用PCR技术扩增编码β溶血素的基因hlb,构建原核表达质粒pET32a-hlb,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组Hlb蛋白。以纯化的重组Hlb蛋白为包被抗原,从牛源噬菌体单链抗体表达文库中筛选到了一株针对β溶血素高亲和力单链抗体(single-chain variable fragment, scFv),通过构建原核表达质粒pET32a-scFv在大肠杆菌Transetta中诱导表达。结果表明,重组Hlb蛋白具有良好的溶解奶牛红细胞的能力,抗β溶血素单链抗体可以显著抑制重组Hlb蛋白和金色葡萄球菌培养物上清的溶血作用。本研究一方面为研制抗金色葡萄球菌所致奶牛乳腺炎新型抗体制剂提供参考,另一方面也为深入研究β溶血素在金色葡萄球菌致病过程的作用奠定基础。