国产全自动电泳系统检测HbA_2诊断β珠蛋白生成障碍性贫血

目的评价国产森特全自动电泳系统(SangTe系统)检测血红蛋白A2(HbA2)在β珠蛋白生成障碍性贫血(地贫)筛查中的应用价值,并确定诊断β地贫的HbA2临界值。方法采用同步盲法对430例参加地贫筛查的农村育龄青年进行SangTe系统和高效液相色谱法(HPLC)的HbA2测定以及Gap-PCR技术、反向斑点杂交地贫基因诊断,其中确认无常见3种α地贫基因缺失及5种α地贫基因突变和17种β地贫基因突变的健康成人173例,β地贫杂合子65例。通过对238例样品分析,比较SangTe系统与HPLC检测HbA2的一致性,以ROC曲线确定SangTe系统β地贫杂合子HbA2诊断临界值,比较SangTe系统与HPLC法在β地贫诊断中的价值。结果当地健康人SangTe系统HbA2值95%频数分布范围为1.67%～4.61%,β地贫HbA2诊断临界值为≥4.58%,其敏感性为0.94,特异性为0.99,SangTe系统与HPLC法有良好的线性关系,其ROC曲线下面积小于HPLC但无显著性差异(P>0.05)。结论SangTe系统用于β地贫筛查误、漏诊率低,是基层医院地贫筛查取代pH8.6醋纤膜电泳较为实用的设备。

桂林地区中重型β珠蛋白生成障碍贫血患儿基因型与临床分析

目的探讨桂林地区儿童中间型和重型β珠蛋白生成障碍贫血(地贫)的基因型特点及其与临床的关系。方法运用PCR-反向斑点杂交法及多重PCR法确定患儿地贫基因型。结果共检出8种β和2种α地贫基因突变,患儿基因型包括4种β地贫纯合子、10种β地贫双重杂合子组合及αβ杂合子,除-28/-28、CD41-42/IVS-Ⅱ-654复合αα/--SEA、CD41-42/CD41-42复合αα/-α3.7、CD41-42/-28复合αα/--SEA表现为中间型β地贫外,余基因型均表现为重型地贫。结论β地贫临床症状轻重由其基因型决定,本组CD41-42(-TTCT)I、VS--Ⅱ654(C→T)、CD17(A→T)、-28(A→G)为桂林地区常见的β地贫基因突变类型。实用儿科临床杂志,2006,21(3)

妊娠的β珠蛋白生成障碍性贫血女性红细胞参数的变化分析

目的探讨妊娠β珠蛋白生成障碍性贫血(简称β地贫)女性红细胞参数的变化及鉴别诊断中的价值。方法选取2014年7月至2015年12月在该院进行围产期建卡的100例β地贫妊娠女性纳入β地贫妊娠组,正常妊娠女性100例纳入正常妊娠组,100例妊娠期缺铁性贫血女性纳入缺铁性贫血妊娠组,分别检测各组的平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、网织红细胞百分率(Ret%),并进行比较。结果β地贫妊娠组的MCV、MCH低于正常妊娠组、缺铁性贫血妊娠组,Ret%高于正常妊娠组、缺铁性贫血妊娠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ret%鉴别诊断β地贫妊娠和缺铁性贫血妊娠的最佳临界值为1.7%,灵敏度为63.00%,特异度为74.00%,受试者工作特征曲线下面积为0.841。MCV、MCH、Ret%联合检测鉴别诊断β地贫妊娠和缺铁性贫血妊娠的灵敏度为84.00%,特异度为90.00%。结论妊娠β地贫女性红细胞参数MCV、MCH、Ret%较正常妊娠及缺铁性贫血女性均有明显变化,MCV、MCH、Ret%3项指标联合检测的灵敏度和特异度更高,能够明显地提高鉴别诊断β地贫妊娠和缺铁性贫血妊娠的能力。

3种鲤科鱼β珠蛋白基因的比较研究

根据 β珠蛋白的N末端和C末端氨基酸序列的保守性设计 2 0bp长的简并引物 ,用RT PCR方法扩增并克隆了鲤、草鱼、鲫的 β珠蛋白基因cDNA。结果显示克隆 3种鱼的 β珠蛋白基因cDNA全长为 4 4 1bp。对它们所编码的氨基酸序列的比较可以看出虽然它们都属于鲤科但氨基酸的组成却有较大的差异。根据所克隆的cDNA分别设计特异引物用PCR方法克隆了 3种鱼的基因组DNA全长 ;从起始密码子到终止密码子的长度分别为鲤 6 6 7bp、草鱼6 2 9bp、鲫 6 6 7bp。 3种鱼中均含有 3个外显子和 2个内含子且内含子的插入位置相同。内含子的碱基序列差异很大。鲫与鲤内含子 1和 2的长度完全相同 ,而与草鱼的内含子长度则相差较大。

中间型β珠蛋白生成障碍贫血患儿基因型及临床特点

目的分析广西地区儿童中间型β珠蛋白生成障碍贫血(地贫)基因型和临床特点。方法采用PCR检测β及α地贫基因、Gγ珠蛋白基因启动子-158(G-γ158)位点单核苷酸多态性(SNP)和β类珠蛋白基因簇位点控制区Dnase I酶高敏位点基序2(-βLCR-HS2)AT重复序列多态性,并分析临床资料。结果基因型:1)7例为nt-28纯合子或双重杂合子,其中2例nt-28纯合子,1例βE/nt-28,2例β0/nt-28,1例β0/nt-28复合G-γ158(T),另1例β0/nt-28同时复合G-γ158(T)和--SEA型α地贫1基因;2)各有3例β0/β0并遗传G-γ158(T)或--SEA型α地贫1基因;3)1例β0/β0同时遗传--SEA型α地贫1基因和G-γ158(T);4)6个携带G-γ158(T)的病例其-βLCR-HS2均检出(AT)9N12(AT)10序列。临床表现:14例Hb(75.9±9.7)g/L,平均红细胞体积为(68.9±5.9)fL,Hb F均值66.9%±16.3%。除2例nt-28纯合子和1例βE/nt-28杂合子未输过血外,余病例均有较明显症状和不定期输血史。结论广西地区中间型β地贫主要基因修饰因素依次为nt-28(A→G)突变,G-γ158(T)和--SEA型α地贫1基因。-βLCR-HS2(AT)9N12(AT)10多态性形式在本组多见。nt-28纯合子和与βE构成的双重杂合子临床表现较轻。

人α、β珠蛋白基因以串联形式在大肠杆菌中的表达

目的 为开展以基因重组血红蛋白为基础的血液代用品研究 ,尝试将人α、β珠蛋白基因以串联形式在大肠杆菌中进行表达。方法 采用常规的分子生物学技术。结果 用PCR扩增出含血红蛋白α、β珠蛋白的串联基因片段 ,测序表明克隆的α、β基因未发生意外突变。将该串联基因克隆进 pBV2 2 0表达载体 ,经热诱导表达产物达细菌总蛋白的 2 0 %左右。该表达产物以包涵体形式存在 ,并经WesternBlotting证实。

一个α,β地中海贫血复合家系β珠蛋白基因的进一步研究

前文~[1]曾报道广西一个α,β地中海贫血复合家系的血红蛋白组成及α珠蛋白基因分析结果,并讨论了各成员可能的β珠蛋白基因结构情况。本文利用先进的PCR即基因扩增技术,结合特异寡核苷酸探针斑点杂交及扩增后直接测定DNA序列的技术,进一步研究并彻底搞请了该家系各成员的β珠蛋白基因结构情况。结果显示:母亲及两个弟弟都是编码子41—42TTCT四个碱基缺失造成框架位移所致β地中海贫血的杂合子。父亲与先证者的β基因均属正常。前三个成员均为α地贫复合β地贫,其α与β珠蛋白链合成的不均衡状态得到改善,贫血症状也明显轻。

β珠蛋白基因5′远端新沉默子克隆及定点诱变

通过凝胶滞留分析和荧光素酶报告基因检测系统 ,鉴定出人类 β珠蛋白基因 5′旁侧远端帽位上游 - 2 1 32～ - 1 82 2 bp间存在一个活性沉默子片段 (31 0 bp) ,将其亚克隆至p UC- T载体中 ,然后采用人工设计的突变引物 ,将经 DNA足纹分析确定的两个结合位点的核心基序 (β珠蛋白基因帽位上游 - 2 0 1 7～ - 2 0 1 1 bp间的“CTTCCGC”序列和 - 2 0 0 6～ -1 997bp间的“CACTTTATTT”序列 )分别定点诱变为“CTTAAGC”和“CACTTAAGTT”两个突变序列 ,从而构建成两种突变型 31 0 bp片段 ,可用于对活性沉默子位点的结构与功能及β珠蛋白基因表达调控机制的深入研究 .

PCR-DGGE技术检测β珠蛋白外显子Ⅰ及相邻片段突变的研究

目的 建立用于分析 β珠蛋白基因外显子 1及相邻片段突变的变性梯度凝胶电泳 (DGGE)技术。 方法 应用巢式PCR扩增 2 0例 β地贫病人的 β珠蛋白基因外显 1及相邻片段 ,通过垂直DGGE及time -travelDGGE确定并优化平行DGGE条件 ,然后对样本进行平行DGGE分析。 结果 2 0例样本 β珠蛋白外显子 1及相邻片段上的三种突变均能被检出。 结论 所建立PCR -DGGE技术可用于准确检测 β珠蛋白基因外显子

β珠蛋白基因3′UTR+101G>C(HBB:c.*233G>C)变异的遗传学效应分析

目的:探讨β珠蛋白基因3′UTR+101G>C(HBB:c.*233G>C)变异是否具有遗传学效应,为地中海贫血的基因诊断和遗传咨询提供依据。方法:应用全血细胞分析和毛细管电泳进行血液学指标分析,采用PCR-流式荧光杂交法检测中国南方人群常见的23种地中海贫血相关突变,采用一代测序方法检测β珠蛋白基因(HBB)的其他变异位点。结果:在463个进行HBB基因测序的病例中共检测到7个病例携带HBB:c.*233G>C变异,其中4例同时携带HBB基因其他致病性变异(2例反式排列,2例顺式排列),均为典型的轻型β地中海贫血的血液学特征,3例同时携带异常血红蛋白变异,均不具有β地中海贫血的血液学特征。结论:本研究的数据显示HBB:c.*233G>C变异无明显遗传学效应,应为多态性位点。

小剂量去铁胺治疗重型β珠蛋白生成障碍性贫血铁负荷过重临床分析——附20例报告

目的：探讨小剂量去铁胺治疗重型β珠蛋白生成障碍性贫血（珠贫）患者铁负荷过重的疗效：方法：20例重型β珠贫铁负荷过重患者，采用小剂量去铁胺（每次10～20mg/kg，每半个月或1个月用药1次）驱铁治疗8个月.分别于治疗前和治疗8个月后检测血清铁和铁蛋白水平，并监测其不良反应。结果：与治疗前相比，治疗8个月后患者的血清铁和铁蛋白均明显下降（均为P〈0．01）.治疗前后患者的肝、肾功能无明显变化，无发生其它不良反应.结论：应用小剂量去铁胺长期治疗重型β珠贫铁负荷过重．驱铁效果较好且安全.

南宁某城区6551例β珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果分析

目的了解广西南宁江南区人群β珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)点突变的基因型特点。方法采用反向斑点膜条杂交技术对6 551例受试者进行β地贫基因分析。结果在6 551例受检者中检出β地贫基因1 242例,其中杂合子1 238例,双重杂合子3例,纯合子1例。共发现11种β地贫基因突变位点,共15种基因类型,其中最为常见的是CD41-42(561例),其次是CD17(339例)、-28(97例)、IVS-Ⅱ-654(75例)、β~E(72例)、CD71-72(53例)、IVS-Ⅰ-1(26例)、CD43(10例)、-29(3例)、CAP(1例)、CD27/28(1例)、CD41-42位点复合β~E位点(1例)、CD41-42位点复合CD17位点(1例)、CD17位点复合β~E位点(1例)、β~E位点纯合子(1例)。结论南宁市江南区人群β地贫基因携带者较多,绝大多数为杂合子,以CD41-42基因型最为常见,极个别为中间型或重型β地贫。

中国罕见的移码突变型β珠蛋白生成障碍性贫血家系调查

目的 鉴定一位育龄妇女所携带的在中国人中罕见的β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变并对其家系进行研究.方法 将先证者及其他3位家系成员（父亲、母亲与丈夫）一起作为调查分析对象.血液学表型分析采用常规红细胞指数及高效液相色谱技术（HPLC）;α与β珠蛋白生成障碍性贫血常规基因检测分别采用Gap-PCR和反向点杂交法（RDB）.另外对常规基因检测不能确诊的β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变进行β珠蛋白基因序列测定.结果 先证者及其父亲具有典型的β珠蛋白生成障碍性贫血血液学表型,RDB法未检测出已知的β珠蛋白生成障碍性贫血突变类型,测序显示这两位家系成员的β珠蛋白基因共缺失CD89-CD92全部的密码子和CD93第1与第2位的核苷酸（-AGTGAGCTG-CACTG,-14bp）,并发生了移码突变,使CD89位上提前出现终止密码子TGA;先证者丈夫基因型为CD41-42（-TCTT）/N.结论 CD89-93（-14bp）移码突变在中国人群中属于比较罕见的β珠蛋白生成障碍性贫血类型,其在β珠蛋白生成障碍性贫血高风险家庭中的检出,对β珠蛋白生成障碍性贫血的产前诊断工作有参考价值.

5种鲤形目鱼的β珠蛋白基因cDNA的克隆

根据β珠蛋白的N末端和C末端氨基酸序列的保守性设计20bp长的简并引物,用RT PCR方法扩增并克隆了鲤(Cyprinuscarpio)、草鱼(Ctenopharyngodonidellus)、鲫(CarassiusauratusLinnaeus)、泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus)、大鳞副泥鳅(Paramisgurnusdabryanus)5种鲤形目鱼的β珠蛋白基因cDNA。结果表明,克隆的5种鲤形目鱼的β珠蛋白基因cDNA全长为441bp。但它们所编码的氨基酸序列却有较大的差异,鲤和泥鳅的序列相似性最高,达97.93%,而泥鳅和大鳞副泥鳅的相似性最小,仅有80.68%,其余的相似性介于二者之间。

2型腺相关病毒转导人胎肝造血细胞及其介导的β珠蛋白基因的表达(英文)

β地中海贫血是一种因β珠蛋白基因缺陷导致的遗传性贫血性疾病,基因治疗是唯一有望治愈该病的方法.2型腺相关病毒(adeno-associated virustype2,AAV2)是一种非致病性病毒,作为一种基因治疗载体,其应用潜力日益受到关注.目前还未见AAV2转导人早期胎肝造血细胞及其介导β珠蛋白基因在动物体内表达的实验报道.有研究表明,AAV2转导人造血干细胞的效率,因各实验室包装和纯化rAAV2的方法不同而存在差异,其中辅助病毒的污染被认为是一重要原因.制备了无辅助病毒污染的rAAV2,经体外检测其滴度,纯度及功能后,再转导人早期胎肝造血细胞,将被转导的胎肝造血细胞移植入受亚致死量剂量照射的8只BALB/C裸鼠体内,检测rAAV2介导的β珠蛋白基因在裸鼠体内的表达.结果显示:制备的无辅助病毒污染的rAAV2具有较高的滴度、纯度,并能够在体外介导β基因的表达;在8只受试BALB/C裸鼠中,RT-PCR在2只BALB/C裸鼠骨髓中检测到β珠蛋白基因的表达.提示,rAAV2能够转导人早期胎肝细胞并介导β珠蛋白基因的表达,但同时也存在表达量较低的缺点,应用于β地中海贫血的基因治疗还需要对AAV2生物学特性做深入的研究.