云南汉族异常血红蛋白Hb G-Taipei患者临床表型及基因型分析

目的探讨云南德宏地区汉族异常血红蛋白Hb G-Taipei患者的临床表型和分子遗传学特征。方法收集云南德宏地区3个家系中7例汉族Hb G-Taipei突变携带者的外周血样本,血液学常规检测血细胞参数,血红蛋白电泳分析不同类型的血红蛋白,常见α/β地贫突变检测及基因DNA测序检测β珠蛋白基因(HBB)及珠蛋白突变,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术分析HBB基因簇单倍型特征及β链基因突变的源流。结果3个家系共检测出7例异常血红蛋白Hb G-Taipei(HBB:c.68 A>G,Glu>Gly)患者,均有Hb D异常血红蛋白电泳条带,其中1例先证者为突变纯合子,其Hb D带比例(96.3%)较杂合子患者(37.0%~40.2%)明显升高。在1个家系中检测出Hb G-Taipei/-α3.7复合突变类型。Hb G-Taipei杂合子临床表现大多为无症状,有1例合并缺铁者表现为轻度小细胞低色素贫血;1例纯合子未表现出贫血表型。-α3.7突变与Hb G-Taipei的复合突变表现为无明显贫血症状。无亲缘关系的患者之间存在相同HBB基因簇单倍型[------+]。结论Hb G-Taipei突变产生异常Hb D血红蛋白电泳条带,患者临床表现为从无症状到轻度贫血。Hb G-Taipei杂合子或纯合子与静止型α地贫共遗传时均不呈现明显贫血表型。云南德宏地区汉族人群中的Hb G-Taipei突变可能具有共同的来源。

云南傣族、阿昌族中β珠蛋白基因簇多态性研究

目的了解云南傣族和阿昌族β珠蛋白基因簇多态性及单倍型分布特征。方法获取云南183例傣族和89例阿昌族样本,通过经典的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法对β珠蛋白基因簇上7个多态性酶切位点进行基因型和单倍型分析。结果在傣族样本中,β珠蛋白基因簇7个多态性酶切位点组成的单倍型共23种,其中以1型(+----++)和6型(+++++++)最为多见,频率分别为0.301和0.137;而在阿昌族样本中,单倍型共27种,以6型(+++++++)和18型(++--+++)最为多见,频率分别为0.180和0.090,且在两个民族中所占比例均较高的单倍型6型(+++++++)尚未在其他研究群体中被报道。云南傣族群体中频率最高的单倍型1型(+----++)在世界其他地区的研究群体中也属于较常见的类型。结论云南傣族与阿昌族的β珠蛋白基因簇存在明显的多态性,单倍型分布在两个民族间存在差异,可能与这两个民族的起源、基因变异、基因流向和人口历史学因素等有关。

载脂蛋白E/CI基因簇与冠心病关系的研究

目的 探讨载脂蛋白(apo)E、apoCI基因簇多态性与人群冠心病的关系。方法 采用病例对照研究,apoE基因多态性检测用multi-ARMS快速分型法,apoCI基因启动子HpaI位点多态性采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,单倍型频率估计采用EH软件包。病例组186例,平均年龄(65.0±10.6)岁;对照组350名,平均年龄(63.6±8.3)岁。结果 病例组apoE基因E4/3基因型(26.9％)和ε4等位基因型(14.5％)频率显著高于对照组(12.6％,7.0％),P<0.05。apoCIHpaI位点病例组H2等位基因频率及携带H2等位基因的基因型频率均显著高于对照组。两基因分布在病例组存在显著的连锁不平衡,P<0.01;病例组ε3-H2(16.0％)、ε4-H1(11.6％)和ε4-H2(3.0％)单倍型频率显著高于对照组(9.4％、6.2％、0.8％);apoE-ε4/apoCI-H2单倍型对冠心病发病的贡献率为9.87％。结论 ε4及H2等位基因连锁能显著增加患冠心病的危险性。

5′HOXD基因与单纯性马蹄内翻足的相关性分析

目的检测HOXD10、HOXD12、HOXD13基因内4个已知单核苷酸多态(single nucleotide poly-morphisms,SNP)rs2593778、rs847154、rs847151、rs13392701在单纯性马蹄内翻足核心家系中的分布情况,分析各个SNP位点及所构成单倍型与单纯性马蹄内翻足的相关性。方法应用限制性片段长度多态性技术结合测序,分析84个单纯性马蹄内翻足核心家系4个SNP位点基因型;应用ETDT软件统计分析各SNP位点基因型与单纯性马蹄内翻足的相关性;应用TRANSMIT软件构建单倍型并统计分析单倍型频率是否存在差异。结果位于HOXD12基因5′侧翼序列的SNP位点rs847154和位于HOXD13第1外显子的SNP位点rs13392701在单纯性马蹄内翻核心家系中存在传递不平衡(P<0.05);位于HOXD12基因第1外显子的SNP位点rs847151未检测到多态;位于HOXD10第1外显子的SNP位点rs2593778经ETDT分析无统计学意义。结论HOXD12基因5′侧翼序列的SNP位点rs847154和位于HOXD13第1外显子的SNP位点rs13392701与单纯性先天性马蹄内翻足有明显的相关性,提示HOXD12、HOXD13可能是单纯性马蹄内翻足重要的易感基因。

无创产前诊断技术应用于地中海贫血的研究进展

地中海贫血是世界上最常见的单基因隐性遗传病之一,主要分为α和β两种类型,另外还有部分罕见稀有型。该类疾病在热带和亚热带地区的发病尤为显著,在我国广东地区α和β地贫基因携带率均高达10%以上。其发病机制为相关基因缺陷导致珠蛋白生成障碍引起相应的贫血症状。

两例罕见β~0-地中海贫血突变Codon41(-C)的鉴定

目的分析2例中国人中罕见的β地中海贫血突变类型。方法对来自云南的两例无亲缘关系、血液学表型与常见地中海贫血基因突变检测结果不符的疑似β地中海贫血样本,采用聚合酶链反应(PCR),Sanger DNA测序和TA克隆测序进行HBB基因突变的鉴定;采用PCR-限制酶切片段长度多态(PCR-RFLP)技术分析β株蛋白基因簇的单倍型和突变源流;建立检测罕见基因突变的单管四引物扩增阻滞PCR(Tetra-primerARMS-PCR)方法,调查云南428例随机傣族样本中罕见基因突变的携带率。结果来自云南地中海贫血流行区的1例汉族和1例傣族患者分别呈现轻度和中度小细胞低色素贫血表型,HbA2和胎儿血红蛋白HbF增高;DNA分析检出罕见β地中海贫血突变Codon41(-C)(HBB:c.126delC),2贫血病例的基因型均为突变杂合子;该突变首次在中国人中报道,其β珠蛋白基因簇单倍型与泰国人中报道的相似;在同一地区的428例傣族样本中未检测到该突变,突变携带率<0.23%。结论 Codon41(-C)是中国人中罕见的地中海贫血突变,可能与泰国傣族人中的突变具有共同源流,可疑患者需要进行基因检测以避免漏诊或误诊,地贫流行区的携带者应进行遗传咨询以减少重症地贫患儿出生。