BAC介导的含97kb人β类珠蛋白基因簇转基因鼠模型的建立

目的 利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,修饰含全长人β珠蛋白基因簇及一段IL-11受体α链基因的(?)C(细菌人工染色体)克隆,建立只包括全长人β珠蛋白基因簇的转基因鼠模型。方法 分别在待删除片段上、下游用PCR合成500 bp左右的两段同源序列,共同克隆人构建载体pBV的HindⅢ和XbaⅠ位点之间,然后以SalⅠ酶切后将此1 kb的插入片段再克隆入温度敏感型穿梭载体pSV-RecA中,转化含B5-BAC DNA的感受态大肠杆菌DH10B,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸(FA)负筛选,获得发生两次同源重组后只含修饰后的BACDNA而穿梭载体已丢失的菌株。经脉冲场凝胶电泳鉴定后,纯化修饰的BAC DNA,经显微注射受精卵制备转基因鼠,分析其中的人β珠蛋白基因簇整合和表达状况。结果 利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,获得了IL-11受体α链基因被定位删除的含完整人β珠蛋白基因簇的BAC克隆(命名为βD-BAC),建立了3株独立的转基因鼠株系。结论 新的BAC介导的转基因鼠中的人β珠蛋白基因簇显示正确的表达模式和水平。

羟基脲诱导前后HEL细胞内GATA转录因子与人β—类珠蛋白基因调控元件的结合模式分析

HEL细胞是一株人红白血病细胞株,其中成年型β-珠蛋白基因不能表达。我们以往的试验证明,羟基脲诱导以后,能使HEL细胞内成年型β-珠蛋白基因表达。本文以此为模型,探索了β-珠蛋白基因在HEL细胞内诱导表达的分子机制。结果表明,羟基脲诱导之后,与人β-珠蛋白基因5’远侧端DNaseⅠ超敏感点2核心DNA序列以及近侧端启动子DNA序列相结合的GATA-1蛋白因子量明显增多,而GATA-2蛋白因子量明显减少。结果显示,GATA蛋白家族各成员在HEL细胞分化及珠蛋白基因表达的过程中扮演着不同的角色。推测GATA-1可能有促进β-珠蛋白基因的表达,使HEL细胞趋向终末分化的作用,GATA-2则可能与胚胎型珠蛋白基因表达有关,并有抑制红细胞向终末分化的功能。