改进的一步法提取昆虫总RNA(英文)

用修改了的异硫氰酸胍法从两种森林昆虫Clostera an-astomosis和Saperda populnea的不同组织中快速提取总RNA。电泳检测和cDNA合成分析结果表明,RNA未降解。经紫外分光光度计检测,A260/A280在1.8到2.0之间,表明RNA的纯度很高。用RT-PCR合成的双链cDNA的长度大于2kb,表明mRNA的完整性。用PCR的方法克隆了C.anasto-mosisβ肌动蛋白和几丁质酶的基因片段,表明RNA可用于其它分子操作。使用这个方法,在4个小时内可至少从8个样品中提取RNA并进行电泳分析。这些结果表明用这个修改后的一步法提取昆虫总RNA是省时,省钱和有效的。图3参10。

巨细胞病毒启动子序列检测的复合实时定量PCR方法的建立

目的：建立和验证用于巨细胞病毒（CMV）启动子序列检测的复合实时定量 PCR 方法。方法以 CMV 启动子序列和小鼠管家基因β肌动蛋白基因的 cDNA 序列为模板分别设计探针和引物，用 SYBR GreenⅠ熔解曲线分析引物扩增的特异性。对反应体系进行系统优化，并验证方法的灵敏度、线性和重复性。结果针对 CMV 启动子序列的上游引物为5′AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT3′，下游引物为5′CG-TATTAGTCATCGCTATTACCATGGT3′，探针为5′AACCGCTATCCACGCCCATTGATG3′。针对β肌动蛋白基因的上游引物为5′CCTGAGGCTCTTTTCCAGCC3′，下游引物为5′TAGAGGTCTTTACGGATGT-CAACGT3′，探针为5′TCCTTCTTGGGTATGGAATCCTGTGGC3′。用 CMV 启动子标准品制作的标准曲线，反应效率为100％，相关系数为0．9978，定量范围达到1．5＆#215;102～1．5＆#215;107拷贝，反应体系灵敏度为30拷贝。结论建立了检测 CMV 启动子序列的复合实时定量 PCR 方法。