β趋化因子受体CCR1在遗传性视网膜变性小鼠视网膜中的表达

目的探讨β趋化因子主要的受体之一β趋化因子受体1(CCR1)在视网膜变性模型小鼠(rd小鼠)的视网膜变性过程中的表达及其在感光细胞凋亡中的病理作用。设计实验研究。研究对象出生后8、10、12、14、16及18天的rd小鼠各10只(共60只)及同龄C57BL/6N对照小鼠各10只(共60只)。方法小鼠断颈处死,取双眼眼球制作冰冻切片或分离新鲜视网膜组织。逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定各鼠龄rd小鼠及对照鼠视网膜CCR1mRNA的表达水平。免疫组织化学法观察CCR1蛋白在各鼠龄rd小鼠视网膜的定位表达。CCR1在感光细胞及凋亡细胞中的表达由免疫荧光双标法确定。主要指标视网膜CCR1mRNA及蛋白的表达、CCR1的细胞定位及与凋亡细胞的关系。结果 CCR1mRNA在对照组及各鼠龄rd小鼠视网膜中均有表达,但在出生后12、14天rd小鼠视网膜中表达明显升高(光密度值分别为0.986±0.17和1.152±0.22,P=0.010和0.008)。CCR1阳性染色细胞开始出现于出生后8天的rd视网膜外核层,并于12及14天达到高峰。对照组视网膜外核层无CCR1阳性染色。CCR1与视紫红质、CD11b或TUNEL染色免疫荧光双标结果显示,CCR1表达于感光细胞而非小胶质细胞中,部分CCR1表达于凋亡的感光细胞中。结论在rd小鼠视网膜中CCR1表达于感光细胞并随其变性程度加重表达升高。CCR1的活化可能在rd小鼠感光细胞凋亡中发挥作用。(眼科,2013,22:383-388)

β趋化因子及其受体在银屑病中的作用

银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病,发病机制复杂,病理表现为角质细胞异常增生分化、淋巴细胞浸润、微血管扩张等。趋化因子是一类由白细胞和某些基质细胞分泌的具有趋化炎症反应细胞定向迁移的作用的细胞因子,根据结构不同可分为4类,而β趋化因子作为其中一类已被发现通过与其特异受体结合,从而诱导免疫细胞迁徙进入皮损,参与了银屑病的多个发病环节。

克隆超基因家族中新基因的一种PCR同源引物

目的：用同源引物克隆ＲＮＡ低丰度表达的小鼠β－趋化因子受体。方法：将β－趋化因子受体小鼠ＭＩＰ－１αＲ，人ＭＣＰ－１Ｒ和大鼠ＩＬ－８Ｒ跨膜区中高度保守的氨基酸序列中的核苷酸进行相似序列对比后，设计出同源引物，再用ＲＴ－ＰＣＲ扩增出ＤＮＡ片段，经基因库检索为该超基因家族中的新基因序列后设计特异引物，用ＭａｒａｔｈｏｎＰＣＲ扩增出该新基因。结果：成功克隆出小鼠β－趋化因子受体５（ＣＣＲ５）ｃＤＮＡ全基因序列，序列全长２８８８ｂｐ，开放阅读框１０６５个核苷酸，编码３５５个氨基酸。该序列经序列分析、配体结合试验及国际基因库检索证实为该超基因家族中的一个新基因成员。结论：该克隆策略的引物设计思路较为新颖，能有效捕获超基因家族中的新基因。该克隆方法敏感、高效。