山羊β酪蛋白基因克隆及序列分析

用LongPCR技术克隆山羊 β酪蛋白 (CSN2 )全基因 13.7kb的序列 (GenBank登录号 :AF4 0 90 96 ) .利用PCR RFLP方法鉴定第 14和 192位氨基酸残基相应的核苷酸序列中出现的 2个多态性位点 ,其中第 192位氨基酸残基处的TspRⅠ位点是Saanen奶山羊CSN2基因中新发现的 1个多态性位点 .生物信息学方法分析山羊CSN2基因可见 ,非编码区中的SINE和LINE序列内含多种乳蛋白基因表达调控元件 。

利用Red同源重组系统进行牛β酪蛋白基因敲除

利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行乳腺生物反应器质粒构建的研究却未见报道。实验采用含有完整的牛β酪蛋白基因的CSN2质粒作为基因打靶的载体,设计不同的同源臂,成功地敲除了β酪蛋白基因的编码区。并且同时利用同源重组技术对敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。为进一步利用CSN2质粒两端的调控序列,插入新的基因,研究其表达功能,或者进行乳腺生物反应器的研究奠定了基础。

“米酒鸡”食疗方对产后缺乳母鼠催乳素受体及β酪蛋白表达的影响

【目的】探讨"米酒鸡"食疗方对产后缺乳母鼠催乳素受体及β酪蛋白表达的影响。【方法】将14只母鼠随机分为对照组、实验组共2组,每组7例。于产后第2~8天给予0.5 mg·kg·mL^(-1)·d^(-1)的溴隐亭灌胃复制产后缺乳模型。于产后第2天起,实验组给予"米酒鸡"食疗方(剂量为5 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,对照组于给予等体积生理盐水灌胃,灌胃7 d后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测产后母鼠催乳素(PRL)含量,采用苏木素—伊红(HE)染色法观察产后母鼠乳腺组织学改变,采用免疫组织化学法检测产后母鼠乳腺组织中催乳素受体(PRLR)及β酪蛋白表达。【结果】实验组母鼠乳腺腺泡数目、腺泡管腔直径较对照组明显增加,PRL含量,PRLR、β酪蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05或P<0.01)。【结论】"米酒鸡"食疗方可使产后缺乳母鼠的PRLR及β酪蛋白阳性表达增强,促进乳腺上皮细胞增殖和乳腺发育。

重组β酪蛋白磷酸肽二聚体基因的构建、表达及其生物活性分析

生物活性短肽 β酪蛋白磷酸肽 (β CPP)能够增加细胞对二价离子的吸收、促进受精过程并对细胞增殖产生影响 .为深入研究其生物学功能 ,采用基因工程方法得到β CPP的二聚体基因并构建真核表达载体 ,转染CHO细胞建立稳定表达细胞系 .鉴定纯化所表达产物 ,考察表达产物对精子细胞内游离Ca2 + 水平、细胞增殖和细胞凋亡等方面的影响 .结果表明 ,重组 β CPP二聚体能够显著增加精子细胞对Ca2 + 的吸收、促进脾细胞的增殖并诱导某些肿瘤细胞的凋亡 。

牛β-酪蛋白座位无启动子基因打靶载体的构建

将带有新霉素基因(neo)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的质粒pEGFP-C1进行了改造,去掉neo基因的启动子(Psv40),在无启动子的neo和完整的GFP基因两侧分别加入一个LoxP位点。然后将带有LoxP位点、筛选标记基因和报告基因的结构装入左右分别为牛β-casein基因1590bp和5833bp的同源臂结构中,构建成无启动子基因打靶载体pT-1590-LoxP-GFP-LoxP-5833。

奶水牛β-酪蛋白启动子的克隆及其序列分析

目的:克隆水牛乳腺β-酪蛋白启动子。方法:分离提取水牛乳腺组织DNA,PCR扩增目的片段,T-A克隆,核酸自动测序。结果:所克隆的DNA片段包含CAAT、TATA信号区,孕酮调节区等,100%同源于黑白花奶牛β酪蛋白启动子序列。结论:所克隆DNA片段是奶水牛β-酪蛋白基因上游调控序列。

与脐带间充质干细胞共培养促进奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成及其机制

目的研究脐带间充质干细胞(UCMSC)调节奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)乳蛋白合成的可能作用机制。方法利用TranswellTM小室将UCMSC和BMEC进行双层共培养,BMEC单纯培养为对照组,胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂AG1024处理细胞,ELISA检测上清IGF-1和β酪蛋白(CSN2)、κ酪蛋白(CSN3)含量变化,实时定量PCR检测Janus激酶2/信号转导子与转录激活子5(JAK2/STAT5)信号通路相关基因的相对表达丰度;再用JAK2信号通路阻断剂AG490孵育细胞,实时定量PCR检测CSN2、CSN3 mRNA的相对表达丰度。结果与UCMSC共培养后,BMEC的CSN2、CSN3合成量和CSN2、CSN3、JAK2、STAT5、E74样ETS转录因子5(ELF5)mRNA相对表达丰度均显著高于单纯培养的BMEC;AG1024处理后,显著降低BMEC的CSN2、CSN3合成量,显著降低CSN2、CSN3、JAK2、STAT5、ELF5 mRNA的相对表达丰度;给予AG490阻断后,显著降低CSN2、CSN3 mRNA相对表达丰度;在AG1024基础上,加入AG490后显著降低CSN2、CSN3 mRNA相对表达丰度。结论UCMSC能够通过IGF-1介导JAK2/STAT5信号通路,上调BMEC乳蛋白合成关键基因mRNA的表达丰度,促进其乳蛋白的合成。

乳腺特异表达载体缺失片段的鉴定与修复

通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89^-94和-120^-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112^-141)和一个乳腺因子识别序列(-92^-102)遭到破坏,并使得位于TATA框上游的所有启动子成分发生了位置改变。通过与山羊β酪蛋白启动子序列进行比较,设计并合成了缺失片段,经一系列的酶切和连接处理,使得该缺失得到了修复,修复后的载体具有所有乳蛋白表达需要的启动子调控原件。本试验结果为利用修复后的乳腺特异高效表达载体进行乳腺生物反应器的研究奠定了分子生物学基础。

君乐宝推出全球首款全产业链A2型奶牛奶粉

2019年12月1 0日,全球首款自有牧场全产业链A2型奶牛奶粉——君乐宝至臻A2奶粉上市发布会在石家庄举行。该奶粉的原料奶取自数量约为30%的A2纯合基因奶牛,并是全球首家采用自有牧场、自有工厂的全产业链模式生产的A2型奶牛奶粉。该奶粉的诞生打破了国外品牌对于A2-β酪蛋白奶粉品类的垄断,为中国妈妈提供更好的选择。