甲醛和β-丙内酯对禽流感病毒血凝抑制抗原灭活效果的比较

为研究甲醛和β-丙内酯对H9N2亚型禽流感病毒的灭活效果,将H9N2亚型禽流感WD株稀释接种SPF鸡胚,收获尿囊液,测定血凝价(HA)为10log2,浓缩后HA为12log2,分别进行甲醛及β-丙内酯灭活后加40%保护剂冻干保存。对制备的抗原进行真空度、性状检验、无菌检验、HA效价测定、特异性实验、稳定性实验,各项检验结果均合格;对灭活抗原进行HA检测。结果表明:甲醛灭活后HA下降2个滴度,冻干后又下降1个滴度,β-丙内酯灭活后HA下降1个滴度、冻干后HA保持不变;经甲醛灭活冻干后的抗原-20℃保存至3个月HA开始下降,2~8℃保存至9个月HA开始下降,β-丙内酯灭活冻干后的抗原2~8℃及-20℃放置18个月效价无变化,到21个月效价略有下降。本试验表明,经β-丙内酯灭活冻干后的H9N2亚型禽流感抗原保存时间长、稳定性好,可作为血凝抑制抗原。

大鲵虹彩病毒β-丙内酯灭活方法的研究

为探讨β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)灭活大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的最适条件,研究了BPL对GSIV的灭活方法。采用终浓度分别为0.025%、0.05%、0.1%、0.2%的BPL灭活细胞培养的GSIV,4℃条件下分别灭活24 h、48 h、72 h、96 h,通过细菌培养、细胞培养、病毒核酸PCR扩增以及鱼体感染试验进行灭活病毒的安全性检验,确定最适灭活条件。试验结果表明,GSIV经终浓度为0.1%的BPL 4℃灭活处理72 h后可完全灭活病毒,灭活病毒无细菌污染,接种对GSIV敏感的鲤上皮瘤细胞系(EPC)细胞无细胞病变效应(CPE)出现,病毒主衣壳蛋白(MCP)基因特异性引物PCR反应未扩增出靶基因产物,灭活病毒对健康大鲵的感染试验未出现疾病症状。灭活效果检测结果表明,与未灭活GSIV相比较,最适灭活条件下的GSIV结构蛋白与抗原性未发生显著变化。结论显示BPL可用来灭活GSIV,本研究确立了BPL灭活GSIV的最适条件,为大鲵虹彩病毒细胞培养灭活疫苗研究奠定了重要基础。

β-丙内酯在Vero细胞HFRS疫苗中的应用

目的 探讨 β -丙内酯灭活双价Vero细胞肾综合征出血热纯化疫苗的最佳条件。 方法 采用不同终浓度的 β-丙内酯和不同的灭活时间对疫苗进行灭活 ,用细胞培养法进行病毒增殖试验 ,以确定灭活效果。应用高效液相色谱法分析 β -丙内酯的最佳水解条件和 3批双价vero细胞出血热纯化灭活疫苗 β-丙内酯残留量。检测 3批双价纯化灭活疫苗的免疫效果。结果 疫苗经终浓度为 1∶2 0 0 0和 1∶4 0 0 0的 β -丙内酯作用 2 4h ,均可完全灭活病毒 ;疫苗中的 β-丙内酯在 37℃水浴下 ,随着水解时间的延长 ,其含量逐渐下降 ,水解 2h后已无 β-丙内酯检出 ;3批经 β-丙内酯灭活的双价Vero细胞出血热纯化疫苗均未检出 β-丙内酯残留 ,在家兔体内诱导产生针对汉滩型和汉城型病毒的中和抗体效价均达到 1∶2 0。结论 肾综合征出血热纯化疫苗经终浓度为 1∶4 0 0 0 β -丙内酯 4℃灭活 2 4h ,然后再于 37℃水浴中水解 2h ,既可达到完全灭活病毒且无 β-丙内酯残留的目的 ;

β-丙内酯的反应性分析

利用原子键电负性均衡方法研究了β丙内酯与不同亲核试剂的反应性.研究表明,Fukui函数不是决定反应选择性的唯一因素,而局域意义的软硬酸碱原理可用来理解此类反应性.

甲醛和β-丙内酯灭活轮状病毒的效果

目的探讨甲醛和β-丙内酯灭活轮状病毒的效果。方法采用甲醛和β-丙内酯灭活轮状病毒,通过微量滴定法检测灭活病毒滴度变化,盲传3代验证病毒灭活效果,电镜检测灭活轮状病毒的结构,ELISA评价灭活轮状病毒诱发小鼠血清抗体水平等。结果甲醛灭活72 h和β-丙内酯灭活24 h,轮状病毒被完全灭活;灭活的病毒结构保持完整,免疫小鼠可诱发血清轮状病毒特异性抗体,且与灭活前无显著差异。结论甲醛和β-丙内酯均可有效地灭活轮状病毒。

气相色谱法对轮状病毒疫苗中β-丙内酯测定的研究

用气相色谱法对轮状病毒疫苗生产过程中采用的β?丙内酯灭活剂进行残留量的检测,检测结果表明:采用HP-INNOWAX毛细管色谱柱(15m×0.53mm×1.0μm),氢火焰检测器检测轮状病毒疫苗中β?丙内酯是极其灵敏的,该法最低检测限为:1.43×10-4μl/μl。实验还证明:轮状病毒疫苗中已不存在β?丙内酯。

应用β-丙内酯灭活双价Vero细胞肾综合征出血热病毒纯化疫苗

为探讨β-丙内酯灭活双价Vero细胞肾综合征出血热(HFRS)纯化疫苗的最佳条件,采用不同终浓度的β-丙内酯和不同的灭活时间对疫苗进行灭活,用细胞培养法进行病毒增殖试验,以确定灭活效果。采用高效液相色谱法检测和分析β-丙内酯的最佳水解条件,并测定了三批疫苗β-丙内酯残留量。结果显示,采用终浓度为1:4000β-丙内酯4℃灭活24h,然后再于37℃水浴中水解2h,可达到完全灭活HFRS纯化疫苗,且无β-丙内酯残留的目的。

β-苄氧羰基-β-丙内酯的合成

以L-苹果酸与乙酰氯反应生成环状酸酐,酸酐开环同时通过苄醇酯化保护羧基,再经Mitsunobu反应环化得到β-丙内酯,并对其结构进行了鉴定。

可修饰的内酯，α-氯甲基-α-甲基-β-丙内酯的合成和聚合

可修饰的内酯，α－氯甲基－α－甲基－β－丙内酯的合成和聚合＊王明霞李子臣贺晓晖杨丽＊＊李福绵（北京大学化学系北京１００８７１）关键词α－氯甲基－α－甲基－β－丙内酯，开环聚合＊１９９５－０２－２０收稿；１９９６－０３－１２修回：自然科学基金课题；＊＊...

β-丙内酯在人用纯化地鼠肾细胞狂犬疫苗制备中的应用研究

我们将β－丙内酯（简称ＢＰＬ）用于人用纯化地鼠肾细胞狂犬疫苗的灭活，虽然ＢＰＬ是一种致癌物，但极易水解，用毛细管气相色谱法检测含ＢＰＬ的疫苗在３７℃水浴中水解０ｈ、０．５ｈ、１．０ｈ、１．５ｈ、２．０ｈ 时的含量（ｐｐｍ ）分别为２６２．０、７０．０、１３．０、５．１，未检出，结果表明疫苗中的ＢＰＬ随水解时间延长，其含量逐渐变小，２ｈ 以后彻底消失，这为我们应用ＢＰＬ灭活狂犬病毒所需水解时间提供了科学依据。用病毒灭活试验及病毒增殖试验的常规方法对用ＢＰＬ灭活后的疫苗进行有效性实验，结果小白鼠均健康存活，这表明已无活病毒存在。

气相色谱法检测灭活狂犬病毒浓缩液中残留的β-丙内酯

目的：建立检测灭活狂犬病毒浓缩液中残留的β-丙内酯的方法。方法：采用直接进样的气相色谱法。色谱柱为HP—DB624毛细管柱，程序升温；采用氢火焰离子化检测器（FID），载气为氮气，流速为1．0ml／min；氢火焰离子化检测器温度为250℃，进样口温度为150℃。以乙腈为对照品稀释溶剂，样品溶液经离心后直接进样。结果：乙腈和样品中其他成分对β-丙内酯的测定无干扰。β-丙内酯的检测质量浓度线性范围为1．082-1082．0μg／ml（r=0．9994）；检测限和定量限分别为0．2、1．0ng：方法精密度和耐用性良好。在4批样品中未检出残留的β-丙内酯。结论：建立的方法操作简便、通用性强，可满足灭活狂犬病毒浓缩液中残留的伊丙内酯监控的需要。

β-丙内酯对狂犬病病毒的灭活效果

狂犬病是一种由狂犬病病毒（RV）感染引起的高度致死性脑脊髓炎，一旦发病，病死率几乎高达100％，预防接种狂犬病疫苗是控制狂犬病的最有效方法。目前，人用狂犬病疫苗均为灭活疫苗，其灭活剂主要有β-丙内酯（BPL）和甲醛1。虽然BPL早已应用于狂犬病疫苗生产，但未见其对狂犬病毒的灭活曲线的研究报道。我们对不同浓度BPL灭活RV的效果、灭活曲线等进行研究，现将结果报道如下。

β-丙内酯对流感病毒鸡胚高产母本株灭活条件的研究

目的 流感病毒鸡胚高产母本株A/PR8/34株和X-157株灭活条件的研究.方法 应用改良后的β-丙内酯灭活法对流感病毒鸡胚高产母本株进行灭活.经试验证明,0.5‰β-丙内酯在37℃水浴,pH值范围在7.4-8.0之间条件下作用2h.补加0.5‰β-丙内酯,pH值为9,温度为4℃条件下过夜,能彻底灭活且保证流感病毒表面主要抗原的完整性.结果 采用改良后的β-丙内酯灭活法对流感病毒鸡胚高产母本株A/PR8/34株和X-157株灭活效果良好,鸡胚3代安检合格.灭活前后病毒血凝滴度不变.结论 改良后的β-丙内酯灭活法可用于流感病毒鸡胚高产母本株的灭活.

甲醛和β-丙内酯灭活柯萨奇病毒A组16型效果比较

柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）是人手足口病的主要病原体，尽管多数病毒引起的临床症状较轻，但最近一些研究表明CoxA16也像EV71一样能引发严重的疾病，

β-丙内酯含量气相色谱检测方法的建立及其水解情况分析

目的建立检测β-丙内酯(BPL)含量的气相色谱法,并分析其水解情况。方法用气相色谱法检测BPL的含量,确定线性范围及定量限,验证该方法的重复性及专属性,并分析37℃条件下BPL的水解趋势。结果气相色谱法检测BPL含量的线性范围为8.9～566.9ppm,定量限为8.9ppm,重复性和专属性均良好。37℃条件下水解120min,BPL含量下降至初始浓度的19%。结论建立了检测BPL含量的气相色谱法,该方法准确可靠,可用于病毒疫苗生产过程中BPL含量的检测,为病毒灭活工艺验证提供了依据。

气相色谱法对狂犬病疫苗灭活工艺中β-丙内酯研究

目的:基于GC-FID法,对狂犬病疫苗生产过程中采用的β-丙内酯灭活剂进行了含量及稳定性研究。方法:气相色谱条件,采用Agilent DB-624(30m×0.530mm×3.00μm)毛细管柱;升温程序,初始温度为80℃,保持1min,以20℃/min的速率升温至200℃,保持3min;色谱柱流量,3ml/min;检测器温度,250℃;进样口温度,150℃;载气,氮气,线速度,25cm/s;进样量,1μl,分流比为2∶1;进样方式,手动进样。结果:以乙腈作为稀释剂,BPL在1∶100~1∶32 000范围内线性关系良好(R 2≥0.999)。在1∶200、1∶1 000、1∶8 000 三个浓度水平下,加标回收率在95.04%~116.86%,相对标准偏差(RSD)为2.6%~3.2%,检测限为0.112μg/ml。结论:方法简便、专属性强、稳定且在室温条件下操作,大大降低了对试验条件和技术操作的要求,能够满足灭活狂犬病病毒工艺中对BPL检测的需求。

气相色谱法检测灭活狂犬病病毒浓缩液中β-丙内酯的含量

目的建立气相色谱法检测狂犬病病毒浓缩液中β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)含量,分析BPL在灭活和水解过程中含量的变化。方法气相色谱条件:初始温度80℃,保持1 min,以20℃/min的速率升温至200℃,保持5 min;检测器温度为250℃;进样口温度为150℃;载气为氮气,流速为1 ml/min;进样量为1μl。验证该方法的专属性、重复性和耐用性,绘制标准曲线并确定检测限和定量限。利用该方法检测BPL以1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000进行灭活和水解过程中含量的变化。结果气相色谱法检测狂犬病病毒浓缩液中BPL含量具有良好的专属性、重复性和耐用性,线性范围在572.86~8.95μg/ml,定量限为1.145μg/ml,检测限为0.229μg/ml。以不同比例的BPL对狂犬病病毒浓缩液进行灭活,72 h后其含量均高于定量限,水解1 h后BPL含量均低于检测限。结论建立了BPL含量气相色谱检测方法,该方法准确可靠,可用于狂犬病疫苗生产过程中BPL含量的检测,为病毒灭活工艺验证提供了数据支持。

新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)中β-丙内酯残留气相色谱检测方法的建立、优化及验证

目的建立新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)中β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)残留量的气相色谱检测方法,并进行优化及验证。方法气相色谱条件:进样口温度为180℃,分流比为2∶1,载气为氮气,检测器温度为250℃,运行时间为10 min。对柱温条件(升温程序和等温程序)、流速(1和3 mL/min)和进样量(1和0.2μL)进行优化。同时验证方法的专属性、检测限及定量限、线性范围、重复性、耐用性。采用建立的方法检测新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)生产工艺中灭活和水解过程及疫苗原液中BPL含量的变化。结果最佳检测条件:柱温条件为等温程序,流速为3 m L/min,进样量为0.2μL。BPL对照品溶液与疫苗原液混合液的BPL峰保留时间为2.328 min,与BPL对照品溶液一致,BPL对照品溶液连续6次进样的峰面积和保留时间的RSD均≤4.0%,BPL对照品溶液在不同检测器温度及进样口温度条件下检测的峰面积和保留时间的RSD均≤4.0%,BPL对照品溶液在3.125~500μg/mL浓度范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,回归方程为y=1.3991 x-0.5586,相关系数(r)为0.9999,定量限为2.530μg/mL,检测限为0.843μg/mL。疫苗灭活过程中BPL含量高于定量限,水解后其含量远低于检测限,疫苗原液中未检测到BPL。结论建立了新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)中BPL残留含量的气相色谱检测方法,该方法具有良好的专属性、精密性及耐用性,可用于检测疫苗各生产环节中BPL的含量。

β-丙内酯残留量检测分析方法的建立及验证

目的建立准确快速检测灭活疫苗中β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)含量的分析方法。方法采用气相色谱法进行BPL含量检测,用外标法计算BPL含量。对分析方法的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性进行验证。结果BPL溶液和供试品溶液在相应保留时间内可见BPL峰,阴性对照溶液未出峰。BPL峰5次进样峰面积相对标准偏差小于2%且与其他峰分离度大于1.5。BPL的浓度在1.11~35.52μg/ml范围内与峰面积成线性关系。浓度分别为2.22、4.44和8.88μg/ml的供试品溶液回收率在97.3%~106.9%之间,相对标准偏差均小于3%。检测限为0.30μg/ml,定量限为0.49μg/ml。结论建立的BPL检测方法具有良好的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、耐用性,符合定量检测的需求。

气相色谱法对狂犬病疫苗灭活工艺中β-丙内酯研究分析

分析采用气相色谱法在狂犬病疫苗灭活工艺中β-丙内酯的含量监控。方法:采用直接进样的气相色谱法,满足气相色谱条件,如温度、载气、进样量、进样方式等,调整合理参数,乙腈作为稀释剂,将一定量的β-丙内酯作为标准储备液,通过梯度稀释的方法得到标准溶液,梯度范围包括:1:2000、1:8000、1:32000,最后利用气相色谱法进行综合检测,以准确度、精密度、专属性、重复性、耐用性以及β-丙内酯标准溶液不同浓度比例下的含量测定结果为验证标准,分析β-丙内酯在狂犬病疫苗灭活工艺中的含量变化情况。结果:β-丙内酯在1:2000~1:32000梯度范围中准确度、精密度、专属性、重复性以及耐用性水平良好,气相色谱法检测后发现,狂犬病疫苗灭活结束72后,不同浓度比例的β-丙内酯含量高于定量限。结论:气相色谱法存在良好的稳定性,且方法准确,在狂犬病疫苗灭活工艺的β-丙内酯含量监控中,实用性较强。